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CITOMETRÍA HEMÁTICA
 INTERPRETACIÓN DE
    HISTOGRAMAS
   M.C. Antonio Rascón Careaga




                       LCP
INTRODUCCIÓN
       Biometría Hemática:
                                  bios = vida
                                  metros = medida
       Citología Hemática:
                           citos = célula
                           logos = tratado
       Citometría Hemática:
                           citos = célula
                           metros= medida
                           haemat haematos = sangre
           Grupos:
           1.Serie roja
           2.Serie blanca
18/09/12   3.Serie trombocitica                       2
INTRODUCCIÓN
                        Formula Roja (parámetros)
            Hb:    (g/dL), proteína por unidad de volumen
                    Anemia
                    Depende de sexo, edad, ASNM
            Hematocrito: (%), proporción de GR por unidad de sangre
                    Depende de sexo, edad, ASNM
            Número de GR: (M/uL)
                    Depende de sexo, edad, ASNM
            VCM ó VGM: (fl ó micras)
                    Macrocitosis o microcitosis
                    Hto x 10/GR
            HCM: (pg), cantidad promedio de Hb por eritrocito
                    (Hb/GR) x 10
18/09/12                                                               3
                    Hipocromía o normocromia
INTRODUCCIÓN
                       Formula Roja (parámetros)
 CMHB: (%), [Hb]
            Dato inexacto
 Coeficiente de variación de VGM (RDW): (%)
            Solo se puede calcular con citómetros de flujo
 Cuenta corregida de reticulocitos: (%)
            Proporción de células inmaduras que salen a SP
            Es un indice indirecto de la hematopoyesis
            CCR = R x (Hto/45)

 18/09/12                                                    4
INTRODUCCIÓN
                        Formula Blanca
Glóbulos Blancos (cel/uL)
   Diferencial en %
   Diferencial en Absolutos
                            RUTINA               ESPECIALES
              Basófilos              Blastos
              Eosinófilos            Promielocitos
              Mielocitos             Linfocitos Atípicos
              Metamielocitos         Linfocitos Plasmocitoides
              Bandas                 LGG
              Segmentados
              Linfocitos             Plasma
              Monocitos              Anormalidades
INTRODUCCIÓN
             Formula Plaquetaria



Plaquetas (cel/uL)
      Morfología
      Apreciación
INTRODUCCIÓN
Método manual para contar células
INTRODUCCIÓN
Método manual para diferencial
INTRODUCCIÓN
                   Método automatizado
                  HISTOGRAMAS ¿qué son?
 Es una gráfica de la distribución de un conjunto de medidas.
 Toma datos variables (peso, estatura, tiempo, tamaño, etc.)
y despliega su distribución.
 Los procesos inusuales o sospechosos pueden indicar que
un proceso necesita investigación.
 Población                     Agrupar                             Graficar
                     Peso      Hombres Mujeres
                   50-60         ////          ////
                   61-70          //           ////
                   71-80         ////           //

                                         Sociedad Latinoamericana para la Calidad, 2001
Histogramas en la citometría hemática


                   Indican en general:
• La distribución de las células según su tamaño.
• Promedio del tamaño de las células dentro de una
población específica.
• La presencia de subpoblaciones clínicamente
significativas.
Factores que afectan a los Histogramas



• Anticoagulante: EDTA
• Tiempo de proceso: antes de 4 horas.
• Temperatura de la muestra (muestras frías producen
histogramas comprimidos).
• Relacionados al equipo (limpieza, calibración, etc.)
Principios de Operación




Wallace y Joseph Coulter                       Coulter Counter Model S




                  National Electronics Conference, Chicago, IL, 1956; October 3
Principios de Operación
     Impedancia




    CONTEO CELULAR
Principios de Operación
     Impedancia
Principios de Operación

Histograma de la serie roja




50            75          100   150
Principios de Operación

                   Histograma de la Serie blanca

      Linfocitos

                                     Granulocitos


                      MID



      50           100      150                     300   350


 Linfocitos: 35 – 98 fL
 MID: monocitos, basófilos, blastos 98 – 135 fL
 Granulocitos neutrófilos: 135 – 345 fL
REPORTE
Principios de Operación
                          Sistema óptico




Laser helio-neón




                   CONTEO Y DIFERENCIACIÓN CELULAR
Principios de Operación
            Sistema óptico




MAPSS separación mediante dispersión de
la luz polarizada en múltiples ángulos
REPORTE
Principios de Operación
              Clasificación




TAMAÑO




              COMPLEJIDAD
Alertas o Interferencias

           Histograma de plaquetas y/o serie roja:
• Región baja: microplaquetas, células fragmentadas,
crioglobulinas, inclusiones en GR, hemólisis y apertura sucia.
• Región alta: Macroplaquetas, microcitos, agregados
plaquetarios, GR fragmentados y satelitosis.




                    50         100      150          200
Alertas o Interferencias

                   Histograma de serie blanca            Linfocit




                     Zona de los linfocitos
                                                         os


                                                                                  Granulocitos




                                                                        MID




                                                         5          1         1
                                                                                                 3   3
                                                         0          0         5




• Agregados plq o MPQ
                                                                                                 0   5
                                                                    0         0
                                                                                                 0   0




• GR nucleados
• Lísis incompleta de GR
• Crioglobulinas
• Linfocitosis
                                         50        100
• Linfopenia
• Linfocitos atípicos
• Basofilia
• Blastos
• Células plasmáticas
Alertas o Interferencias

                Histograma de serie blanca    Linfocit
                                              os


                                                                       Granulocitos




                        Zona MID                             MID




                                             5           1         1
                                                                                      3   3
                                             0           0         5
                                                                                      0   5
                                                         0         0
                                                                                      0   0




• Basofilia
• Blastos
• Eosinofilia
• Bandemia
• Agregados plq                     100      150
Alertas o Interferencias

                   Histograma de serie blanca         Linfocit




                    Zona de los neutrófilos
                                                      os


                                                                               Granulocitos




                                                                     MID




                                                      5          1         1
                                                                                              3   3
                                                      0          0         5
                                                                                              0   5
                                                                 0         0
                                                                                              0   0




• Eosinofilia
• Granulocitos inmaduros
• Bandemia
                                  150           150       150
• Granulocitosis
• Neutropenia
RDW, ADE ó CV-VCM


                  SD x 100
        RDW=
                   VCM




                                  > 15.5
11.5 – 15.5
Clasificación de Anemias por VCM y RDW
                     VCM Bajo

RDW        Definición                            Etiología
         Microcítica                      Enfermedad crónica
Normal
         Homogénea                        Talasemia heterozigótica
                                          •Deficiencia de Fe
         Microcítica                      •Talasemia intermedia
 Alto                                     •Hemoglobina H
         Heterogénea
                                          •Fragmentación de GR

          *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J
                                                                            Clin Pathol 80:322-326, 1983.
Clasificación de Anemias por VCM y RDW
                       VCM Normal

RDW         Definición                                      Etiología
                                       •Enfermedad crónica
           Normocítica                 •Hemólisis
Normal                                 •Quimioterapia
           Homogénea
                                       •LMC (M3) y LLC
                                       •Deficiencia temprana de Fe,
           Normocítica                 folato o B12
 Alto                                  •Hemoglobinopatía
           Heterogénea
                                       •Mielofibrosis y Sideroblástica

              *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J
                                                                                Clin Pathol 80:322-326, 1983.
Clasificación de Anemias por VCM y RDW
                     VCM Alto


RDW      Definición                                     Etiología
       Macrocítica                  •Anemia hipoplásica
Normal
       Homogénea                    •Preleucemia
                                    •Deficiencia de Folato o B12
        Macrocítica                 •Hemolítica inmune
 Alto                               •Aglutininas frías
        Heterogénea
                                    •Enfermedad hepática


           *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J
                                                                             Clin Pathol 80:322-326, 1983.
RETICULOCITOS
RETICULOCITOS

           RPI < 2                              RPI > 3
Enfermedad crónica (CA, infección, Destrucción anormal de eritrocitos
inflamación, enfermedad renal
Eritropoyesis disminuida            Anemia hemolítica autoinmune
Deficiencia de folato               Sangrado
Anemia aplásica o hipoplásica       Hiperesplenismo
Deficiencia de hierro               Inmunización por Rh
Deficiencia de Vitamina B12         Otros padecimientos hemolíticos
Utilidad Del Volumen Plaquetario
                 En Pacientes Con Malignidad


                    Recuento Plaquetario
         Bajo                   Normal               Alto
             VPM                      VPM
VPM Bajo                  VPM Bajo
             Normal                   Normal
Hipoplasia   Destrucción Hipoplasia   Normal   •Deficiencia Fe
severa por   plaquetaria moderada              reactiva a tumor
drogas o                                       o infección
sepsis                                         •Proceso
                                               mieloproliferativo
                                               •Sangrado
Pseudotrombocitopenia                                             1

  y Pseudoleucocitosis 2


   EN CONTADORES ELECTRÓNICOS
En aproximadamente 1 de cada 1000 personas el
EDTA produce grumos plaquetarios, dando por
 resultado plaquetas disminuidas y en ocasiones
       leucocitosis hasta de 50,000 x mm3

         1.- Bizzaro N, Brandalise M. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia. Am J
                                                   Clin Pathol. 1995; 103: 103-107.
             2.- Shimasaki AK, Fujita K, Fujio S, Sakurabayashi I. Pseudoleukocytosis
             without pseudothrombocytopenia induced by the interaction of EDTA and
                  IgG(2)-kappa M-protein. Clin Chim Acta. 2000 Sep;299(1-2):119-28
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  • 1. CITOMETRÍA HEMÁTICA INTERPRETACIÓN DE HISTOGRAMAS M.C. Antonio Rascón Careaga LCP
  • 2. INTRODUCCIÓN Biometría Hemática: bios = vida metros = medida Citología Hemática: citos = célula logos = tratado Citometría Hemática: citos = célula metros= medida haemat haematos = sangre Grupos: 1.Serie roja 2.Serie blanca 18/09/12 3.Serie trombocitica 2
  • 3. INTRODUCCIÓN Formula Roja (parámetros)  Hb: (g/dL), proteína por unidad de volumen Anemia Depende de sexo, edad, ASNM  Hematocrito: (%), proporción de GR por unidad de sangre Depende de sexo, edad, ASNM  Número de GR: (M/uL) Depende de sexo, edad, ASNM  VCM ó VGM: (fl ó micras) Macrocitosis o microcitosis Hto x 10/GR  HCM: (pg), cantidad promedio de Hb por eritrocito (Hb/GR) x 10 18/09/12 3 Hipocromía o normocromia
  • 4. INTRODUCCIÓN Formula Roja (parámetros)  CMHB: (%), [Hb] Dato inexacto  Coeficiente de variación de VGM (RDW): (%) Solo se puede calcular con citómetros de flujo  Cuenta corregida de reticulocitos: (%) Proporción de células inmaduras que salen a SP Es un indice indirecto de la hematopoyesis CCR = R x (Hto/45) 18/09/12 4
  • 5. INTRODUCCIÓN Formula Blanca Glóbulos Blancos (cel/uL) Diferencial en % Diferencial en Absolutos RUTINA ESPECIALES Basófilos Blastos Eosinófilos Promielocitos Mielocitos Linfocitos Atípicos Metamielocitos Linfocitos Plasmocitoides Bandas LGG Segmentados Linfocitos Plasma Monocitos Anormalidades
  • 6. INTRODUCCIÓN Formula Plaquetaria Plaquetas (cel/uL)  Morfología  Apreciación
  • 9.
  • 10. INTRODUCCIÓN Método automatizado HISTOGRAMAS ¿qué son?  Es una gráfica de la distribución de un conjunto de medidas.  Toma datos variables (peso, estatura, tiempo, tamaño, etc.) y despliega su distribución.  Los procesos inusuales o sospechosos pueden indicar que un proceso necesita investigación. Población Agrupar Graficar Peso Hombres Mujeres 50-60 //// //// 61-70 // //// 71-80 //// // Sociedad Latinoamericana para la Calidad, 2001
  • 11. Histogramas en la citometría hemática Indican en general: • La distribución de las células según su tamaño. • Promedio del tamaño de las células dentro de una población específica. • La presencia de subpoblaciones clínicamente significativas.
  • 12. Factores que afectan a los Histogramas • Anticoagulante: EDTA • Tiempo de proceso: antes de 4 horas. • Temperatura de la muestra (muestras frías producen histogramas comprimidos). • Relacionados al equipo (limpieza, calibración, etc.)
  • 13. Principios de Operación Wallace y Joseph Coulter Coulter Counter Model S National Electronics Conference, Chicago, IL, 1956; October 3
  • 14. Principios de Operación Impedancia CONTEO CELULAR
  • 16. Principios de Operación Histograma de la serie roja 50 75 100 150
  • 17. Principios de Operación Histograma de la Serie blanca Linfocitos Granulocitos MID 50 100 150 300 350  Linfocitos: 35 – 98 fL  MID: monocitos, basófilos, blastos 98 – 135 fL  Granulocitos neutrófilos: 135 – 345 fL
  • 19. Principios de Operación Sistema óptico Laser helio-neón CONTEO Y DIFERENCIACIÓN CELULAR
  • 20. Principios de Operación Sistema óptico MAPSS separación mediante dispersión de la luz polarizada en múltiples ángulos
  • 22. Principios de Operación Clasificación TAMAÑO COMPLEJIDAD
  • 23. Alertas o Interferencias Histograma de plaquetas y/o serie roja: • Región baja: microplaquetas, células fragmentadas, crioglobulinas, inclusiones en GR, hemólisis y apertura sucia. • Región alta: Macroplaquetas, microcitos, agregados plaquetarios, GR fragmentados y satelitosis. 50 100 150 200
  • 24. Alertas o Interferencias Histograma de serie blanca Linfocit Zona de los linfocitos os Granulocitos MID 5 1 1 3 3 0 0 5 • Agregados plq o MPQ 0 5 0 0 0 0 • GR nucleados • Lísis incompleta de GR • Crioglobulinas • Linfocitosis 50 100 • Linfopenia • Linfocitos atípicos • Basofilia • Blastos • Células plasmáticas
  • 25. Alertas o Interferencias Histograma de serie blanca Linfocit os Granulocitos Zona MID MID 5 1 1 3 3 0 0 5 0 5 0 0 0 0 • Basofilia • Blastos • Eosinofilia • Bandemia • Agregados plq 100 150
  • 26. Alertas o Interferencias Histograma de serie blanca Linfocit Zona de los neutrófilos os Granulocitos MID 5 1 1 3 3 0 0 5 0 5 0 0 0 0 • Eosinofilia • Granulocitos inmaduros • Bandemia 150 150 150 • Granulocitosis • Neutropenia
  • 27. RDW, ADE ó CV-VCM SD x 100 RDW= VCM > 15.5 11.5 – 15.5
  • 28. Clasificación de Anemias por VCM y RDW VCM Bajo RDW Definición Etiología Microcítica Enfermedad crónica Normal Homogénea Talasemia heterozigótica •Deficiencia de Fe Microcítica •Talasemia intermedia Alto •Hemoglobina H Heterogénea •Fragmentación de GR *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J Clin Pathol 80:322-326, 1983.
  • 29. Clasificación de Anemias por VCM y RDW VCM Normal RDW Definición Etiología •Enfermedad crónica Normocítica •Hemólisis Normal •Quimioterapia Homogénea •LMC (M3) y LLC •Deficiencia temprana de Fe, Normocítica folato o B12 Alto •Hemoglobinopatía Heterogénea •Mielofibrosis y Sideroblástica *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J Clin Pathol 80:322-326, 1983.
  • 30. Clasificación de Anemias por VCM y RDW VCM Alto RDW Definición Etiología Macrocítica •Anemia hipoplásica Normal Homogénea •Preleucemia •Deficiencia de Folato o B12 Macrocítica •Hemolítica inmune Alto •Aglutininas frías Heterogénea •Enfermedad hepática *Bessman JD,Gilmer PR, Gardner FH: Improved Classification of anemias by MCV and RDW. Am J Clin Pathol 80:322-326, 1983.
  • 32. RETICULOCITOS RPI < 2 RPI > 3 Enfermedad crónica (CA, infección, Destrucción anormal de eritrocitos inflamación, enfermedad renal Eritropoyesis disminuida Anemia hemolítica autoinmune Deficiencia de folato Sangrado Anemia aplásica o hipoplásica Hiperesplenismo Deficiencia de hierro Inmunización por Rh Deficiencia de Vitamina B12 Otros padecimientos hemolíticos
  • 33. Utilidad Del Volumen Plaquetario En Pacientes Con Malignidad Recuento Plaquetario Bajo Normal Alto VPM VPM VPM Bajo VPM Bajo Normal Normal Hipoplasia Destrucción Hipoplasia Normal •Deficiencia Fe severa por plaquetaria moderada reactiva a tumor drogas o o infección sepsis •Proceso mieloproliferativo •Sangrado
  • 34. Pseudotrombocitopenia 1 y Pseudoleucocitosis 2 EN CONTADORES ELECTRÓNICOS En aproximadamente 1 de cada 1000 personas el EDTA produce grumos plaquetarios, dando por resultado plaquetas disminuidas y en ocasiones leucocitosis hasta de 50,000 x mm3 1.- Bizzaro N, Brandalise M. EDTA-dependent pseudothrombocytopenia. Am J Clin Pathol. 1995; 103: 103-107. 2.- Shimasaki AK, Fujita K, Fujio S, Sakurabayashi I. Pseudoleukocytosis without pseudothrombocytopenia induced by the interaction of EDTA and IgG(2)-kappa M-protein. Clin Chim Acta. 2000 Sep;299(1-2):119-28
  • 35. Casos clínicos Normal Deficiencia de hierro
  • 37. Casos clínicos Anemia por deficiencia de B12
  • 39. ss co co nii llíín sc sc so so Ca Ca i a o fil in os re pe Hi
  • 42. “El microscopista tiene la palabra”