Este documento describe varias pruebas bioquímicas utilizadas para identificar bacterias, incluyendo las pruebas IMVIC (Indol, Rojo de Metilo, Voges-Proskauer y Citrato), la prueba de TSI (Triple Sugar Iron), y la prueba de Ureasa. Explica los fundamentos, protocolos e interpretación de los resultados de cada prueba, las cuales permiten determinar las actividades metabólicas y enzimáticas de los microorganismos.

1. PRUEBAS
BIOQUÍMICAS
Dra. Natalia Izurieta Cergneux
PRÁCTICA No. 5 – LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA Y MICOLOGÍA

2. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
La identificación
definitiva de una
especie requiere de
pruebas
bioquímicas.
Permiten conocer
las actividades
metabólicas y
enzimáticas de los
microorganismos.

3. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
 Identificar los productos finales de los procesos metabólicos
 Se debe conocer:
1.- Cambios que se producen
2.- Reacciones químicas que ocurren
3.- Enzimas que intervienen
4.- Productos intermedios
5.- Secuencias de las reacciones bioquímicas

4. PRUEBAS BIOQUÍMICAS
 Los microorganismos se cultivan en medios S/D
SS + SD PB
 Las pruebas bioquímicas disponibles para la identificación de
microorganismos de la familia Enterobacteriaceae son:
1.- Pruebas IMVIC
2.- Prueba de TSI
3.- Prueba de Ureasa
4.- Movilidad

5. PRUEBAS IMVIC
 Incluyen un grupo de cuatro pruebas usadas para diferenciar a los
microorganismos entéricos (Familia Enterobacteriaceae)
 Las pruebas son:
INDOL
ROJO DE METILO
VOGES – PROSKAUER
CITRATO.

6. PRUEBA DE INDOL
 FUNDAMENTO:
TRIPTOFANASA
H2O + TRIPTOFANO INDOL + AC. PIRUVICO + NH3
 PROTOCOLO: Se inocula en caldo triptosa e incuba a 35 - 37°C
durante 24 horas.
 Luego de este período, se añaden 5 gotas del reactivo de Kovacs.
 INTERPRETACIÓN:
NEGATIVO POSITIVO
POSITIVO NEGATIVO

7. PRUEBA DE CITRATO
CITRATO PIRUVATO CO2 + Na + H2O Na2CO3
Ph ALCALINO
AZUL DE
BROMOTIMOL
COLOR AZUL
PRUEBA +
Agar Citratado de Simmons

8. PRUEBA DE CITRATO
 PROTOCOLO
1.- Se inocula el agar de superficie inclinada con una sola
estría en la superficie.
2.- Se incuba a 35 - 37°C durante 24 horas y se realiza la
lectura de la prueba.

9. PRUEBA DE CITRATO
 INTERPRETACIÓN:
Es positiva cuando se observa
crecimiento a lo largo de la
estría, y este se acompaña o
no de un viraje del indicador
de verde a azul. El cambio de
color del medio a azul indica
una reacción positiva.
POSITIVO NEGATIVO

10. PRUEBA DE ROJO DE METILO
Y VOGES PROSKAUER
GLUCOSA
ACIDO MIXTA
ACIDOS MIXTOS -
pH por debajo de 4,4
INDICADOR ROJO DE METILO
COLOR ROJO – MR +
BUTILENGLICOLICA
ACETIL-METILCARBINOL
(ACETOÍNA)
REACTIVO DE BARRET
COLOR ROSADO – VP +

11. PRUEBA DE ROJO DE METILO
 FUNDAMENTO:
GLUCOSA FERMENTACIÓN ÁCIDO MIXTA
ÁCIDOS LÁCTICO, ACÉTICO Y SUCCÍNICO
+
CO2, H2 y ETANOL
pH ÁCIDO
5 GOTAS ROJO DE METILO
COLOR ROJO
NEGATIVO POSITIVO

12. PRUEBA DE ROJO DE METILO
 PROTOCOLO: (caldo MRVP)
1.- Se Inocula el medio con un
cultivo puro joven.
2.- Se incuba a 35 – 37°C
durante 48 horas.
3.- Luego de terminado el
tiempo de incubación se
añaden 5 gotas del reactivo de
Rojo de Metilo (no agitar).
 INTERPRETACIÓN:
SIN INOCULAR NEGATIVO POSITIVO

13. PRUEBA DE VOGES PROSKAUER
 FUNDAMENTO:
GLUCOSA FERMENTACIÓN BUTILENGLICÓLICA
ACETIL-METIL-CARBINOL
(ACETOÍNA)
REACTIVO DE BARRETT
KOH 40%
2-3 BUTANODIOL, ETANOL, H2 y CO2
NEGATIVO POSITIVO

14. PRUEBA TSI (TRIPLE SUGAR IRON)
 Medio S/D
 Permite evidenciar:
1. Capacidad de producción de ácido y gas a partir de glucosa,
sacarosa y lactosa en un único medio.
2. Permite la identificación de la producción de SH2.

15. PRUEBA TSI
 Esta prueba tiene como objetivo diferenciar entre:
Bacterias fermentadoras de la GLUCOSA
Bacterias fermentadoras de la LACTOSA
Bacterias fermentadoras de la SACAROSA
Bacterias aerogénicas
Bacterias productoras de SH2

16. PRUEBA TSI
FUNDAMENTO:
 El extracto de carne y peptona aportan los nutrientes para el
desarrollo bacteriano.
 La lactosa, sacarosa y glucosa son los HC fermentables.
 El rojo de fenol es el indicador de pH.
 Por la fermentación de los azúcares, se producen ácidos que se
detectan por el indicador de pH.

17. PRUEBA TSI
 PROTOCOLO:
1.- Se inocula los tubos de TSI
con punta.
2.- Se introduce la punta hasta
3 a 5 mm del fondo del tubo.
3.- Luego de retirar el asa del
fondo, se estría el pico con un
movimiento en zigzag, de un
lado al otro.
4.- Se incuba a 35 - 37°C
durante 24 horas.
INOCULACION CON PUNTA
ESTRIACION EN ZIGZAG

18. PRUEBA TSI
INTERPRETACIÓN:
Se debe considerar los
cambios de color en el
pico y el fondo del tubo y
la formación de burbujas.
Cuando el medio es
ácido (A) este se torna de
color amarillo y cuando
es alcalino (ALK)
permanece de color rojo.

19. PRUEBA TSI
 El medio contiene 0.1% de glucosa y 1% de lactosa y sacarosa
respectivamente.
 Si el microorganismo sólo fermenta la glucosa, el ácido producido en
el fondo acidifica el medio en esa zona y se torna de color amarillo.
 Cuando el microorganismo fermenta la lactosa y la sacarosa, el ácido
producido es suficiente como para virar el color del medio a amarillo.
 El medio permanece rojo cuando no se produce fermentación de
ninguno de los azúcares.

20. PRUEBA TSI
 Si hay formación de gas
durante el proceso de
fermentación, en el fondo del
medio se observan burbujas o
la ruptura del agar.
 Si las bacteria son productoras
de SH2 este se evidencia como
un precipitado negro en el
fondo del tubo.

21. Tubo C 1 2 3 4 4A 5
Fermentación de Glucosa - - + + + + +
Producción de gas - - - + + + +
Fermentación de Lactosa y Sacarosa - - - - + + +
Producción de SH2 - - - - - - +

22. PRUEBA DE LA UREASA
 FUNDAMENTO:
UREA
UREASA
2 MOLÉCULAS DE NH4
pH ALCALINO
ROJO DE FENOL
RESULTADOS
+ -
COLOR FUCSIA

23. PRUEBA DE LA UREASA
 PROTOCOLO:
1.- Se siembra el microorganismo en estudio en caldo urea o agar úrea de
Cristensen.
2.- Se incuba a 35 - 37° C durante 24 horas.
 INTERPRETACIÓN:
NEGATIVOPOSITIVO
Agar Úrea de Cristensen
NEGATIVO POSITIVO