Laboratotio de patologia inclusion,fijacion,corte,tincion de muestras

ANATOMÍA
PATOLÓGICA
PRÁCTICA

INTEGRANTES:

-

BRAVO CRESPO LUIS ARTURO
CHONILLO FRANCO JORDI ALBERTO
FERNADEZ CHACON LUIS DAVID
LOOR VERA JOSSELYN MARIA
GARCIA ZAMBRANO ANGIE LEONOR
OBANDO CHANCAY XIOMARA DAYANA
SALAZAR ALCIVAR CRISTHIAN DAVID

1

Recolección, procesamiento de muestras
y tejidos histopatológicos

Clase #

El diagnóstico histopatológico muchas veces precede y determina la actitud
terapéutica en un caso dado. Por consiguiente, el diagnóstico de la biopsia es
siempre URGENTE. Esto es importante no sólo por la decisión terapéutica, sino que
también porque significa reducir gastos de hospitalización, ahorro de tiempo, entre
otros.

1 Recepción de muestras
Para la adecuada recolección, conservación y envío de las
muestras, es indispensable tener presentes las siguientes
normas:
1. Toda muestra debe ser perfectamente identificada.
2. Las muestras se obtienen de pacientes vivos o de una la necropsia,
3. Para la recolección de cualquier otro tipo de muestra, utilizar material
limpio y seco.
4. Los envases utilizados para el envío de muestras deben ser en lo
posible irrompibles, herméticos y de dimensiones adecuadas. Las

1


Clase #
1 Recepción de muestras
Identificación de las muestras

- Toda muestra para examen histopatológico o citológico
debe ser identificada en el frasco, sobre o bolsa con el
nombre completo del paciente y el órgano de donde
procede.

- La muestra debe acompañarse de un formulario en el
que se consigne el nombre completo y edad del
paciente, órgano de donde se obtuvo, diagnóstico y
antecedentes clínicos y médico que envía

1


Clase #

QUE ES BIOPSIA?
Puede definirse como el procedimiento en el que se
remueve tejido de un organismo vivo para examen
microscópico y así establecer un diagnóstico.
Según el tipo de muestra se
distinguen:
1) Biopsia por punción:
2) Biopsia excisional:
3) Biopsia incisional:
4) Formas especiales de biopsia.

1


Clase #
2 Preparación de muestras

a) Fijación
• Es el primer proceso en la preparación de un tejido
que engloba un conjunto de técnicas en la que se
estabilizan las proteínas y cuya finalidad es evitar la
autolisis y crecimiento bacteriano para ello se utilizan
una serie de soluciones liquidas como el formol,
bouin, y medios físicos como el calor de la llama o la
congelación de la muestra por medio del criostato).

1


Clase #


b) Inclusión
• Una vez fijado el tejido tenemos que procesarlo para su observación con
el microscopio. Hay 2 formas para endurecer el tejido la congelación y la
inclusión
• La inclusión es el método más común de endurecer
el tejido y consiste en infiltrar la muestra con
sustancias líquidas que tras un proceso de
polimerización o enfriamiento se solidifican, sin
afectar a las características del tejido.

• La congelación de los tejidos previamente fijados
permite la obtención de secciones que pueden ir
desde unas 50 µm hasta nm, para lo que se utilizan
diferentes aparatos: y el ultracriotomo para secciones
ultrafinas del orden de nm

1


Clase #


b) Inclusión

El proceso para la inclusión de un tejido con
parafina es:
o Primero una vez que ya está fijada la muestra se
procede a deshidratarla.
o Después se coloca el tejido en un recipiente para
poder llenarlo con parafina.
o Se procede a esperar que se forme el bloque.
o Una vez formado el bloque se encuentra listo para
proceder a cortar el tejido en el micrótomo

1


Clase #


Inclusión

1


Clase #


c) Corte
• Para realizar el corte de la muestra
vamos a precisar de un micrótomo,
con una buena técnica se pueden
obtener secciones (rebanaditas de
tejido) de unas 5 µm e incluso
menores en algunos casos. Durante el
corte las secciones unas pegadas a
otras forman una fila que es cómoda
de manejar y montar. El objetivo de
realizar cortes tan delgados es para
que estos puedan ser atravesados por
la luz del microscopio.

1


Clase #


c) Corte

¿Qué es un
micrótomo?

CUCHILLAS
VIDRIO/
CORTES FINOS
INSTRUMENTO
DE CORTE

CUCHILLAS
DIAMANTE/
CORTES DUROS

UTILIZAN
CUCHILLAS

CUCHILLAS
ACERO/
TEJIDOS
BLANDOS

1


Clase #


c) Corte

¿Qué es un criostato?

En ocasiones se necesitará tener un diagnóstico
más rápido de una muestra por lo que la usar la
técnica clásica de inclusión en parafina para
realizar un corte tardaría mucho, entonces se
puede congelar la muestra ganando tiempo, para
eso se necesita de un criostato.
Un CRIOSTATO en patología es un micrótomo
montado en el interior de un congelador para el
procesamiento de tejido congelado, puede
congelar hasta temperaturas de -35° C, pero en el
laboratorio se trabaja entre -20°C a -25°C

1


Clase #


d) Tinción
El método supone la aplicación de la tinción de hematoxilina, que por ser catiónica o básica, tiñe
estructuras ácidas (basofilas) en tonos azul y púrpura,como por ejemplo los núcleos celulares; y
el uso de eosina que tiñe componentes básicos (acidofilas) en tonos de color rosa, gracias a su
naturaleza aniónica o ácida, como el citoplasma.

1


Clase #


d) Tinción diferencial
Las tinciones diferenciales se utilizan para
distinguir entre tipos de microorganismos,
malformaciones, virus entre otras. La técnica de
tinción diferencial consta de dos etapas:
una tinción primaria (siguiendo el mismo
método que en una tinción simple) seguida de
una tinción de contraste.

1


Clase #


• La tinción de Gram La técnica de la tinción
de Gram fue desarrollada por el bacteriólogo danés
Christian Gram en 1884. Esta tinción clasifica las
bacterias en dos grupos: Gram positivas y Gram
negativas.

1


Clase #


•
•
•
•

La técnica incluye tinción primaria, decoloración y tinción de contraste:
1. Se tiñe el espécimen con el primer colorante, cristal violeta, que tiñe de violeta.
2. Se añade el mordiente, iodo.
3. Se aplica el agente decolorante, normalmente una solución de acetona o etanol. En
este momento, las bacterias Gram negativas pierden su tinción violeta, pero las Gram
positivas retienen el colorante.
• 4. Como colorante de contraste se añade safranina, que tiñe de rosa las bacterias Gram
negativas, previamente decoloradas; mientras que a las bacterias Gram positivas les
proporciona un color violeta más intenso.

1


Clase #



1


Clase #


• La tinción de ácido-alcoho] resistencia(Ziehl-Neelsen) La
tinción diferencial de ácido-alcohol resistencia fue
desarrollada por Paul Ehrlich en 1 882. Actualmente se utiliza
una modificación de la técnica de Ehrlich que recibe el nombre
de tinción de Ziehl-Neelsen. Esta tinción sirve para teñir
bacterias del género Mycobacterium, el resto de las bacterias
se tiñen de azul por el colorante de contraste. M.
tuberculosis, causante de la tuberculosis y M leprae, causante
de la lepra o enfermedad de Hansen, se identifican mediante
esta tinción.

1


Clase #


• La plata metanamina de Grocott es un método
de tinción especial más empleado para hongos. La reacción
tintorial está basada en que, en presencia de ácido peryódico,
los polisacáridos de la pared celular de los hongos
son oxidados a aldehídos; éstos, a su vez, reducen el
complejo nitrato-plata metanamina (o metenamina)
produciendo una coloración de café a negra, debido al
depósito de plata reducida en los lugares de localización de
los aldehídos.

1


Clase #


e) Observación
PROCESO MACROSCOPICO
Comprende el estudio de sus
características organolépticas, tales como:
• Ubicación o localización
• Tamaño
• Peso
• Forma
• Consistencia
• Descripción superficie externa
• Descripción superficie de corte

1


Clase #


e) Observación

PROCESO MACROSCOPICO

Etiqueta:
Nombre Paciente
Fecha
Localización de la lesión
Diagnóstico clínico
Nombre del doctor
Hospital

1


Clase #


e) Observación
PROCESO MICROSCOPICO

El microscopio es una herramienta de gran importancia para
la observación e identificación de los microorganismos.
Método:
• De Menor a Mayor aumento
• Recorrido sistemático
• Centrado del campo óptico

1


Clase #


e) Observación

Pautas Fundamentales
1. Criterio tridimensional
2. Elementos básicos:
• Células
• Sustancias intercelulares
• Líquidos
• Artefactos

1


Clase #


e) Observación


Debemos distinguir entre las técnicas para
observación de microorganismos vivos y las
preparaciones para tinción. Las tinciones ofrecen
una información adicional a la simple observación
de la morfología, ya que ponen de manifiesto
características de la pared celular o la existencia
de estructuras especiales, como las esporas
bacterianas.

Colecistitis
crónica con
reagudización
hemorrágica en
granulación.

Ulcera gástrica
activa, en
organización
fibrosa avanzada
y en partes con
reepitelización.

Proceso inflamatorio
crónico de reacción
a cuerpo extraño
(Granuloma de
reacción a cuerpo
extraño).

1


Clase #

3 Acortamiento del proceso

En muchas ocasiones en una cirugía es
necesario la
extracción de muestras de tejidos, que
nos permitan definir si el tejido
es benigno o maligno, y que nos permita
. tomar una rápida decisión.

1


Clase #


Se realiza una biopsia del tipo
necesario, se realiza un análisis
macroscópico, se coloca la muestra en
el OCT (un alcohol viscoso con polivinil
y polienglicol) el cual permite mejor
fijación, congelación y corte

1


Clase #


Una vez colocado el tejido
En el molde para ser congelado,
lo sometemos a - 35° centígrados
dentro de la parrilla del criostato

1


Clase #


Dentro del Criostato, también
contamos con un Micrótomo el cual
utilizamos para realizar el corte
deseado

1


Clase #


Una vez que ya se encuentran
hechos los cortes o el corte
deseado, procedemos a a colocarlo
en la laminilla

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Clase #


Procedemos a teñir, los tejidos
pueden teñirse en Hematoxilina
Eosina, o también en Azul de
Toluideno

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