1. Impacts of a long-term programme of active
surveillance and chlorhexidine baths on the clinical
and molecular epidemiology of meticillin-resistant
Staphylococcus aureus (MRSA) in an Intensive
Texto adicional Texto adicional
Care Unit in Scotland.
Texto adicional texto adicional
Texto adicional texto adicional Girvanb, Sagar Jadhava, Timothy Lawesc, Andrew Robbb,
Vartul Sangala, E. Kirsty
Leila Vali d, Giles F. Edwardsb, Jun Yua, Ian M. Gouldc.
Jhon M. Cardona B.
Mateo Aránzazu U.
UPB
2012

2. INTRODUCTION
• Combining surveillance and infection control
procedures, can be a key factor to prevent
MRSA (meticillin-resistant Staphylococcus
aureus), but there are some obstacles such as
the number of single rooms and antibiotic
resistance. Most infections are caused by two
strains EMRSA-15 and EMRSA-16, identified by
PFGE, MLST and spa typing, these strains are
from the ICU, which is an important reservoir of
MRSA

3. Staphylococcus aureus
• Family Staphylococcaceae Genus Staphylococcus
Specie Aureus
• Is an anaerobic Gram-positive coccal bacterium. It is frequently found as
part of the normal skin flora, S. aureus is a successful pathogen due to a
combination of bacterial immuno-evasive strategies.

4. Methicillin-resistant
Staphylococcus aureus
• MRSA is any strain
of Staphylococcus aureus that has
developed resistance to beta-lactam
antibiotics, which include
the penicillins(methicillin, dicloxacilli
n, nafcillin, oxacillin, etc.) and
the cephalosporins by alteration of
target site

5. Meticillin
• Is a narrow-spectrum beta-lactam antibiotic of the penicillin class
• Acts by inhibiting the synthesis of bacterial cell walls. Inhibits cross-linkage between
the linear peptidoglycan polymer chains of the cell wall of Gram-positive bacteria. It
does this by binding to and competitively inhibiting the transpeptidase enzyme used
in peptidoglycan synthesis

6. Chlorhexidine
• Chlorhexidine is a chemical antiseptic that
destabilizes and penetrates the bacterial
cell membrane, precipitate the cytoplasm
and interfere with the membrane function by
inhibiting the use of oxygen, causing a
decrease in ATP levels and cell death

7. Relationship
• Methicillin-resistant Staphylococcus aureus is commonly
found in ICU, and is responsible for most of hospital-acquired
infections, also is difficult to treat due to methicillin resistence,
so scientist and doctors have been creating new
measurements to avoid the generation and propagation of
MRSA, one of the strategies is the inclusion of chlorhexidine
baths, combined with surveillance, this one is a very
successful strategy because the MRSA is not chlorhexidine
resistant.

8. GENERAL OBJECTIVE
• Evaluate the impacts of a long-term
programme of active surveillance and
chlorhexidine baths on the clinical and
molecular epidemiology of methicillin-
resistant staphylococcus aureus (MRSA)
in an intensive care unit

9. MATERIALES Y METODOS

10. Diseño
• Es un estudio descriptivo
• Está enfocado en el control de MRSA en las unidades de cuidados intensivos,
se inicio en mayo de 2003, y se alargó durante cuatro años, se estudiaron 85
aislamientos del mismo periodo de tiempo, mediante pruebas de resistencia a
antibióticos, y métodos genopiticos (PFGE, spa typing y MLST).

11. Lugar
• El estudio se realizo desde mayo del 2003
hasta abril de 2007 en la unidad de
cuidados intensivos del Aberdeen Royal
Infirmary, en el noreste de escocia.
• La unidad de cuidados intensivos posee
16 camas y cuatro salas de aislamiento, y
una tasa media de 800 pacientes/año

12. Intervención
• Se tomaron muestras de todos los pacientes en diferentes sitios
(nariz, garganta, axila, ingle) y se comenzó un tratamiento, aplicación
de una solución tópica nasal anti-MRSA cada 6 horas y baños diarios
con una solucion al 4% de gluconato de clorhexidina. En septiembre
de 2003 se detuvieron los procesos debido a resultados negativos

13. Intervención
• Se realizo la aplicacion de tres preparaciones tópicas nasales
• Ácido fusídico al 2% (Fucidin crema, Leo Pharma, Risborough)
• Sulfato de neomicina al 0.5% combinado con hidrocloruro de
clorhexidina al 0.1% (Crema Naseptin; Farmacéuticos Alianza,
Chippenham, Reino Unido)
• Bacitracina de zinc (500 U / g) en combinación con polimixina B
sulfato (10 000 U / g) (pomada Polyfax; Teva, Castleford, Reino
Unido)
• Posteriormente, todos los pacientes que dieron positivo para
MRSA, fueron aislados en una sola habitación

14. Recoleccion de datos
• Los datos acerca de MRSA, algunas vigilacias de infecciones y la
adherencia fueron recuperados de vigilacias rutinarias y de monitoreos del
programa de control de MRSA de la unidad de cuidados intensivos.
• Los aislamientos de MRSA fueron enviados al Scottish MRSA Reference
Laboratory y al Stobhill Hospital para fenotipificación antimicrobiana,
pruebas de susceptibilidad antiséptica y genotipado

15. Caracterización fenotípica y
pruebas de sensibilidad
• La producción de ureasa fue probada
inoculando Agar de úrea con 10 Litros de
inoculo de Mcfarland. Se incubaron
durante 48 horas a 35°C, el color rosado
indicaba resultados positivos, y el
amarillo, negativos. Los resultados
registrados fueron blanco, crema y
amarillo

16. Estándar de McFarland
• se usa en suspensiones bacteriológicas
para saber el número de bacterias por
mililitro. Se mide en una escala que va de
0.5 a 10. se mezclan soluciones de
cloruro de bario al 1% con ácido sulfúrico
al 1%, es pruebas se sensibilidad se usa
para evitar falsos positivos y estandarizar
el proceso

17. Pruebas de sensibiliad
• Se hicieron pruebas para 10 antibioticos
usando Vitek, entre los cuales estaban:
Selfametoxazol, neomicina, teicoplanina,
vancominica
• Las pruebas dieron positivas para
teicoplanina y vancomicina

18. PCR
• La reacción en cadena de la polimerasa es una técnica que fue desarrollada por Kary Mullis en
los años 80, es usada para obtener numerosas copias de un fragmento de DNA específico.
• Se hace en 3 pasos, desnaturalización, alineamiento y sintesis.
• Es un proceso de alto rendimiento, de alta especificidad y alta fidelidad.
• Sus aplicaciones son variadas, en el estudio se uso para evaluar la suceptibilidad a la
clorhexidina

19. Electroforesis en gel
de campo pulsado
• La electroforesis se hace para separar
moleculas segun su tamaño. En el estudio
se realizo el siguiente proceso:
• Las colonias de S. aureus se incorporaron
en bloques de agarosa
• Despues de la lisis bacteriana, el AND
genónico fue digerido y luego se realizo la
electroforesis de campo pulsado

20. Spa
• El método de tipificación spa se basa en la secuencia
polimorfica X del gen de la proteina A (spa) presente en
todas las cepas de Staphylococcus aureus. La región X está
constituido por un número variable de 24 pares de bases que
son bastante repetitivas. debido a su estructura de repetición,
permite identificar micro y macrovariacione entre las
diferentes cepas de Staphylococcus aureus

21. Tipificación multilocus
de secuencias
• Se usa para caracterizar bacterias y
microrganismos mediante el uso
de secuencias de genes de
mantenimiento.
• En el estudio, se extrajo el ADN
genómico, de 7 genes de mantenimiento,
y se procesaron de acuerdo a los
protocolos de el sitio web
http://saureus.mlst.net/misc/info.asp

22. RESULTADOS
Eficacia a largo plazo del programa de control MRSA
•No hubo evidencia de pérdida en la eficacia clínica de la
estrategia de control, Como se describió previamente.
•No hubo cambios significativos en las tasas de otros índices
de vigilancia de infecciones por organismos MSSA u otras
bacteriemias.

23. RESULTADOS
Propiedades moleculares y fenotípicas de clones aislados de MRSA
• De los 85 MRSA, 11 fueron adquiridos en un periodo antes de la
admisión a la UCI y 74 aparentemente adquiridos en la UCI.
• Estos agrupan en tres grupos, con la excepción de cuatro aislamientos.
Los perfiles en dos de estos grupos fueron fácilmente identificados como
asociados con EMRSA-15 y EMRSA-16. El tercer grupo estaba bien
definido fenotípicamente y se ha encontrado que corresponden a CC45.

24. RESULTADOS
• Cuatro cepas encontradas están muy extendidas, aunque no son
comunes en Escocia y es probable que hayan sido adquiridos por los
pacientes antes ingreso en la UCI.
• De acuerdo con estos resultados, tres clones MRSA son prevalentes
dentro de la UCI. raramente se observaron cepas ST5 y ST8, en el
período de estudio, pero éstos no persisten.
• De los 11 aislamientos encontrados antes de admisión 7 eran CC30, y
4 CC22. Todos los aislamientos CC45 fueron adquiridos.

25. RESULTADOS
La figura. 2. Dendrograma
construido por análisis de
electroforesis en gel de campo
pulsado (PFGE)
También se muestra en el diagrama
susceptibilidad antimicrobiana, tipos de spa y
tipificación de secuencias multilocus (MLST)
resultados.
Fuente: ETA, aspirado traqueal, BAL lavado
broncoalveolar; ET, endotraqueal, CVP, central
catéter venoso presión.
Las susceptibilidades antibióticas: PN,
penicilina G; Ox, oxacilina, Cp, ciprofloxacina,
Er, eritromicina, Cl, clindamicina, No,
neomicina, Tb, tobramicina; Km,kanamicina,
Su, sulfametoxazol; Tr, trimetoprim, Fd, ácido
fusídico; Mp, mupirocina
La ureasa: P, positivo, N negativo. Pigmento:
C, crema, W, blanco, Y, amarillo.

26. RESULTADOS
Propiedades fenotípicas de los linajes de Staphylococcus aureus
• Los aislamientos se probaron para la producción de ureasa y la
pigmentación en Iso-Sensitest agar, todos CC22 aislados fueron
negativos para la producción de ureasa, mientras que todos otros
clones fueron positivos.
• CC30 no presento pigmentación en Iso-Sensitest, (registrado como
blanco). La mayoría de CC22 y CC45 se registraron como de color
crema, y todos los clones restantes en este estudio se registraron
como amarillo.

27. RESULTADOS
Las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos
• Se ha probado susceptibilidad antimicrobiana en todos grupos de
aislamientos con 12 agentes antimicrobianos.
• EMRSA-15 y aislados EMRSA-16 tenían diferentes patrones de
susceptibilidad a los antimicrobianos. Cepas de EMRSA-15 fueron
resistentes en general a menos antibióticos que EMRSA-16, a pesar de que
todos los aislamientos de los linajes comunes eran resistentes a la
ciprofloxacina.
• Sólo una diferencia en antibiogramas entre el EMRSA-16 aislamientos y las
cepas CC45 CC45 fue que los aislamientos fueron resistentes a
sulfametoxazol.
• La mayoría de las cepas fueron resistentes a ciprofloxacina, sin embargo, la
susceptibilidad a otros antimicrobianos fue variable.

28. DISCUSSION
AUTHOR OPINION YES OR NO
Gould IM, et al We found no evidence of yes
deterioration in the
effectiveness of a control
program for MRSA in the
ICU of Aberdeen Royal
Infirmary after application
in May 2001
Khandavilli S, et tal This typing method has a yes
high discriminatory power
and is suitable for
characterizing the outbreak
and transmission tracking
intensive care unit.

29. DISCUSSION
AUTHOR OPINION YES OR NO
Melles DC, et al PFGE is a technique that yes
recognizes identification
microvariation genome.
PFGE has been a gold
standard for investigating
the local epidemiology
and characterization in
outbreaks of MRSA
Hunt AC, et al both of these strains yes
remain the most
commonly isolated in
healthcare settings, with
CC30 replacing CC22
aspreviously described

30. CONCLUSIONS
Molecular biology methods provide the ability to identify and relate the
origin of clonally human isolates and distinguish between strains
associated with epidemics. These techniques should be used for the
monitoring of the various infections.
Using molecular biology techniques provides assistance to public health
to implement appropriate and timely preventive measures, not only during
hospitalization but in the community.
The development of these methods has proven effective in the
differentiation of microorganisms, their main usefulness lies in its high
discriminatory power of clones in the same species.
Most discrimination of clones could generate more selective and specific
treatments for particular pathogen. Allowing more effectively attack and
perhaps with less effects for the patient.

31. Jhon M. Cardona

33. GRACIAS