1. CRIOPRESERVAÇÃO DE
OÓCITOS
Mestrado em Ensino
da Biologia e Geologia
2010/11
Cecília Antão
BIOLOGIA COMPLEMENTAR

2. Criopreservação
Um bom protocolo de
criopreservação deve evitar:
 formação de cristais de gelo
 efeito de solutos
 choque osmótico
 Conservação de células, tecidos, órgãos ou
embriões, por congelamento

3. Como se formam os cristais de gelo
intracelular?
Células estáveis
a -196˚C
(N2 líquido)
Água intracelular (temp. ambiente)
Descida da temperatura
< 0˚C
GELO
Os cristais de
gelo ocupam um
volume superior
ao da água líquida
Expansão do gelo pode
provocar danos nos
organitos celulares ;
evitada por congelação
muito rápida

4. Efeito de solutos
Choque osmótico : quando o
reaquecimento é lento, há o risco
da água livre descongelar e
recristalizar e, assim, provocar
mais danos à célula
Pressão osmótica
HIPERTÓNICA ISOTÓNICA HIPOTÓNICA
Criopreservação células/oócitos N2
líquido reaquecimento
fusão do gelo osmolaridade
ponto de
congelação da
fase líquida
temperatura

5. CRIOPRESERVAÇÃO
CONGELAÇÃO VITRIFICAÇÃO
(N2 líquido)
RÁPIDA
(N2 líquido)
LENTA
SLOW –FREEZE
VÁRIOS PROTOCOLOS MAS TODOS INCLUEM:
 Exposição a crioprotectores
 Descida programada da temperatura
 Limitação da formação de cristais
intracelulares de gelo

6. CRIOPROTECTORES
PERMEÁVEIS
(DMSO,propilenoglicol,
glicerol, etilenoglicol)
NÃO PERMEÁVEIS
(açúcares, p.ex. sacarose
e trehalose)
CP’s
água
meio extracelular
CÉLULA
meio extracelular
CP’s

7. CRIOPROTECTORES
PERMEÁVEIS:
Pequenas moléculas que
atravessam a membrana
celular e formam ligações de
hidrogénio com as moléculas
de água.
Em < concentrações causam
descida da temp.
Inibem os cristais de gelo
formam um sólido vitrificado
CRIOPROTECTORES NÃO
PERMEÁVEIS:
Permanecem no meio
extracelular.
Drenam a água do interior
da célula, o que leva à
desidratação do espaço
intracelular.
Quando associados a CP’s
permeáveis, contribuem
para prevenir a formação
de cristais.
Descongelação: evitam o
choque osmótico.

8. OÓCITO MADURO OU
SECUNDÁRIO
CRIOPRESERVAÇÃO DE OÓCITOS
MADUROS
DIFÍCEIS DE CONGELAR:
 tamanho considerável
citoplasma complexo
membrana especializada
estado transitório
IMPORTANTE!
O FUSO ACROMÁTICO DESAPARECE
DURANTE O PROCESSO DE
ARREFECIMENTO, DEVIDO À
DESPOLIMERIZAÇÃO DOS
MICROTÚBULOS

9. Os oócitos maduros
podem ser utilizados
em 2 fases da meiose:
METAFASE II
ou PROFASE I
(diplóteno; fase de
vesícula germinativa)
Escolhem-se oócitos em MII porque:
1. O fuso acromático já está organizado (segregação correcta dos
cromossomas; evitar aneuploidia)
2. Há bloqueio da meiose II
3. Há maior abundância de oócitos nesta fase

10. Os oócitos em profase I (diplóteno) seriam o ideal porque na
fase seguinte – anafase I – existe um risco de não-disjunção
dos cromossomas e , logo, de aneuploidia mas…
…a prática demonstrou que era mais difícil criopreservar
células nesta fase
CRIOPRESERVAÇÃO DE FOLÍCULOS
PRIMORDIAIS
Vantagens
 < dimensão;
 > área superficial/ volume
 pouco diferenciados
 citoplasma com menos
organitos
 não existe fuso acromático
não têm zona pelúcida

11. Filme educativo sobre medicina reprodutiva
“Reproductive Medicine Associates of New York”
http://www.youtube.com/watch?v=6tLPv4Z2_NM
REF. BIBLIOGRÁFICAS
Dessolle et .al. (2009) Gynécologie, Obstétrique & Fertilité 37(9):712-719
Gosden R.G. & Veeck Gosden L.L. (2005) Cryopreservation of human oocytes and ovarian tissue. In Textbook of in vitro Fertilization and Assisted
Reproduction, 3aed. Edit. Peter R. Brinsden, Taylor & Francis, Cambridge, UK, pp.421-430
Jain J.K. & Paulson R.J. (2006) Fertility and Sterility 86 (suppl. 3): 1037-46
Kuleshova L.L. (2009) Fundamentals and current practice for vitrification. In Preservation of Human Oocytes. Eds. G. Coticchio, A. Borini, Informa
Healthcare, London, UK, pp. 36-61.
WEBGRAFIA
http://www.britannica.com/EBchecked/media/106702/During-ovulation-in-a-healthy-woman-a-dormant-primordial-follicle
http://artemisacosta.blogspot.com/2008/02/crioconservao-de-gmetas-e-embries.html
www.apdpn.org.pt/_scripts/informacao/1843698306.pdf