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PCR

PCR

1 de 19
By PresenterMedia.com
Docente: Pedro Lezama Asencio
Alumno:
Aguilar Montalván Johnny
Polymerase Chain
Reaction (PCR)
Objetivos
Ventajas y desventajas del PCR.
Métodos de secuenciación de DNA.
Conocer:
Los fundamentos de la técnica
de amplificación
de DNA por PCR.
Usos y aplicaciones del PCR.
técnica de biología
molecular desarrollada
en 1986 por Kary Mullis
obtener un gran
número de copias de un
fragmento de ADN
Inicialmente la técnica
era lenta
PCR
Técnica que nos permite amplificar selectivamente
un segmento específico de DNA, hasta obtener una
cantidad suficiente para su posterior manipulación
FOTOCOPIADORA
MOLECULAR
FORMA DE
CLONACIÓN “
IN VITRO”
Sistema de amplificación “in
vitro” que permite la obtención
de un millón de copias de un
fragmento de DNA original, en
unas pocas horas.
VENTAJAS
Ahorra uso de enzimas de
restricción.
Evita el trabajo con vectores y
bacterias
Mas rápido
Sencilla
Barata
Especifica
- Solo lo hace por segmentos.
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- Errores.
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PCR

  • 1. By PresenterMedia.com Docente: Pedro Lezama Asencio Alumno: Aguilar Montalván Johnny Polymerase Chain Reaction (PCR)
  • 2. Objetivos Ventajas y desventajas del PCR. Métodos de secuenciación de DNA. Conocer: Los fundamentos de la técnica de amplificación de DNA por PCR. Usos y aplicaciones del PCR.
  • 3. técnica de biología molecular desarrollada en 1986 por Kary Mullis obtener un gran número de copias de un fragmento de ADN Inicialmente la técnica era lenta
  • 5. Técnica que nos permite amplificar selectivamente un segmento específico de DNA, hasta obtener una cantidad suficiente para su posterior manipulación FOTOCOPIADORA MOLECULAR FORMA DE CLONACIÓN “ IN VITRO” Sistema de amplificación “in vitro” que permite la obtención de un millón de copias de un fragmento de DNA original, en unas pocas horas.
  • 6. VENTAJAS Ahorra uso de enzimas de restricción. Evita el trabajo con vectores y bacterias Mas rápido Sencilla Barata Especifica - Solo lo hace por segmentos. - Tiene que ser especifico. - Errores. - Contaminación. DESVENTAJAS
  • 8. PCR anidada PCR múltiple PCR in situ PCR en tiempo real PCR con transcriptasa inversa
  • 9. Termociclador “Thermo cycler” Microcentrífuga Micropipetas de 2, 20 y 200 ul Microtubos para “PCR”, estériles Puntas estériles Agua destilada, desionizada y estéril • Materiales Para PCR
  • 10. ADN molde (ADN en estudio) Primer Forward y Reverse dNTP’s (dATP, dTTP, dCTP, Dgtp) 10X buffer para PCR (Solución amortiguadora para “PCR”) BSA Polimerasa Taq • Materiales Para PCR
  • 11. Cantidad (ul) Componente 10.3 Agua estéril (dH2O) 3.0 MgCl2 25mM 0.5 BSA 100X 1.5 2.5 Mm de dNTP's 1.0 Primer H34. 5’-3’ 1.0 Primer L15829. 3’-5’ 2.5 Buffer 10X 0.2 Taq Pol 5.0 DNA en estudio
  • 12. 1) Desnaturalización del DNA 1) Hibridación de los dos primers a la zona especifica 1) Extensión del primers por acción de DNA polimerasa.