3. !
"
#
! !
" #
!
$ "$
%
!

4. ! " ! !
# ! $ % &'( ) * +%
, - % &'. /
0 1 2 % &'34 * ! ! + /
5)
6 7 8 /% 6 0 % 4994
! : 7 ! " ; <
! =
! 5 ! 7

5. &'
( ) ' *
+
,
-
. /
'0102
3
4 3
4 5
5
6 7
!
.
∆∆∆∆
8
45
$>%
? $

6. 99
/# : + ;
4 !
-# 9 +
!
'# 9
!

7. . ;
/88<=> "
+ "
"
"
? #@

8. 4 4 !
.
"
. "
! " # $
A =B -CC-
chloroquine camptothecinetrophozoites daunomycine

9. . 4
D " . 6 B E> F B @:G
@+
A
?
4

10. @ A
,B ?
5 µm
A ! C49 D
< C4E D< C49 D
1) TUNEL (Terminal dUTP Nick End Labelling): Fragmentation
internucléosomale de l’ADN

11. PI
74A H
C ' <3
10%
5% 14%
24% 25%
39%
@+
. + 0 4H
trophozoïtes
SSC
FSC
schizontes

12. 6 #D ,=B -CC<
% &
3) Marquage par l’Annexine V:
Exposition phosphatidylsérines
@+
. + 0 4H

13. 74A H
4
A
EI /G
'
(
)
*
+
,
-
. /
0 1 2

17. Stratégie de Recherche
Approche biochimique in vitro
• Synthèse de protéine recombinante
• Tests d’activité enzymatique avec substrat luminescent
Approche in vivo dans cellule eucaryotes
• Test de surexpression et d’induction d’apoptose
• Test de clivage
Approche in vivo chez P.falciparum
• Test d’activité enzymatique et de clivage après induction d’apoptose!
• Test de survie du parasite en présence d’inhibiteurs de Caspase
Approche bioinformatique
• Recherche d’un gène candidat
• Recherche de site catalytique
• Recherche de domaines

18. Approche bioinformatique
P20 P10
H C
Domaine catalytique C14
D D
Site de clivage potentiel
CARDDD DED
26 72
75 106
211 242
Domaines régulateurs
P20
P10
Métacaspase inactivée
Métacaspase activée

19. !"# $
!"# %
# !& "# !
' ( ('
!"# $
$
)*+ ,
' ( ('
. "
+
! +"#-! -
. . "
+ !"#
+ /0 1 #"," 2
30 ". !1
4

20. 9 +
!
etoposide sur 7g8 48 h
0
20
40
60
80
100
120
0 3,75 7,5 15 30 60
etoposide (µg.mL)
%
ring
tropho
schizontes
pycno
etoposide sur 3d7 48 h
0
20
40
60
80
100
120
0 3,75 7,5 15 30 60
etoposide (µg.mL)
%
ring
tropho
schizontes
pycno

22. . "
+3, 4 5+
'--+ 6 #0 6 1 $

23. 9
!

26. "1 0 !-
. " 5
-! . "# # ! # 0 1 . . "
- -!"# " 1" 6 !-& ! 0!
-!"# & 1 "

27. "#
' 7 8 # #
7 9 # :
2# # ; 8 # # #7
7
8 2# 7 8 # # <
! = ##
8 > # # # # # #
7
? ! # ! 7 # ## #

28. ' . " "#/' 2
7 1 . " " 9 0
7 ' +' :. -"# # "# !-"# 6"-# ;
& "#; ;1! ; #- " <
7 .. -0 1 # 0 #" # 1"

29. ' "# & "#
7 1 < # # 8
8 $ # # 7 7
# # #@
7 > #8
8 ? # # # 7 #
@
7 0 7 8
8 $ 7 'A$2B 'C
8 $ ! # #6?B@
7 # # #
# #

30. 9 E . 3
61 F0
B= 7 1 1
?B &9. !
E
= J G
ABG ABG ABG
5
8 ABG % ?B 9H F-
I &49 @ ?F
J9
B % , 7 %
&E 4&
6 5 5 :
6 , 1 :
I.9
I&4
I&4
G : K 7IJ9

31. "#0 -1" ! "
# '
!! ""
-
!IG =G G &.

32. "#0 -1" ! "
. #" #0!#-"# 0
"#0 -1" ! "
. #" #0!#-"# 0
-"#. " 1"
"# -& 9 # + 4
= 0 -
-"#. " 1"
"# -& 9 # + 4
= 0 -
-"#9 "
& 9 # + 4=
3$>
-"#9 "
& 9 # + 4=
3$>
-"# -& -
& 9 # + 4=
? 3$>
-"# -& -
& 9 # + 4=
? 3$>

33. ''
##
8 B " 7 3 ! 5
& !1& !1 :: !#!#
7 499 H

34. ' + ' + . + .
1 :. "#
E
3
E
3
E
3
E
3
C 7 D " ABG C7 - 7 D

35. 6"# 1 :. "#"#& "#
''
##
''
##

36. :: 66
NS
5
ABG
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
5
ABG
NS
"" :"-"" :"-

37. (!11
?3 ' - - 0 1 & 1 " "# 1!"# 1 -
3 ' - & "#"#0 11 . # "#0 "#/ ;
; 2
3 ' . # 1 "# & "#
!!
?3 # 0 1!"# 1 -
3 . . "& #
3 #- 1"@- # - "#" "
3 0 1 #
?3 # 0 1!"# 1 -
3 . . "& #
3 #- 1"@- # - "#" "
3 0 1 #
> #
7 D # #
5 # ## *

38. G F J9G F J9
. . " 0 1 " . @ #; 1 -"!1 & "5 . "&
1 #"1 0 "1""# "# #" 0"#0 "#"# 1 !" 3 +
# ;#3A3. " ?? +??
. . " - !"#
#""" 0 !1 #1 " . "
1 -"!1 0 ". !13 " ?%%4;
#3 3( 3 .3 - $% +
$%?3
B ( ?;A;?4 5% + %3
C' ; "#':. 11 ? 45?$?+?$43
A ;? 45? +% 3'#- "

39. .
"
.
"

40. B ! ! ! LB ! ! ! L
6
6 M
1 " 6
0 $ /
7 6
1 A -
$ < 7
6
A
# 6
1 :
A1 J3J4
# B
$
@ , ,
N, : 7 % 7 <
! ! 7
A1 J3J4A1 J3J4
## BB
$$
@ , ,@ , ,
NN, :, : 77 %% 77 <<
! !! ! 77