guia 5

1. MANUAL DE PRÁCTICAS DELABORATORIO
ASIGNATURA: BIOLOGÍA CELULARYMOLECULAR
Lic. Yesenia Zorrilla Gutarra
Docente
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PRÁCTICA DE LABORATORIO
Nro. 05
- FISIOLOGÍA DE LA MEMBRANA
CELULAR.
1. INTRODUCCIÓN:
Toda célula está separada de su entorno por una membrana plasmática, cuyo espesor sólo
puede ser observada al microscopio electrónico. Se atribuyen a la membrana funciones
fundamentales para la vida de la célula y que conciernen a dominios diversos. Uno de los
papeles más evidentes es el de frontera física entre los medios intra y extracelulares.
Además la membrana plasmática asegura la transferencia de sustancias o de información
de una célula a otra e incluso a distancias mayores facilitando, de esta manera, la
integración de ciertas propiedades en el seno de grupos de células que se encuentran
asociadas funcionalmente.
Las diferencia de composición entre los medios intra y extracelular sugieren la presencia,
en la periferia de la célula de una estructura que controle los intercambios y cuya
permeabilidad sea selectiva, tanto más si tenemos en cuenta que la mayor parte de las
sustancias que se encuentran en el medio intracelular, es decir, en el citoplasma se mueven
libremente. Esta permeabilidad selectiva varía según el tipo celular y en algunos casos es
susceptible de evolucionar con el tiempo.
De forma general, los intercambios de sustancias a través de la membrana plasmática son
resultado del proceso de difusión.
Si se coloca una solución en el espacio extracelular, y la membrana se encuentra íntegra
considerando que la membrana es semipermeable para los solutos de dicha solución, las
moléculas del solvente (agua) difundirán desde la región en donde predomina (extracelular),
hacia la zona de menor actividad (intracelular).
2. OBJETIVOS:
2.1. Evaluar cómo la membrana celular responde cuando se le enfrenta a una solución
hipotónica o hipoosmótica.
2.2. Evaluar cómo la membrana celular responde cuando se le enfrenta a una solución
hipertónica o hiperosmótica.

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3. PARTE TEÓRICA:
3.1. LA PERMEABILIDAD SELECTIVA DE LA MEMBRANA
PLASMÁTICA
El intercambio entre las células y su entorno tiene lugar mediante una serie de
procesos diferentes que, en conjunto, se denominan permeabilidad celular. En este
fenómeno intervienen dos tipos de factores:
1) Celulares, que vienen dados por la estructura y composición de la membrana
celular, que muestra una permeabilidad selectiva para diferentes sustancias;
+estas al atravesar la membrana celular por diversos mecanismos (difusión
pasiva, difusión facilitada o transporte activo) permiten una selectividad no
uniforme con variaciones específicas según la situación fisiológica.
2) Las fuerzas, ya sean físicas o químicas, que empujan a las sustancias para
atravesar la membrana celular (gradiente de concentración, gradiente
eléctrico, carga osmótica).
La permeabilidad celular en relación a los procesos de difusión y ósmosis presenta
diferencias entre los diferentes organismos, así tenemos que mientras en las células
de las plantas y bacterias poseen paredes rígidas con las que limitan el aumento
del volumen celular, las células animales carecen de este tipo de pared y, por tanto,
no pueden soportar grandes tensiones en su membrana por el aumento del
volumen celular.
Si consideramos a los glóbulos rojos para realizar estudios de permeabilidad se
debe considerar que tienen un contenido osmótico equivalente al de una solución
de NaCl al 0,9% (suero salino 0,15M), cuando se encuentran en suero salino no
variarán de tamaño. Pero si los glóbulos se disponen en una solución más diluida,
el agua entrará en la célula debido a la mayor osmolaridad del citoplasma respecto
a la disolución, produciendo un aumento del volumen celular, que puede llegar a
producir la rotura de la membrana del glóbulo rojo (hemólisis), liberándose su
contenido en el medio. En el caso contrario, ene l que la célula se encontrase en
una disolución más concentrada que su interior, se produciría una salida de agua
del glóbulo rojo lo que provocaría un descenso ene l volumen celular y
arrugamiento (crenación).

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Por este motivo cuando se produce una herida resulta conveniente lavarla con suero
salino (de igual composición salina que el plasma sanguíneo), resultando perjudicial
lavarla con agua destilada. Al lavar un herida (células vivas) con suero salino, no se
altera el equilibrio osmótico de las células, por lo que no sufrirán daño; en cambio, si se
lava con agua destilada, se las somete a un medio muy hipotónico, por lo que sufrirán
una entrada masiva de agua por procesos osmóticos, que las perjudica, pudiendo llegar
a destruirlas.
3.2. LOS ERITROCITOS O GLÓBULOS ROJOS
Los eritrocitos son células sanguíneas anucleadas que miden aproximadamente 8
µm de diámetro (así, unos 3000 eritrocitos en fila ocupan 2,5 cm de longitud) y
tienen forma de disco bicóncavo. La membrana del eritrocito en un complejo de
lípidos y proteínas (bicapa lipídica), el cual es importante para mantener la
elasticidad celular y la permeabilidad selectiva.
Los eritrocitos pueden deformarse, sin llegar a lesionarse para poder pasar por los
más estrechos capilares. Este grado de deformidad o elasticidad influye en la
rapidez del flujo sanguíneo por la micro-circulación. Los eritrocitos son los
elementos celulares más abundantes de la sangre. En el varón adulto existen
alrededor de 5.500.000 por cc de sangre, y en las mujeres unos 4.800.000 por cc.
En condiciones fisiológicas, los eritrocitos se encuentran en equilibrio osmótico con
la sangre que los contiene (valor de osmolaridad del plasma sanguíneo: 290 ± 10
mOsm/L), por lo cual se dice que la sangre es una solución isosmótica e isotónica.
Si la osmolaridad del plasma llega a disminuir significativamente (plasma

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hipotónico), el agua como líquido, entra al interior celular aumentando su volumen.
Si por el contrario, la osmolaridad del plasma se incrementa, este se torna
hipertónico y el agua sale del eritrocito ocurriendo una reducción del volumen
celular.
La forma y el volumen de los eritrocitos cambian cuando varía la cantidad de agua
contenida en su interior, pudiendo tomar una forma estrellada o irregular al ocurrir
pérdida de volumen (fenómeno de crenación) o bien aumentar su volumen hasta
adquirir la forma de una esfera. Cuando la célula no puede resistir la carga de agua
que recibe, la membrana se rompe (fenómeno de hemólisis) y se libera la
hemoglobina la cual puede ser cuantificada por métodos espectrofotométricos.

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4. PARTE PRÁCTICA
4.1. PLANTEAMIENTO DEL
PROBLEMA
¿Qué sucede con la membrana
plasmática de las células cunado se
las somete a soluciones con
diferentes presiones osmóticas
(hipotónicas, isotónicas e
hipertónicas?
4.2. PLANTEAMIENTO DE LA HIPÓTESIS
--------------------------------------------------------------------
--------------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------
----------------------------------------------------------------
4.3. PROCEDIMIENTOS DE EXPLORACIÓN
 Organizados en grupos de trabajo dispongan en la mesa de trabajo los siguientes
materiales y reactivos
MATERIALES y EQUIPOS REACTIVOS Y MUESTRAS
02 vasos de precipitado de 500 ml
01 balanza digital.
03 láminas porta objetos.
03 laminillas cubreobjetos.
03 lunas de reloj.
03 goteros.
02 baguetas.
01 lanceta estéril.
Microscopio.
04 huevos crudos.
01 ampolla de 5 ml de cloruro de
sodio al 0.9%
5 ml de cloruro de sodio al 20%
01 ampolla de 5ml de agua
destilada.
250 gr. de azúcar.
Alcohol medicinal.
Algodón.
 EFECTO DE LA MEMBRANA DE UN HUEVO CRUDO FRENTE A PRESIONES OSMÓTICAS:
o HIPOTÓNICA:
1. Pesar un huevo (minuto cero)

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2. Introducir el huevo en un vaso con agua por 10 minutos y luego volver a
pesar.
3. Volver a introducir en el vaso con agua por 10 minutos más y volver a
pesar.
4. Repetir por una vez más la operación anterior hasta completar los 50
minutos.
5. Completar el siguiente cuadro.
Tiempo (minutos) Peso (g)
0
10
20
30
40
50
6. Graficar un diagrama de coordenadas donde se muestre la relación peso
y tiempo.
o HIPERTÓNICA:
1. Pesar un huevo (minuto cero)
2. Introducir el huevo en un vaso con agua azucarada (solución saturada)
por 10 minutos y luego volver a pesar.
3. Volver a introducir en el vaso con agua azucarada (solución saturada)
por 10 minutos más y volver a pesar.
4. Repetir por una vez más la operación anterior hasta completar los 50
minutos.
5. Completar el siguiente cuadro.
Tiempo (minutos) Peso (g)
0
10
20
30
40
50
6. Graficar un diagrama de coordenadas donde se muestre la relación peso
y tiempo.

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 EFECTO DE LA MEMBRANA CELULAR DE UN GLÓBULO ROJO FRENTE A LAS PRESIONES
OSMÓTICAS
1. Rotular cada una de las lunas de reloj como “A”, “B” y “C”
2. Tener listas tres soluciones:
a. Hipotónica (agua destilada) rotularla como “A”
b. Isotónica (NaCl al 0,9%) rotularla como “B”
c. Hipertónica (NaCl al 20%) rotularla como “C”
3. Colocar las tres lunas de reloj sobre un papel impreso.
4. Con una lanceta estéril pinchar el dedo medio que ha sido previamente
desinfectado con un algodón empapado en alcohol.
5. Colocar una gota de sangre en cada luna de reloj.
6. Inmediatamente colocar sobre cada gota de sangre una gota de la solución
correspondiente y observar si las letras del papel impreso pueden leerse.
7. Colocar una gota de cada muestra sobre la lámina portaobjetos, colocar el
cubreobjetos y observar con el microscopio a diferentes aumentos. Registrar las
observaciones.
4.4. REFLEXIÓN
¿Qué ocurre al transcurrir el tiempo con el peso del huevo que estuvo en el agua
(aumenta o disminuye)?.¿Esto qué significa?
¿Qué ocurre al transcurrir el tiempo con el peso del huevo que estuvo en el agua
azucarada (aumenta o disminuye)?.¿Esto qué significa?
¿Qué sucede en las gotas de sangre al ser sometidas a las soluciones hipotónicas,
isotónicas e hipertónicas?
¿A qué tipo de transporte corresponden cada una de las experiencias realizadas?
¿Qué características tiene este tipo de transporte?
Explique lo que sucede con los glóbulos rojos en cada uno de los esquemas:
CARACTERÍSTICAS ESQUEMA 1 ESQUEMA 2 ESQUEMA 3
Tipo de solución
Cantidad de solutos
presente en la
solución

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Presión osmótica
(mayor, menor o
igual)
4.5. APLICACIÓN
Explique por qué los canales iónicosson un objetivo clave en la búsqueda de nuevos
medicamentos y qué enfermedades se relacionan con dichos canales iónicos
(canalopatías)
REFERENCIAS
Asociación Universidad Privada San Juan Bautista Facultad de Ciencias de la Salud
Escuela profesional de medicina humana Semestre (2013) Guía de práctica de
Biologia Celular y Molecular
Franco Navia, José (2010). Guía de Prácticas. Facultad De Ciencias De La Salud Carrera
Profesional de Estomatología Universidad Andina de Cusco. Recuperado el 03 de abril
del 2014 desde: www.http://biologiageneralestomatologia
Organización Mundial de la Salud (2005) Manual de Bioseguridad en el Laboratorio (3a.
Ed.) Recuperado el 03 de abril del 2014, desde:
http://www.fcm.uncu.edu.ar/joomla/downloads/OMS.pdf