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INMUNODIAGNOSTICO I Y II
LINDSAY BORJAS
DEFINICION
La técnica consiste en preparar cortas secuencias de
DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son
complementarias de las secuencias de DNA que se
quieren marcar y examinar.
Es muy utilizada en la detección de anomalías
cromosómicas.
alta sensibilidad y especificidad
SONDAS
Son secuencias cortas de ADN de una sola hebra, que
son complementarias de las secuencias de ADN que se
quieren marcar y examinar.
Sondas especificas
de un locus
Hibridan a una región
particular de un gen. Esta
sonda es útil cuando se ha
aislado una pequeña parte
de un gen y se quiere
averiguar en que cromosoma
se encuentra.
Sondas
centroméricas
contienen secuencias
complementarias de las
secuencias repetidas que se
encuentran en los centrómeros
de los cromosomas. Como
pueden utilizarse sondas de
diferentes colores, cada
cromosoma puede ser marcado
de manera distinta, con lo que
se puede averiguar si un
individuo tiene el número
correcto
Sondas para
cromosomas
completos
Son colecciones de sondas de
un tamaño reducido, cada una
de las cuales se hibrida a una
secuencia diferente a lo largo
de todo un cromosoma.
Utilizando estas librerias de
sondas, se puede marcar todo
un cromosoma generando un
cariotipo espectral.
PROCEDIMIENTO
A . Moter ,U . B . Gobel,2000
R. Amann, B. Fuchs, 2008
Bishop,2010
HISTORIA
Las primeras técnica de FISH fue desarrollada,
independientemente por Padue, Gall, John y sus
colaboradores en 1969, pero fue propuesto por Olsen.
En 1989, DeLong y su equipo de trabajo emplearon
oligonucleótidos marcados con fluorocromos para
detectar células microbianas crecidas de manera
individual.
APLICACIONES
Detecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de una
región cromosómica, un cromosoma entero o para
monitorizar la progresión de una aberración.
En el diagnóstico de una enfermedad genética.
FISH se puede aplicar a la investigación como: el
mapeo de genes, identificación de nuevos oncogenes
que contribuyen a diversos tipos de cáncer.
VENTAJA
Proporciona una resolución considerablemente
superior a la de las técnicas de bandas de alta
resolución; ya que puede detectar deleciones de
tamaño tan pequeño como 1 millón de pares de bases.
Pueden detectar aneuploidias empleando cromosomas
en interfase, no es necesario estimular a las células
para que se dividan con el fin de obtener cromosomas
en metafase.
COMPARACION
Convencional: Técnicas de bandeo de cromosomas
(tinción Giemsa) revolucionó el análisis citogenético y
han sido fundamentales en la comprensión de los
cambios genéticos en ambas enfermedades
constitucionales y adquiridos.
La resolución del análisis de bandas es de tal manera
que sólo puede detectar reordenamientos que
implican 0,3 Mb de ADN.
Técnicas de bandas se limitan a células mitóticas
activas.
La tinción de cromosomas con Giemsa permite el
análisis de los diferentes tipos como: cromosomas
policéntricos, cromosomas en anillo, intercambios de
cromátidas y fragmentos.
Otros tipos de aberraciones cromosómicas tales como
translocaciones e inversiones recíprocas no son
normalmente reconocible con la tinción de Giemsa,
pero pueden ser visualizados por FISH.
Nueva: La tecnología de Microarreglos.
Analizar diferentes tipos de muestras biológicas
(tejidos, proteínas y material genético) y otras
moléculas de manera simultánea por ensayo.
La versatilidad de esta técnica permite utilizarla en
estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de
expresión diferencial de genes en condiciones
experimentales distintas (enfermedades y
tratamientos) en el análisis de polimorfismos,
presencia de metilaciones, mutaciones puntuales e
identificación de blancos terapéuticos.
E. Medina, 2009
Bishop,2010
INTERPRETACION
Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN),
2009.
IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011
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HIBRIDACION FLUORESCENTE IN SITU (FISH)

  • 1. INMUNODIAGNOSTICO I Y II LINDSAY BORJAS
  • 2. DEFINICION La técnica consiste en preparar cortas secuencias de DNA de una sola hebra, llamadas sondas, que son complementarias de las secuencias de DNA que se quieren marcar y examinar. Es muy utilizada en la detección de anomalías cromosómicas. alta sensibilidad y especificidad
  • 3. SONDAS Son secuencias cortas de ADN de una sola hebra, que son complementarias de las secuencias de ADN que se quieren marcar y examinar.
  • 4. Sondas especificas de un locus Hibridan a una región particular de un gen. Esta sonda es útil cuando se ha aislado una pequeña parte de un gen y se quiere averiguar en que cromosoma se encuentra. Sondas centroméricas contienen secuencias complementarias de las secuencias repetidas que se encuentran en los centrómeros de los cromosomas. Como pueden utilizarse sondas de diferentes colores, cada cromosoma puede ser marcado de manera distinta, con lo que se puede averiguar si un individuo tiene el número correcto Sondas para cromosomas completos Son colecciones de sondas de un tamaño reducido, cada una de las cuales se hibrida a una secuencia diferente a lo largo de todo un cromosoma. Utilizando estas librerias de sondas, se puede marcar todo un cromosoma generando un cariotipo espectral.
  • 5. PROCEDIMIENTO A . Moter ,U . B . Gobel,2000
  • 6. R. Amann, B. Fuchs, 2008
  • 8. HISTORIA Las primeras técnica de FISH fue desarrollada, independientemente por Padue, Gall, John y sus colaboradores en 1969, pero fue propuesto por Olsen. En 1989, DeLong y su equipo de trabajo emplearon oligonucleótidos marcados con fluorocromos para detectar células microbianas crecidas de manera individual.
  • 9. APLICACIONES Detecta anomalías: Aneuploidía, la pérdida de una región cromosómica, un cromosoma entero o para monitorizar la progresión de una aberración. En el diagnóstico de una enfermedad genética. FISH se puede aplicar a la investigación como: el mapeo de genes, identificación de nuevos oncogenes que contribuyen a diversos tipos de cáncer.
  • 10.
  • 11. VENTAJA Proporciona una resolución considerablemente superior a la de las técnicas de bandas de alta resolución; ya que puede detectar deleciones de tamaño tan pequeño como 1 millón de pares de bases. Pueden detectar aneuploidias empleando cromosomas en interfase, no es necesario estimular a las células para que se dividan con el fin de obtener cromosomas en metafase.
  • 12. COMPARACION Convencional: Técnicas de bandeo de cromosomas (tinción Giemsa) revolucionó el análisis citogenético y han sido fundamentales en la comprensión de los cambios genéticos en ambas enfermedades constitucionales y adquiridos. La resolución del análisis de bandas es de tal manera que sólo puede detectar reordenamientos que implican 0,3 Mb de ADN. Técnicas de bandas se limitan a células mitóticas activas.
  • 13. La tinción de cromosomas con Giemsa permite el análisis de los diferentes tipos como: cromosomas policéntricos, cromosomas en anillo, intercambios de cromátidas y fragmentos. Otros tipos de aberraciones cromosómicas tales como translocaciones e inversiones recíprocas no son normalmente reconocible con la tinción de Giemsa, pero pueden ser visualizados por FISH.
  • 14.
  • 15. Nueva: La tecnología de Microarreglos. Analizar diferentes tipos de muestras biológicas (tejidos, proteínas y material genético) y otras moléculas de manera simultánea por ensayo. La versatilidad de esta técnica permite utilizarla en estudios de dosis-respuesta, para establecer perfiles de expresión diferencial de genes en condiciones experimentales distintas (enfermedades y tratamientos) en el análisis de polimorfismos, presencia de metilaciones, mutaciones puntuales e identificación de blancos terapéuticos.
  • 19. Internacional System for Human Cytogenetics Nomenclature (ISCN), 2009.
  • 20. IATREIA Vol 24(3) septiembre 2011
  • 21. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  • 22. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  • 23. Acta méd. costarric. Vol 53 (1), enero-marzo 2011
  • 24. ESTUDIO DE MERCADO Y COSTOS
  • 25.
  • 26. APLICACIONES A NIVEL NACIONAL Lab. Citogenetica HNN, 2014