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Northern blot

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NORTHERN BLOT
Es una técnica de detección de
moléculas de ácido ribonucleico (ARN)
de una secuencia dada dentro de una
         mezcla compleja .
Procedimiento northern blot
PROCEDIMIENTO
 El procedimiento general comienza         Los sistemas de capilaridad iónica se
  con la extracción del RNA total de         utilizan para transferir el ARN desde
  una muestra de tejido                      un gel de electroforesis a una
   homogenizado.                             membrana de Northern blot.

                                            Después del marcaje de la sonda,
 Las muestras de ARN son entonces           ésta se hibrida con el RNA en la
  separadas por electroforesis en gel.       membrana.

 Dada la fragilidad de los geles y la      Finalmente, la membrana debe de
  incapacidad de las sondas para             lavarse para asegurar que la sonda se
  penetrar en la matriz, las muestras de     ha unido de forma específica y para
  RNA, separadas por tamaño tras la          evitar ruido de fondo en las señales
  electroforesis, serán transferidas a       emitidas por la misma.
  una membrana de Nailon por medio
  de capilaridad o un sistema de
  transferencia al vacío.
Northern blot : transferencia por
          capilaridad
APLICACIONES
 El northern Blot permite observar un
  patrón particular de expresión          Los patrones de expresión obtenidos
  genética entre tejidos, órganos,         nos ayudan a conocer las funciones
  estadios del desarrollo, niveles de      de los genes. Desde que el RNA se
  estrés ambiental, infecciones            separó por su tamaño, las sondas
  causadas por patógenos y durante el      contra el mismo pueden darnos una
  curso del tratamiento de las mismas.     idea de su tamaño, sugerir ayuste
                                           alternativo, o motivos repetidos en la
                                           secuencia.
                                          La variación en el tamaño del
 Esta técnica se ha utilizado para        producto de un gen puede además
  mostrar la sobreexpresión de             indicarnos delecciones o errores en el
  oncogenes y la desregulación de          proceso de transcripción.
  genes supresores tumorales en
  células cancerosas cuando son           Alterando la sonda podemos conocer
  comparadas con tejidos normales.         la secuencia e incluso determinar que
                                           región del RNA ha sido deleccionada.

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  • 2. Es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una mezcla compleja .
  • 4. PROCEDIMIENTO  El procedimiento general comienza  Los sistemas de capilaridad iónica se con la extracción del RNA total de utilizan para transferir el ARN desde una muestra de tejido un gel de electroforesis a una homogenizado. membrana de Northern blot.  Después del marcaje de la sonda,  Las muestras de ARN son entonces ésta se hibrida con el RNA en la separadas por electroforesis en gel. membrana.  Dada la fragilidad de los geles y la  Finalmente, la membrana debe de incapacidad de las sondas para lavarse para asegurar que la sonda se penetrar en la matriz, las muestras de ha unido de forma específica y para RNA, separadas por tamaño tras la evitar ruido de fondo en las señales electroforesis, serán transferidas a emitidas por la misma. una membrana de Nailon por medio de capilaridad o un sistema de transferencia al vacío.
  • 5. Northern blot : transferencia por capilaridad
  • 6. APLICACIONES  El northern Blot permite observar un patrón particular de expresión  Los patrones de expresión obtenidos genética entre tejidos, órganos, nos ayudan a conocer las funciones estadios del desarrollo, niveles de de los genes. Desde que el RNA se estrés ambiental, infecciones separó por su tamaño, las sondas causadas por patógenos y durante el contra el mismo pueden darnos una curso del tratamiento de las mismas. idea de su tamaño, sugerir ayuste alternativo, o motivos repetidos en la secuencia.  La variación en el tamaño del  Esta técnica se ha utilizado para producto de un gen puede además mostrar la sobreexpresión de indicarnos delecciones o errores en el oncogenes y la desregulación de proceso de transcripción. genes supresores tumorales en células cancerosas cuando son  Alterando la sonda podemos conocer comparadas con tejidos normales. la secuencia e incluso determinar que región del RNA ha sido deleccionada.
  • 7. APLICACIONES DE LA TRANSFERENCIA NORTHERN