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HISTOQUIMICA
La histoquímica es la aplicación de reacciones
químicas y bioquímicas en la técnica histológica,
para localizar y establecer de forma científica
ciertas sustancias o su actividad. Las técnicas
histoquímicas comprenden el conjunto de métodos
empleados para la demostración de la naturaleza
química de los componentes tisulares y celulares.
Se recurre al empleo de estas tinciones
histoquímicas cuando se pretende visualizar
específicamente una sustancia determinada.
 Una tinción o coloración es una técnica
auxiliar utilizada en microscopía para
mejorar el contraste en la imagen vista
al microscopio. Los colorantes y tinturas
son sustancias que usualmente se utilizan
en biología y medicina para resaltar
estructuras en tejidos biológicos que van a
ser observados con la ayuda de diferentes
tipos de microscopios
 . Los diferentes colorantes pueden ser
utilizados para aumentar la definición y
examinar grandes cortes de tejido
(resaltando por ejemplo fibras
musculares o tejido conectivo), poblaciones
celulares(por ejemplo clasificando
diferentes células sanguíneas) o incluso
para resaltar organelas dentro de células
individuales
 En bioquímica, esto implica agregar un colorante
específico ( significa que de una de manera
selectiva ya sea
a ADN, proteínas, lípidos, carbohidratos, etc.) a
un sustrato para cualificar o cuantificar la
presencia de un determinado compuesto. Tanto
la tinción como el marcado fluorescente pueden
servir para los mismos propósitos.
 Diferentes tipos de tinciones biológicas son
utilizadas también para marcar células
en citometría de flujo y para marcar proteínas ó
ácidos nucleícos en electroforesis en gel.
 La mayoría de los colorantes son
compuestos orgánicos que tienen alguna
afinidad específica por los materiales
celulares. Muchos colorantes utilizados con
frecuencia son moléculas cargadas
positivamente (cationes) y se combinan con
intensidad con los constituyentes celulares
cargados negativamente (aniones), tales
como los ácidos nucleicos y los
polisacáridos ácidos.
 COLORANTES CATIONICOS:
 Azul de Metileno
 Cristales de Violeta
 Safranina
 COLORANTES ANIONICOS:
 Eosina
 Fucsina Acida
 Rojo Congo
 COLAGENO: Tricròmico de Masson , Gomori
y Van Gieson
 RETICULINA: Plata Amoniacal, ejemplo:
Método de Snook, Wilder y Manuel .
 ELASTINA: Hematoxilina Férrica: Método de
Verhoeff , Fucsina resorcina: Método de
Hart y Fucsina aldèhica: Método de Gomori
 Colágeno
 Colágeno, musculo y núcleos
 Fibras Elásticas
 Fibras de reticulina
 GLUCOGENO: Hígado, corazón y musculo
esquelético
 MUCINAS NEUTRAS: Células gástricas, glándulas
duodenales de Brunner.
 MUCINA SALIVAR: Glándulas salivares, células
muciparas del intestino y la mucosa gástrica.
 MUCINA ACIDA: Células mucìparas del intestino.
 SULFATO DE HEPARINA: Células
cebadas,mastocitos, aorta y tejido conectivo
cardíaco.
 ACIDO HIALURONICO: Cordón umbilical y tejido
conectivo de la dermis.
 Mucina neutra
 Mucina Acida
 Mucina
 Acido hialurònico y mucina salivar azul.
Las coloraciones de lípidos se efectúan
frecuentemente en
secciones obtenidas por congelación o tejidos fijados
.
METODO DE ACEITE ROJO.
 Los pigmentos son sustancias que tienen
color propio.
 Los pigmentos mas comunes presentes en los
tejidos son de color marrón o negro.
 Los métodos mas utilizados son: Warthin-
Starry para melanina , Método de hall para
bilirrubinas, método de Perls para hierro,
Método de Von Kossa para sales minerales y
método de Rodanina para localizar cobre.
 Reacción melanocìtica
 Cartílago
 Hierro
 La demostración de organismos infecciosos
en secciones de parafina y frotes a través de
técnicas especiales de coloración
constituyen un elemento de diagnóstico de
valor inestimable.
 La coloración de gram-negativa y gram-
positiva puede lograrse con los métodos de
coloración de gram disponibles. A pesar de
que la coloración requiere de colorantes y
descolorantes de diferentes concentraciones,
los procedimientos de tinción no varían en
forma significativa
 La coloración de Brown y Hopps y las de
Brown Brenn son las mas utilizadas.
 Estreptococos sp (azules)
 Brucella sp (rojo)
 Helicobacter Pylori
 Helicobacter Pylori
 Helicobacter Pylori
 Helicobacter Pylori
 Treponema Pallidum
 Micobacterias
 Auramina O
 Rodamina B
 Nocardia
 Los hongos son plantas que no tienen
tallo, hojas y raíces, y además carecen de
clorofila.
 La estructura de los hongos varían de
acuerdo a la clasificación, pueden ser
filamentosos alargadas llamadas hifas.
 Las enfermedades producidas por hongos
que infectan a los seres humanos pueden
agruparse en superficies como la piel, uñas o
sistemas invadidos u órganos.
 Entre las principales coloraciones para
hongos tenemos:
 GMS ............................. Aspergillius F.
 PAS............................... Cándida Albicans
 GIEMSA......................... Dermatofitos
 GRIDLEY FUNGUS.......... Blastomicetos
 GRAM POSITIVO............ Actinomices sp
 MUCICARMIN................ Criptococcus
neoformans
 Aspergillus fumigatus
 Hifas
 Criptococcus
 Criptosporidium
 Actinomices sp
 Actinomicetos sp
 Histoplasmosis
 Coccidioidomicosis
 Coccidioidomicosis
 En esta categoría se incluyen una serie de
organismos que varían entre los protozoos
unicelulares y los helmintos visibles
macroscópicamente. Los protozoos de la
leshmania son vistos con la coloración de
Giemsa.
 El Pneumocystis Carinii, es un organismo
oportunista que se evidencia en los pulmones
de los pacientes con deficiencia inmunitaria y
lo podemos observar con la coloración de
Giemsa, Papanicolaou y Fluorescencia.
 Leshmaniasis.
 Pneumocystis Carinii
 Pneumocystis Carinii
 Pneumocystis Carinni
 Muestra cervico-vaginal
 Los métodos histoquímicos se fundamentan
en hacer reaccionar químicamente reactivos
con los componentes celulares o tisulares
que queremos demostrar para obtener un
producto final que es coloreado y puede
verse con el microscopio. La histoquímica se
pueden clasificar en tres tipos en función de
lo que tiñan: sustancias, microorganismos y
especiales.
 METODOS HISTOTECNOLOGICOS.
 Mills, Bob y Edna B.
 Instituto de Patología de los Estados Unidos
AFIP
 Impreso en Washington, D. C. 1995.
 280 pág..
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  • 2. La histoquímica es la aplicación de reacciones químicas y bioquímicas en la técnica histológica, para localizar y establecer de forma científica ciertas sustancias o su actividad. Las técnicas histoquímicas comprenden el conjunto de métodos empleados para la demostración de la naturaleza química de los componentes tisulares y celulares. Se recurre al empleo de estas tinciones histoquímicas cuando se pretende visualizar específicamente una sustancia determinada.
  • 3.  Una tinción o coloración es una técnica auxiliar utilizada en microscopía para mejorar el contraste en la imagen vista al microscopio. Los colorantes y tinturas son sustancias que usualmente se utilizan en biología y medicina para resaltar estructuras en tejidos biológicos que van a ser observados con la ayuda de diferentes tipos de microscopios
  • 4.  . Los diferentes colorantes pueden ser utilizados para aumentar la definición y examinar grandes cortes de tejido (resaltando por ejemplo fibras musculares o tejido conectivo), poblaciones celulares(por ejemplo clasificando diferentes células sanguíneas) o incluso para resaltar organelas dentro de células individuales
  • 5.  En bioquímica, esto implica agregar un colorante específico ( significa que de una de manera selectiva ya sea a ADN, proteínas, lípidos, carbohidratos, etc.) a un sustrato para cualificar o cuantificar la presencia de un determinado compuesto. Tanto la tinción como el marcado fluorescente pueden servir para los mismos propósitos.  Diferentes tipos de tinciones biológicas son utilizadas también para marcar células en citometría de flujo y para marcar proteínas ó ácidos nucleícos en electroforesis en gel.
  • 6.  La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente (aniones), tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
  • 7.  COLORANTES CATIONICOS:  Azul de Metileno  Cristales de Violeta  Safranina  COLORANTES ANIONICOS:  Eosina  Fucsina Acida  Rojo Congo
  • 8.  COLAGENO: Tricròmico de Masson , Gomori y Van Gieson  RETICULINA: Plata Amoniacal, ejemplo: Método de Snook, Wilder y Manuel .  ELASTINA: Hematoxilina Férrica: Método de Verhoeff , Fucsina resorcina: Método de Hart y Fucsina aldèhica: Método de Gomori
  • 12.  Fibras de reticulina
  • 13.  GLUCOGENO: Hígado, corazón y musculo esquelético  MUCINAS NEUTRAS: Células gástricas, glándulas duodenales de Brunner.  MUCINA SALIVAR: Glándulas salivares, células muciparas del intestino y la mucosa gástrica.  MUCINA ACIDA: Células mucìparas del intestino.  SULFATO DE HEPARINA: Células cebadas,mastocitos, aorta y tejido conectivo cardíaco.  ACIDO HIALURONICO: Cordón umbilical y tejido conectivo de la dermis.
  • 17.  Acido hialurònico y mucina salivar azul.
  • 18. Las coloraciones de lípidos se efectúan frecuentemente en secciones obtenidas por congelación o tejidos fijados . METODO DE ACEITE ROJO.
  • 19.  Los pigmentos son sustancias que tienen color propio.  Los pigmentos mas comunes presentes en los tejidos son de color marrón o negro.  Los métodos mas utilizados son: Warthin- Starry para melanina , Método de hall para bilirrubinas, método de Perls para hierro, Método de Von Kossa para sales minerales y método de Rodanina para localizar cobre.
  • 23.  La demostración de organismos infecciosos en secciones de parafina y frotes a través de técnicas especiales de coloración constituyen un elemento de diagnóstico de valor inestimable.
  • 24.  La coloración de gram-negativa y gram- positiva puede lograrse con los métodos de coloración de gram disponibles. A pesar de que la coloración requiere de colorantes y descolorantes de diferentes concentraciones, los procedimientos de tinción no varían en forma significativa  La coloración de Brown y Hopps y las de Brown Brenn son las mas utilizadas.
  • 25.  Estreptococos sp (azules)  Brucella sp (rojo)
  • 32.  Auramina O  Rodamina B
  • 34.  Los hongos son plantas que no tienen tallo, hojas y raíces, y además carecen de clorofila.  La estructura de los hongos varían de acuerdo a la clasificación, pueden ser filamentosos alargadas llamadas hifas.  Las enfermedades producidas por hongos que infectan a los seres humanos pueden agruparse en superficies como la piel, uñas o sistemas invadidos u órganos.
  • 35.  Entre las principales coloraciones para hongos tenemos:  GMS ............................. Aspergillius F.  PAS............................... Cándida Albicans  GIEMSA......................... Dermatofitos  GRIDLEY FUNGUS.......... Blastomicetos  GRAM POSITIVO............ Actinomices sp  MUCICARMIN................ Criptococcus neoformans
  • 45.  En esta categoría se incluyen una serie de organismos que varían entre los protozoos unicelulares y los helmintos visibles macroscópicamente. Los protozoos de la leshmania son vistos con la coloración de Giemsa.  El Pneumocystis Carinii, es un organismo oportunista que se evidencia en los pulmones de los pacientes con deficiencia inmunitaria y lo podemos observar con la coloración de Giemsa, Papanicolaou y Fluorescencia.
  • 51.  Los métodos histoquímicos se fundamentan en hacer reaccionar químicamente reactivos con los componentes celulares o tisulares que queremos demostrar para obtener un producto final que es coloreado y puede verse con el microscopio. La histoquímica se pueden clasificar en tres tipos en función de lo que tiñan: sustancias, microorganismos y especiales.
  • 52.  METODOS HISTOTECNOLOGICOS.  Mills, Bob y Edna B.  Instituto de Patología de los Estados Unidos AFIP  Impreso en Washington, D. C. 1995.  280 pág..