1. CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL y de
SERVICIOS 236
REPORTE DE PRÁCTICA #3:
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
SUBMODULO 3:
EJECUTA TECNICAS DE IDENTIFICACION DE MICROORGANISMOS
CON BASE EN LAS NORMAS.
ALUMNA:
LESLIE SUSANA GARZA MARTINEZ
MAESTRA:
ING. ILEANA PEREZ NAVARRO
FECHA DE INICIO-ENTREGA:
05/09/2011 – 19/09/2011

2. PRACTICA #3:
PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO
Objetivo:
Aprender ¿Qué es un medio de cultivo? ¿Qué condiciones y nutrimentos
debe de contener?, ¿vcomo se realiza?, aplicar los conocimientos que
hemos aprendido en las anteriores practicas ¿Cuál es el control que debe
de tener?
ANTECEDENTES.
Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de
laboratorio, se llaman cultivos. Las diferentes especies de bacterias que se
desarrollan en la misma clase de medios de cultivo pueden tener aspectos muy
diferentes, y por tanto, el conocimiento de las características de cultivo de las
especies es útil para reconocer a ciertos tipos de bacterias. Las bacterias deben
ser obtenidas en cultivo puro para determinar las características del cultivo o
cualquier otra propiedad de las especies.
Para estudiar debidamente los microorganismos se necesita como requisito previo
el cultivarlos en condiciones de laboratorio. Para lograr esto es preciso conocer
cuáles son los nutrientes y las condiciones físicas que requieren. Mediante
investigaciones extensas se han determinado las necesidades nutricionales de las
bacterias, y esta información ha sido la causa del desarrollo de numerosos medios
de cultivo. Ya que las necesidades nutricionales de las bacterias varían de manera
muy amplia, existen diferencias muy importantes en cuanto a la composición de
los medios empleados. Las bacterias también tienen diferencias notables en lo
que respecta a las condiciones del ambiente que favorece su proliferación.
Desde los hombres hasta los microorganismos tienen en común determinadas
necesidades nutricionales en términos de necesidades químicas para llevar a cabo
su crecimiento y sus funciones normales.
1. Todo organismo vivo necesita una fuente de energía.
2. Todo organismo vivo necesita obtener carbono de una manera.
3. Todo organismo vivo necesita obtener nitrógeno de alguna manera.
4. Todo organismo vivo necesita azufre y fosforo.
5. Todos los organismos vivos necesitan de varios metales como Na, K Ca,
Mg, Mn, Fe, Zn, Cu, P, Co, para que puedan crecer normalmente.
6. Todo organismo vivo tiene vitaminas y compuestos vitaminados.
7. Todos los organismos necesitan agua para su crecimiento.

3. Se necesita de un gran número de sustancias químicamente puras para
cultivar bacterias que tengan necesidades nutricionales como los lactobacilos.
Aunque para el cultivo de bacterias heterótrofas en laboratorios de rutina
generalmente se basan en medios de cultivo sintéticos. Se usan ciertos
materiales crudos como peptonas, extracto de carne y extracto de levadura y
así el medio de cultivo que se obtiene hace posible el desarrollo de gran
variedad de bacterias y otros microorganismos. Cuando se desea un medio
solido se toma un agar como agente solidificante. A partir de estos ingredientes
es posible preparar un medio capaz de permitir el crecimiento de muchas
bacterias heterótrofas.
TIPOS DE MEDIOS
Se necesitan muchos medios de cultivo elaborados para propósitos especiales
que facilitan la identificación, aislamiento y cuantificación de ciertos tipos de
bacterias. A los medios de cultivo se les puede clasificar de la siguiente
manera:
Medios Enriquecidos: la adición de componentes como sangre, suero o
extractos de tejidos de animales y plantas al caldo nutritivo o agar, les
proporciona sustancias nutritivas complementarias para que el medio pueda
soportar el crecimiento de los heterótrofos exigentes.
Medios Selectivos: la adición de agar nutritivo de ciertas sustancias químicas
especificas, no permitirá el desarrollo de un grupo de bacterias, sin inhibir al
mismo tiempo el crecimiento de otros grupos.
Medios Diferenciales: la adición de ciertos reactivos o sustancias químicas a
los medios de cultivo trae como resultado determinado tipo de crecimiento
bacteriano o de cambios, lo cual permite al observador diferenciar distintos
tipos de bacterias. El medio agar-sangre sirve simultáneamente como medio
de enriquecimiento y diferencial.
Medios de Prueba: para el ensayo de vitaminas, aminoácidos y antibióticos, se
utilizan medios de cultivo de composición conocida. Asi mismo, se recurre a
medios de composición especial para probar desinfectantes.
Medios para Cuenta de Bacterias: para determinar el contenido bacteriano de
sustancias tales como la leche y el agua. Se debe señalar su formula asi como
las especificaciones prescritas.
Medios para Caracterizar Bacterias: para determinar el tipo de crecimiento
producido por los organismos, asi como la capacidad de las bacterias para
producir cambios químicos.

4. Medios de Mantenimiento: para preservar satisfactoriamente las características
fisiológicas y la viabilidad de un cultivo. El crecimiento rápido y prolífico suele
ocasionar la muerte rápida de las células.
PREPARACION DE LOS MEDIOS.
Para el cultivo de las bacterias se recurre a algunas sustancias naturales
comunes. Los materiales, en su forma natural, no presentan ningún problema
para tomarlos como medios de cultivo ya que simplemente se depositan dentro
de los envases adecuados tales como tubos de ensayo, o matraces, los cuales
deberán ser esterilizados antes de utilizarlos. Los medios que se preparan del
tipo agar o caldo nutritivos, se hacen mezclando los ingredientes individuales
necesarios. En la preparación de medios de cultivo, se deben seguir los
siguientes pasos:
1. Cada ingrediente se debe disolver en un volumen adecuado de agua
destilada.
2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara.
3. El medio se pondrá en recipientes adecuados como tubos, matraces,
botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, plástico o
cubiertas de metal.
4. Los medios se esterilizan generalmente en autoclave.
Para obtener un buen desarrollo de las bacterias, el trabajador de laboratorio
deberá:
a) Inocular las bacterias en un medio de cultivo que tenga los nutrientes
necesarios.
b) Incubar el medio ya sembrado en condiciones físicas apropiadas.

5. MATERIALES
Instrumentos:
Estufa de cultivo
Autoclave
Baño maría
Contador de colonias Quebec
Balanza Analítica
Materiales:
Caja Petri (5)
Matraz Erlen Meyer
Probeta
Mechero bunsen
Trípode
Triangulo de porcelana
Espátula acanalada
Guante de asbesto
Materiales Auxiliares:
Papel estraza
Algodón
Aluminio
Cinta testigo
Gasas
Agua destilada
cubreboca
NORMAS QUE SE APLICAN
NOM-087-SEMARNAT-SSA1-2002-Proteccion Ambiental- Residuos
Peligrosos Biológico-Infecciosos (RPBI): Utilizamos esta norma ya que
empleamos diferentes técnicas de protección contra los residuos
peligrosos.
DESARROLLO:
1. Lavar y desinfectar la mesa de trabajo.
2. Lavar, escurrir y acondicionar el material a usar.

6. 3. Hacer un pequeño platillo con papel aluminio para pesar, según las
instrucciones.
4. Anotar los datos de la etiqueta del frasco del medio de cultivo a preparar:
Nombre del medio: Agar Método Estandar
Tipo de medio (para que tipo de microorganismos se recomienda): Recuento
con placa de bacterias en microbiología sanitaria.
Método de preparación: agar en placa
Ingredientes: peptona de capseína, extracto de levadura, dextrosa, agar
Condiciones de esterilización: esterilización a vapor de 115 – 120°C
5. Realizar los cálculos de acuerdo al medio de cultivo a preparar así como a la
cantidad a preparar, según la explicación dada por el facilitador. Considerar
la capacidad de los materiales a usar (cajas petri; 100, 70 y 30 ml).
A.M.E. (Agar Método Estándar).
5 Cajas Petri (Grandes).
23.5gr. ------------> 1000ml
X gr. ------------> 180 ml
Xgr. = (23.5gr.) (180ml)
1000ml
Xgr. = 4230
1000ml
Xgr. = 4.23gr.
4.23gr. ------------> 180
ml
6. Pesar y disolver el agar en agua destilada, calentar con agitación hasta
disolución completa.
7. Tapar el matraz y acondicionarlo adecuadamente.
8. Esterilizar el medio de cultivo preparado (según las condiciones marcadas en
la etiqueta) y las cajas petri previamente acondicionadas.
9. Colocarse el cubreboca y asegurar que la bata este debidamente cerrada.
Sacar el material del autoclave.

7. 10. Preparar la mesa donde se trabajara, es decir donde se verterá el medio a las
cajas petri (usar cubreboca en este proceso).
11. Quitar el papel estraza y abrir con cuidado la caja petri cerca de un mechero
de bunsen y agregar el agar, volver a tapar el matraz, tener precaución para
que el medio no toque la tapa de la caja petri, si no se corre el riesgo de
contaminación.
12. Dejar que el medio solidifique por un tiempo (20 min. Aprox.).
13. Después sellar los bordes de la caja con cinta para que no se abra por algún
descuido.
14. Colocar en la estufa de cultivo, una placa testigo, y una placa (invertida) por
alumno, a 37°C por 12 horas.
15. Al siguiente dia checar si hubo crecimiento por medio del contador de
colonias Quebec. Se debe esperar que las placas no presenten crecimiento,
es decir que no presenten cambios de color, olor y aspecto, esto denotara un
crecimiento negativo; en caso contrario será considerado como un
crecimiento positivo, de ser asi deberá observarse y anotarse la morfología de
las colonias de acuerdo al siguiente esquema(*).
16. Si los resultados fueron negativos, colocar invertidas las placas por equipo
dentro de una bolsa de plástico y guardarlas en el refrigerador colocando en
la etiqueta; # de equipo, nombre del medio de cultivo, y fecha de
preparación.
RESULTADOS:
TABLA DE RESULTADOS DE “PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO”.
Esta tabla proporciona la información por equipo, si la preparación del medio
de cultivo se realizo correctamente (no hubo crecimiento = negativo), o si no
se realizo correctamente (hubo crecimiento = positivo).
Número de placa Crecimiento No hubo Características
(que después de crecimiento morfológicas.
corresponderá al incubación después de la E = elevación
nombre de quien (POSITIVO) incubación F = Forma
la realizo). (NEGATIVO) B = Borde
P = Pigmentación
1. Ana carlota ● E = Plana
F = Irregular
B = Ondulado
P = Blanco
2. Liliana Yaneth ● E = Plana
F = Circular
B = Liso
P = Blanco
3. Carlos Alberto ● E = Plana
F = Circular y
Punteada

8. B = Liso
P = Blanco
4. Néstor ● E = Plana
F = Circular
B = Ondulado
P = Blanco
5. Leslie Susana ● E = Umbilicada
F = Irregular
B = Filamentoso
P = Blanco
Agregar en una esquina una columna que contenga hora de incubacion y
temperatura de incubación.
ESQUEMA (*)
COLONIAS DE BACTERIAS:

9. CONCLUSIONES:
La practica abarco algunas sesiones de clase, Nos costó un poco de trabajo
realizarla y tuvimos algunos contratiempos e incidentes pero pues aprendí a
preparar el medio de cultivo en placa que parecía sencillo pero no fue tan fácil,
al final revisamos nuestros medios y algunos salieron contaminados, como por
ejemplo el mío y ahí fue cuando me di cuenta de que no hice la practica
correctamente pero iremos perfeccionando nuestra técnica con el paso del
tiempo ya que será un trabajo rutinario. También algo muy importante es que
para preparar los medios de cultivo se necesita de mucha limpieza, ya que de lo
contrario todo saldrá mal.

10. CUESTIONARIO:
1. Define el término medio de cultivo?
Las bacterias u otros microorganismos que se desarrollan en medios de
laboratorio, se llaman cultivos.
2. Que es un cultivo mixto?
Es aquel que contiene dos o más sepias de organismos.
3. Que es un cultivo puro?
Representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y
otros microorganismos y las condiciones impuestas a los microorganismos
mediante el manejo del laboratorio.
4. Cual es la clasificación que se hace de los tipos de medios de cultivo?
Medios Enriquecidos; Medios Selectivos; Medios Diferenciales; Medios de
Prueba; Medios para Cuenta de Bacterias; Medios para Caracterizar
Bacterias; Medios de Mantenimiento.
5. Complementa el cuadro que se presenta a continuación, especificando
cuales son las características de varios materiales que se usan como
ingredientes en los medios de cultivo.
Material Crudo Características Valor nutritivo
Extracto de carne Extracto acuoso de Contiene las sustancias
carne magra de res solubles en agua de
concentrado en pasta. tejidos animales, entre
ellas carbohidratos,
compuestos orgánicos
nitrogenados, vitaminas
solubles en agua y sales.
Peptona Es el producto que Fuente principal de
resulta de la digestión nitrógeno orgánico;
de materiales puede contener
proteínicos. La digestión también algunas
del material proteínico vitaminas y algunas
se efectúa con ácidos y veces carbohidratos,
enzimas: sirven para esto en relación a la
hacer medios de cultivo clase de material
bacteriológicos, proteico digerido.
diferentes tipos de
peptona. Existen
diferencias en las
peptonas en cuanto a
su propiedad para
permitir el crecimiento
bacteriano.
Agar Carbohidratos Se usa como agente
complejos obtenidos de solidificante de los
ciertas algas marinas medios de cultivo, se
procesadas para disuelve en solución
eliminar sustancias acuosa, gelifica cuando

11. extrañas. la temperatura baja de
45°C; no se considera al
agar como nutriente
para las bacterias.
Extracto de levadura Es un extracto en Es una fuente muy rica
solución acuosa de en vitaminas B, también
levaduras, se obtiene contiene nitrógeno
comercialmente en orgánico y compuestos
polvo. de carbono.
6. Que aspectos debes considerar para la preparación adecuada de un medio
de cultivo y para su condición de incubación?
En la preparación de medios de cultivo, se deben seguir los siguientes
pasos:
1. Cada ingrediente se debe disolver en un volumen adecuado de
agua destilada.
2. Se determinara el pH del medio y si es necesario se ajustara.
3. El medio se pondrá en recipientes adecuados como tubos, matraces,
botellas, cuyas bocas se cierran con tapones de algodón, plástico o
cubiertas de metal.
4. Los medios se esterilizan generalmente en autoclave.
Para obtener un buen desarrollo de las bacterias, el trabajador de
laboratorio deberá:
a) Inocular las bacterias en un medio de cultivo que tenga los nutrientes
necesarios.
b) Incubar el medio ya sembrado en condiciones físicas apropiadas.
7. Como se clasifican las bacterias con base a su tiempo optimo de desarrollo?
Fototrofos, quimiotrofos, Autotrofos y heterotrofos.
8. Cuales son las ventajas inherentes al uso de medios de cultivo sinteticos?
Que se tienen la producción de muchos más embriones somáticos y el
empleo de técnicas convencionales.
BIBLIOGRAFIA:
Capitulo 6, 7 y 8; Pelczar , reid, chan “Microbiologia” Ed. Mc.
Graw-Hill Mexico