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Tinciones de GRAM y ZIEHL NEELSEN

  1. UNIVERSIDAD CATÓLICA DE CUENCA UNIDAD ACADEMICA DE SALUD Y BIENESTAR FACULTAD DE MEDICINA CATEDRA: MICROBIOLOGIA Y PARSITOLOGIA I CATEDRÁTICA: DRA. ANDREA ASTUDILLO. INTEGRANTES: MARITZA ENRÍQUEZ ANDREA ESCANDON ANDRES FLORES PARALELO: TERCER CICLO DE MEDICINA “A”
  2. TINCIÒN  Las células bacterianas son ricas en ácidos nucleicos tienen cargas (+) en los grupos fosfatos que se combina con las cargas (+) de los colorantes básicos.  Los colorantes ácidos no tiñen a las células bacterianas, se utilizan para teñir el material de fondo para proporcionar un contraste de color
  3. TINCIÒN DE GRAM  Tinción utilizada para separar las bacterias en Gram (+) y Gram (-).  Se fija la muestra en un portaobjetos mediante calentamiento o tratamiento con alcohol.  Se expone ala muestra a violeta de cristal.  Se añade yodo para formar el complejo con el colorante principal.
  4. TINCIÒN DE GRAM  En la decoloración con alcohol o acetona el complejo: • Queda retenido en las bacterias Gram positivas y • Se pierde en las Gram negativas.  Los microrganismos Gram (-) retienen el colorante safranina( color rojo).
  5. TINCIÒN DE GRAM  El grado en el que un microrganismo conserva el colorante depende de: • Del microorganismo • De las condiciones del cultivo. • Habilidades tintoriales del microscopista.
  6. TINCIÒN DE GRAM
  7. TINCIÒN DE GRAM
  8. TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
  9. La tinción de Ziehl-Neelsen (BAAR) es una técnica de tinción diferencial rápida y económica, usada para la identificación de microorganismos patógenos, como M. tuberculosis o el género Apicomplexa (coccidios intestinales) entre otros. Fue descrita por primera vez por dos médicos alemanes: Franz Ziehl, un bacteriólogo, y Friedrich Neelsen, un patólogo. TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN
  10. TINCIÓN DE ZIEHL NEELSEN  Esta tinción demuestra la capacidad de ciertas bacterias de resistir a la decoloración por ácidos y alcoholes, lo cual se correlaciona con su alto contenido en lípidos en la pared celular y presencia de ácidos micólicos que aumentan el carácter hidrófobo.  Una de las bacterias que presentan esta característica es Mycobacterium tuberculosis Principal causante de la tuberculosis.
  11. TINCIÒN DE ZIEHL NEELSEN Se utiliza para teñir micobacterias y otros microorganismos acido resistentes.  Se tiñen con carbolfucsina básica.  Resisten a la descoloración con soluciones de acido-alcohol.  Se realiza contra tinción del fondo con azul de metileno.  Los microorganismos aparecen de color rojo sobre un fondo azul claro.
  12. Los reactivos necesarios para su realización son los siguientes: ácido periódico 58% carbol fucsina de Ziehl culina (fucsina fenicada). Preparar mezclando en el orden dado: 0,5 g fucsina básica 50 cc agua destilada 5 cc etanol absoluto 28,5 g cristales de fenol derretidos hematoxilina alcohol ácido 1%: alcohol de 35º ácido clorhídrico Técnica
  13. PROCEDIMIENTO
  14. Etapa 1:  PREPARACIÓN DEL EXTENDIDO Tomar una cantidad homogénea de esputo y extenderla de un extremo a otro del portaobjetos para lograr una película homogénea
  15. Etapa 2  CUBRIR El EXTENDIDO CON FUCSINA FILTRADA
  16. Etapa 3  CALENTAR HASTA EMISIÓN DE VAPORES TRES VECES DURANTE 5 MINUTOS
  17. Etapa 4  LAVAR CON AGUA
  18. Etapa 5  CUBRIR CON SOLUCIÓN DECOLORANTE DURANTE 3 MINUTOS Solución decolorante: alcohol ácido
  19. Etapa 6  LAVAR CON AGUA
  20. Etapa 7  CUBRIR CON AZUL DE METILENO DURANTE 1 MINUTO
  21. Etapa 8  LAVAR CON AGUA Y SECAR AL AIRE
  22. ETAPA 10  OBSERVACION MICROSCÓPICA Y LECTURA DE EXTENDIDOS
  23. INTERPRETACION DE RESULTADOS Células Color Bacilos y microorganismos Alcohol Acido-Resistentes. Rojo brillante Gérmenes, otros organismos y material de soporte. Diferentes tonalidades de azules
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