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Evaluación del efecto
antagónico de aislados de
Trichoderma sp. contra el Fito-
patógeno Fusarium sp. en la
planta de frijol (Phaseolus
Vulgaris)
Expuesta a diferentes
condiciones.
Institución Educativa Colegio Loyola.
 Juan Diego Quiceno Hernandez
 Julian Andres Agudelo Castrillon.
 Laura Isabel Gómez Arango
 Miguel Angel Areiza Sanchez.
Página 1
FORMATO ANTEPROYECTO
INFORMACIÓN GENERAL:
Título del proyecto
Deben darle al anteproyecto un nombre que
refleje la pregunta de investigación que
seleccionaron. Preferiblemente corto y
llamativo, para invitar a la lectura.
Evaluación del efecto antagónico de
aislados de Trichoderma sp. contra el
Fito-patógeno Fusarium sp. en la planta
de Phaseolus Vulgaris (frijol)
Expuesta a diferentes condiciones.
Selección del área temática más cercana al proyecto: Esta clasificación les permitirá
definir las metas del anteproyecto. Elijan una de ellas, según el enfoque de su proyecto.
Área temática Ejemplos
Marque con
una x
Biociencias
Zoología (animales), botánica (plantas), microbiología
(microorganismos como bacterias, virus, protozoos, etc.),
genética, biología molecular y celular, bioquímica,
biotecnología, ecología, conservación, ciencias
agropecuarias y afines.
x
Química
Química orgánica, inorgánica, analítica, fisicoquímica,
química de los productos naturales y afines.
Ciencias
Matemáticas y Física
Estadística, modelación matemática, física, biofísica,
óptica, acústica y afines.
Ciencias de la Tierra
y el Espacio
Astronomía, geología, minería, climatología, sismología y
afines.
Ciencias Sociales y
Humanas
Psicología, educación y pedagogía, sociología,
antropología, arqueología, paleontología, historia,
economía, comunicación, periodismo, lingüística, artes,
literatura, música y afines.
Servicios Públicos y
Medio Ambiente
Agua, gas, energía (de combustibles fósiles y
alternativas), saneamiento, transporte (terrestre, aéreo y
acuático), gestión ambiental, impacto ambiental,
contaminación, reciclaje y afines.
Página 2
Ingenierías y
Tecnologías
Ingeniería civil, electrónica, eléctrica, mecánica o de
sistemas, desarrollo de software, TICs y
telecomunicaciones, robótica, bioingeniería, ingeniería de
materiales, nanotecnología y afines.
Medicina y Salud
Promoción y prevención, atención, nutrición, salud pública,
salud ocupacional, deporte, epidemiología, enfermedades
y afines
Selección de la modalidad del (de los) investigador(es):
Modalidad
Marque con
una X
Modalidad III. Educación básica secundaria (6° - 9°)
Modalidad IV. Media vocacional (incluye media técnica) (10°-11°) x
DATOS PERSONALES DE LOS INVESTIGADORES
Estudiantes que hacen parte de la investigación. Sugerimos máximo 3 estudiantes por grupo, pero podrán
presentarse hasta 6 por grupo. En ese caso, agregar las filas necesarias para incluir a todos los estudiantes en
este formato
Nombre del investigador principal (estudiante
encargado de las comunicaciones con la Feria y con
el asesor)
Julian Andres Agudelo Castrillon
Grado del investigador principal
Decimo
Dirección electrónica del investigador
principal
Julian.andres109@gmail.com
Teléfono (fijo y celular) del investigador
principal
Tel:269-48-99
Cel:301-688-8228
Documento de identidad del investigador
principal
T.I:98080761287
Nombre del coinvestigador
(los coinvestigadores son los otros estudiantes
investigadores que hacen parte del proyecto)
Juan Diego Quiceno Hernandes
Miguel Anguel Areiza Sanchez
Laura Isabel Gomez Arango
Grado del coinvestigador
Decimo
Decimo
Decimo
Dirección electrónica del coinvestigador Juan: pajarofokin@gmail.com
Página 3
Laura: lawgomez101@gmail.com
Miguel: miguel-9806@hotmail.com
Teléfono (fijo y celular) del coinvestigador
Juan: Tel:337-51-54
Cel:314-895-0965
Laura: 586-15-60
Tel: Tel: 284-73-23
Cel: 321-621-4969
Documento de identidad del coinvestigador
Juan: T.I: 97051505143
Laura:T.I: 99011012015
Miguel:T.l: 98060260966
DOCENTE ACOMPAÑANTE
Nombre del docente
William Enrique Perez Campo
Área del docente
Biologia
Dirección electrónica del docente
Wilper08@gmail.com
Teléfono (fijo y celular) del docente
Cel: 301-370-3442
ASESOR
Datos del asesor
Ana Lorena Ro mero Arroyave
Biotecnologia, microbiología industrial y
ambiental
Lorena4656@hotmatmail.com
Cel: 301-4365-865
INSTITUCIÓN EDUCATIVA
Nombre de la institución
I.E Colegio Loyola para la ciencia y la
innovación.
Municipio
Bello
Duración del proyecto (en meses)
Aproximadamente 23 meses
Indicar si este proyecto es continuación de No es una continuación, aunque ya
Página 4
otro que haya participado en ferias
anteriores.
En caso afirmativo indicar nombre exacto del
proyecto y año de participación.
participamos con un proyecto (Fung-solanum,
2013)
RESUMEN
En la planta de frijol (Phaseolus Vulgaris) Se ha encontrado
un hongo que es nocivo para esta, el hongo se llama
Fusarium sp. lo que le hace este hongo a la planta es cerrar
los vasos vasculares, esto no permite en la plata el transporte
del agua y lo que ocasiona que la plata se seque. Hay un
hongo llamado Trichoderma sp. que presenta un efecto
antagonico (no permite su crecimiento y esporulación) frente al
Fusarium sp., lo esperado es que al ser Fusarium sp.
expuesto con Trichoderma sp. en un cultivo, la enfermedad
reduzca el numero de contagiados.
Página 5
Problemática
Según se ha consultado en todo tipo de fuentes de información
nos enteramos que en la planta del frijol habían muchos tipos
de microorganismos presentes, ocasionando (miles de
pérdidas al año), también se encontró que uno de los
principales hongos fueron: fusarium que es uno de los que
más afectan la planta, ya que tiene una incidencia de 71%,en
ella, fuera de este se hallaron más como penisillium que su
incidencia es de 8%, Rbizoctonia incidencia 7% Por.
principios observamos que el fusarium acababa con la planta
no solo por su incidencia si no también ya que sus conidias
son un medio de transporte muy veloz
Página 6
JUSTIFICACION.
En el cultivo del frijol se presenta un hongo nocivo para él ,
este hongo se llama Fusarium sp. , Lo que hace este, es
tapar los conductos vasculares de la planta, (donde se
transporta el agua para la hidratación ) esto provoca la
marchitación de la planta del frijol. Lo que se ara es
implementar aislados de trichoderma sp. (hongo) que
presenta un efecto antagónico frente a fusarium sp. y así
darle una posible solución a esta problemática que tanto afecta
a los agricultores en Colombia. Según bibliografía de
universidades que trataron de darle una posible solución esto
se halló que hay una gran serie de microorganismos que
presentan efecto antagónico frente a fusarium sp.
Página 7
PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN.
¿Cómo varia el crecimiento y ( porcentaje de inhibición de las
esporas )reproducción de las esporas del fito-patogeno
Fusarium sp. Cuando se coloca en contacto con aislados de
Trichoderma sp. En diferentes condiciones, laboratorio,
invernadero y campo?
Lunes:
Determinación de porcentaje de esporas.
Identificación macro y micro de los fito-patogeno
partes de los hongos
espora microscópica
estructura del hongo(identificación)
Glosario
ir a la finca (muestreo)
Viernes:
Traer como se identifica a los hongos macro y micro.
Se tendra que hacer diarios
fowoufh:
Revicion de proyecto (teórica y prácticamente)
Hacer preliminares:
Página 8
OBJETIVO GENERAL.
Analizar el efecto antagónico de aislados de Trichoderma
sp. contra el Fitopatógeno fusarium sp. en diferentes
condiciones de laboratorio, invernadero y campo.
Página 9
Objetivos específicos:
• Aislar e identificar los hongos presentes en el grano
de frijol
• Evaluar la capacidad antagonica del Thichoderma
sp. Contra el Fusarium sp.
• Liberar el hongo Tricoderma sp. en un invernadero
con plantas de frijol contagiadas con fusarium sp..
• Exponer las plantas de un cultivo de frijol en el
campo con Trichoderma sp..
Página 10
METODOLOGIA.
1. Recolección de muestras.
Se recolectaran las muestras de un cultivo de frijol
del Nor-oriente antioqueño, se tomaran muestras de
la raíz de la plata y de sus granos, todas las
muestras se recolectaran desde el misma cultivo y
se depositaran en bolsas ermiticas estériles con
guantes, batas y tapabocas, transportadas en una
nevera de icopor llena de hielo y así llevadas al
congelador.
2. Aislamiento e identificación del hongo.(Fusarium
sp.)
Las muestras (granos de frijol) se colocaran en cajas
de Petri con agar PDA al 2% y con antibiótico
Rifucina (400 microlitros/L), todo esto cuan este
combinado se dejara reposar por 2 min hay se
echan los granos, 5 en cada caja de Petri, todos los
hongos se encubaran a 20°C – 25°C por 48 horas (2
dias) observación del hongo cada 12 horas.
3. Evaluación de la capacidad antagónico In-vitro
Página 11
de Trichoderna sp. Con Fusarium sp.
Se colocaran los asilados de fusarium sp. y a
Trichoderma sp. En conjunto en cajas de Petri y se
trataran dos controles, el control negativo que es el
del agar PDA y el tratamiento testigo, que es la
medición del radio de las cajas cada 24 horas esto
se le hará con el patógeno (fusarium) y se
encubaran a 30 grados centígrados en la oscuridad.
MARCO TEORICO.
ARTICULO 1
Evaluación de la capacidad antagónica de
Trichoderma koningii sobre Fusarium sp. f. sp. lycopersici
Página 12
Evaluation of the antagonistic capacity of Trichoderma koningii
above Fusarium sp. f. sp. lycopersici
M.E. Paez1 y N. Sanabria de Albarracin2
1Ministerio del Ambiente, Centro Nacional de Conservación de los
Recursos Genéticos. Apartado 4661, Maracay 2101-A 2Universidad
Central de Venezuela, Facultad de Agronomía.
Resumen
Fusarium sp. f. sp. lycopersici causa la marchitez vascular del
tomate, afectando su rendimiento en el Estado Aragua (Venezuela),
en la bús-queda de alternativas para su control se realizó la
presente investigación con el objetivo de determinar la capacidad
antagónica de diferentes aislamientos de Trichoderma koningii,
provenientes de cuatro localidades, sobre el patógeno. Se evaluaron
en condiciones in vitro , en medio papa-dextrosa-agar acidificado
(PDAA), incubándolos en oscuridad por 96h a 30ºC. Se estableció
un diseño completamente aleatorizado, con cuatro tratamientos y
cuatro repeticiones. El aislamiento T. koningii de Guanayen produjo
el mayor porcentaje de inhibición de crecimiento (PIC=22,50%) a
las 24 horas y de porcentaje de inhibición de esporulación
(PIE=59,64%) del patógeno, siendo la antibiosis el mecanismo
de acción en todos los tratamientos.
Palabras clave: Control biológico,
Fusarium sp. f. sp. lycopersici,
Trichoderma koningii.
Introducción
Diferentes especies del género Fusarium son
Página 13
responsables de causar enfermedades en importantes
culti-vos, particularmente Fusarium sp. f. sp. lycopersici
(Sacc.) Snyder & Hansen, es responsable de la marchitez
vascular del tomate (Lycopersicon esculentum Mill.). En-
tre los métodos más empleados para su control esta la
aplicación de agroquímicos con la obtención de re-
sultados desfavorables para el am-biente y la población,
por lo cual sur-gen alternativas como el control bio-lógico
dentro de un manejo integrado de enfermedades, a través
del uso de bacterias del género Pseudomonas y hongos
como Trichoderma,
Gliocadium y Penicillium (1, 2).
El género Trichoderma es el más empleado en el
control de enfermeda-des causadas por hongos y puede
ac-tuar por medio de una combinación de diferentes
mecanismos de acción como antibiosis, competencia,
micoparasitismo e inducción de resis-tencia a la planta
que van a depender de la diferencia en cuanto a la pro-
ducción de sustancias con capacidad inhibitoria en los
diferentes aisla-mientos del antagonista, así como de la
interacción existente con el aisla-miento patógeno y con la
planta (3). Por lo antes expuesto se realizó la pre-sente
investigación con el objetivo de evaluar en condiciones in
vitro la ca-pacidad antagónica de aislamientos de
Trichoderma koningii Oudem, so-bre F. sp. f. sp.
lycopersici de cuatro localidades del Estado Aragua,
Venezuela.
Artículo en portugués 2
Seleção de antagonistas fúngicos a Fusarium
solani e Fusarium sp. em substrato comercial para mudas
Selection of fungi antagonistic to Fusarium solani
and Fusarium sp. in commercial substrate for seedlings
Luciana Zago EthurI Elena BlumeI* Marlove
Fátima Brião MunizI Maria Georgina Veiga FloresI
- NOTA -
Página 14
RESUMO
Testes in vitro são geralmente utilizados para a
seleção inicial de agentes de biocontrole contra fungos de
solo, faltando metodologias que utilizem solo e/ou substrato. O
objetivo deste trabalho foi realizar a seleção massal de
isolados fúngicos antagônicos a F. solani e F. sp. em
substrato comercial para mudas. Foram realizados dois
experimentos com os patógenos F. solani e F. sp. e com 98
possíveis antagonistas fúngicos, dos gêneros
Trichoderma, Penicillium, Aspergillus e Cladosporium. A
suspensão dos patógenos foi inserida no substrato, em copos
plásticos, sendo acrescentada, cinco dias depois, a suspensão
dos demais fungos. Avaliou-se o número de unidades
formadoras de colônia de F. solani e F. sp. por grama de
substrato após nove dias. Dos 98 isolados utilizados contra F.
solani, 43 % não diferiram da testemunha e 57% reduziram o
seu desenvolvimento em substrato, sendo que os três
melhores isolados fúngicos foram do gênero Trichoderma. Os
três isolados de Trichoderma selecionados para F. solani
também foram eficientes para F. sp..
Palavras-chave: biocontrole, fungos de solo, Trichoderma
sp.p.
ABSTRACT
Tests in vitro are usually used for the initial selection of
biocontrol agents against soil fungi, lacking methodologies
using soil and/or substrate. The objective of this research was
to accomplish the mass selection of fungi isolates antagonistic
to F. solani and F. sp. in commercial substrate for seedlings.
Two experiments were conducted, with the pathogens
F. solani and F. sp., and 98 possible antagonistic fungi of the
genera Trichoderma, Penicillium, Aspergillus and
Cladosporium. The suspension of the pathogens was
inoculated
Página 15
in the substrate, in plastic cups, and the suspension of the
other fungi was added five days later. The number of colony-
forming unit of F. solani and F. sp./g of substrate was counted
after nine days. Of the 98 isolates used against F. solani, 43%
did not differ from the control, and 57% reduced its
development in the substrate, with the three best isolates
belonging to the genus Trichoderma. The three isolates of
Trichoderma selected for F. solani were also efficient against
F. sp..
Key words: biocontrol, soil fungi, Trichoderma sp.p.
F. solani (Mart.) Hans e F. sp.
Schlecht são fitopatógenos habitantes do solo causadores de
podridões de raiz e murchas, respectivamente. Esses
patógenos são importantes devido aos danos econômicos
causados no setor agrícola e por sua distribuição cosmopolita
(GHINI & NAKAMURA, 2001). O controle de doenças
causadas por patógenos de solo é dificultado devido à
complexidade do ambiente, no qual o controle químico tem
sua eficiência prejudicada ou sua aplicação dificultada. Além
disso, o controle químico pode causar danos na microbiota
benéfica e deixar resíduos no ambiente, buscando-se no
controle biológico uma alternativa mais sustentável.
Um dos pontos centrais para o biocontrole ser efetivo
contra fungos de solo é o antagonista, pois as chances de
sucesso nos programas de controle biológico estão no
isolamento e na seleção de
I
Departamento de Defesa Fitossanitária, Centro de Ciências
Rurais (CCR), Universidade Federal de Santa Maria
(UFSM), 97105-900, Santa Maria, RS, Brasil. E-
mail:eblume@smail.ufsm.br. *Autor para correspondência.
Rece
bido
para
publi
caçã
o
11.10.
06
Apro
vado
em
Página 16
microrganismos antagônicos eficientes (GHINI & KIMATI, 1989).
A maior parte dos trabalhos que visam à seleção de antagonistas
fúngicos a fitopatógenos ocorre com testes in vitro, que são mais
fáceis e rápidos que os efetuados com solo, permitindo que uma
grande população seja avaliada (MARIANO, 1993), mas que
nem sempre apresentam correlação com os resultados obtidos
em condições de campo (GHINI & NAKAMURA, 2001).
Para Trichoderma sp.p., os testes in vitro mais
utilizados na seleção em massa de isolados antagonistas de
fungos de solo são o pareamento de culturas (confronto direto) e
a detecção de metabólitos voláteis e não-voláteis, todos
realizados em meios de cultura à base de ágar (BELL et al.,
1982; ASKEW & LAING, 1994; PATRICIO et al., 2001; ETHUR et
al., 2005).
Uma alternativa à seleção in vitro, para a supressividade
de solos contra Fusarium, foi proposta por TOYOTA et al.
(1996) e GHINI & NAKAMURA (2001), baseando-se no
desenvolvimento do patógeno sobre agregados de solo
previamente colonizados por possíveis antagonistas. Entretanto,
essa metodologia é trabalhosa e difícil de ser empregada em
seleção massal com vários isolados de possíveis antagonistas.
Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi realizar seleção
massal de isolados fúngicos antagônicos a F. solani e F. sp. em
substrato comercial para mudas, para serem utilizados em
programas de controle biológico.
Nos ensaios, foram utilizados um isolado de F. solani e
dois isolados de F. sp., causadores de murcha no pepineiro e no
tomateiro, e 98 isolados fúngicos de possíveis antagonistas,
obtidos de solo não-rizosférico e rizosférico dessas olerícolas.
No primeiro experimento para a seleção de antagonistas,
foram utilizados os 98 isolados dos gêneros Trichoderma (73
isolados), Penicillium (14),
Aspergillus (7) e Cladosporium (4) e um isolado de F. solani.
O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com
99 tratamentos (98 isolados de possíveis antagonistas e
testemunha apenas com F. solani), com quatro repetições.
O fitopatógeno foi repicado para placas de Petri
contendo meio NS (Nash & Snyder - 20g de ágar, 15g de
peptona, 0,5g de MgSO4.7H 2O, 1,0g de KH2PO 4, 1g de
quintozene e 1L de água), as quais foram deixadas em
incubadora a 24ºC por 7 dias. Após isso, foram acrescentados
3mL de água destilada e esterilizada por placa, e o micélio e os
esporos foram removidos com o auxílio da alça de Drigalsky,
formando uma suspensão. As suspensões foram ajustadas para
106 esporos mL-1
.
Dois gramas de substrato (não esterilizado) foram
adicionados em copos plásticos com capacidade para 50mL. Em
seguida, foi inoculado 1mL da suspensão do fitopatógeno no
substrato e os copos foram fechados com papel filme e papel
manteiga. Os copos foram deixados em temperatura ambiente e,
a cada dois dias, foi acrescentado 1mL de água destilada e
esterilizada para evitar o ressecamento do substrato. Cinco dias
depois da inoculação do patógeno, após ter ocorrido a
colonização do substrato (constatada por testes anteriores,
dados não publicados), foi acrescentado 0,5mL da suspensão
dos possíveis antagonistas fúngicos (108 esporos mL-1
) retirados
com o auxílio de alça de Drigalsky de placas de Petri contendo
meio BDA (batata, dextrose e ágar). No tratamento testemunha,
foi aplicado 0,5mL de água destilada e esterilizada. Após nove
dias, os dois gramas de substrato dos copos foram
acrescentados a frascos de vidro com 98mL de água destilada e
esterilizada e colocados em agitador mecânico por 30 minutos.
Dessa suspensão original, foram retirados 5mL e acrescentados
em frasco com 95mL de água destilada e esterilizada. Dessa
diluição, uma alíquota de 1mL foi espalhada em placas de Petri
contendo meio NS, utilizando-se quatro repetições. Antes de o
meio de cultura ser plaqueado, acrescentaram-se 5mL de
cloranfenicol 10% para cada litro de meio de cultura. As placas
foram incubadas em câmara climatizada a 24ºC, com
fotoperíodo de 12h, durante sete dias. Após a incubação, o
número de colônias de Fusarium foi contado em cada placa e
calculado o número de unidades formadoras de colônia (UFC) g-1
de substrato.
Para o segundo experimento, o delineamento
experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial
16 (15 isolados fúngicos e testemunha) x 2 (isolados de F. sp.),
com 4 repetições. Foram utilizados 15 isolados fúngicos dos
gêneros
Trichoderma (9 isolados), Penicillium (2), Aspergillus
(2) e Cladosporium (2); e dois isolados de F. sp., que foram
utilizados separadamente. Foi realizado sorteio de dois isolados
fúngicos para cada gênero e, para Trichoderma, foram
sorteados seis mais os três isolados que apresentaram melhor
desempenho no experimento anterior. A metodologia foi a
mesma utilizada no primeiro experimento.
Os resultados foram submetidos à análise de variância
pelo teste F e ao teste de Tukey a 5%, para comparação de
médias. As médias em UFC de F. solani e F. sp. foram
transformadas para LOG10 (UFC + 1). As análises foram
realizadas com o auxílio do programa estatístico SOC
(EMBRAPA, 1997).
Dos 98 isolados fúngicos utilizados como possíveis
antagonistas, 42 isolados (43%) não diferiram da testemunha e
os demais isolados reduziram
BIBLIOGRAFIA.
http://www.scielo.br/pdf/cr/v37n6/a47v37n6.pdf
REFERÊNCIAS
ASKEW, D.J.; LAING, M.D. The in vitro screening of 118
Trichoderma isolates for antagonism to Rhizoctonia solani and
an evaluation of different environmental sites of Trichoderma as
sources of aggressive strains. Plant and Soil, v.159, p.277-281,
1994.
BELL, D.K. et al. In vitro antagonism of Trichoderma sp.ecies
against six fungal plant pathogens. Phytopathology, v.72, n.4,
p.379-382, 1982.
EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária.
Ambiente de software NTIA, versão 3.2.2 ; manual do
usuário. Campinas: Centro Nacional de Pesquisa Tecnológica
em Informática para Agricultura, 1997. 258p.
ETHUR, L.Z. et al. Fungos antagonistas a Sclerotinia
sclerotiorum em pepineiro cultivado em estufa. Fitopatologia
Brasileira, v.30, n.2, p.127-133, 2005.
GHINI, R.; KIMATI, H. Método de iscas para obtenção de
isolados de Trichoderma antagônicos a Botrytis cinerea.
Jaguariúna: EMBRAPA-CNPDA, 1989. 13p. (Boletim de
Pesquisa, 3).
GHINI, R.; NAKAMURA, D. Seleção de antagonistas e nutrientes
que induzem supressividade de solos a Fusarium sp. f. sp.
phaseoli em microcosmos e in vivo. Summa
Phytopathologica, v.27, n.3, p.318-322, 2001.
MARIANO, R.L.R. Métodos de seleção in vitro para o controle
microbiológico de patógenos de plantas. Revisão Anual de
Patologia de Plantas, v.1, p.369-409, 1993.
PATRICIO, F.R.A. et al. Seleção de isolados de Trichoderma
sp.p. antagônicos a Pythium aphanidermatum e Rhizoctonia
solani. Summa Phytopathologica, v.27, p.223-229, 2001.
TOYOTA, K. et al. Microbiological factors affecting the
colonisation of soil aggregates by Fusarium sp. f. sp. raphani.
Soil Biology & Biochemistry, v.28, n.10, p.1513-1521, 1996.
http://www.revfacagronluz.org.ve/PDF/supl_mayo_2007/v24s
upl5.pdf
REFERENCIAS
1. Abdelhaq, H. 2006. Integrated Production and Protection in
Greenhouse Crops. Institut Agronomique et Vétérinaire
Hassan II Complexe Horticole d’Agadir. BP: 12042. 95-112.
2. Elad, Y. y K. F. Baker, 1985. The role of competition for irn
and carbon in supresión of clamydospore germination of
Fusarium spp. by Pseudomonas spp. Phytpathology.
75:1053-1059.
3.González, R. M., G. L. Castellanos, F. M. Ramos y G. G.
Pérez. 2002. Utilización de Trichoderma sp.p., para el
control de hongos patógenos de la semilla y del suelo en el
cultivo del fríjol. Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal.
7 p.
Nyre Bonne
Nyre Bonne

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  • 1. Evaluación del efecto antagónico de aislados de Trichoderma sp. contra el Fito- patógeno Fusarium sp. en la planta de frijol (Phaseolus Vulgaris) Expuesta a diferentes condiciones. Institución Educativa Colegio Loyola.  Juan Diego Quiceno Hernandez  Julian Andres Agudelo Castrillon.  Laura Isabel Gómez Arango  Miguel Angel Areiza Sanchez. Página 1
  • 2. FORMATO ANTEPROYECTO INFORMACIÓN GENERAL: Título del proyecto Deben darle al anteproyecto un nombre que refleje la pregunta de investigación que seleccionaron. Preferiblemente corto y llamativo, para invitar a la lectura. Evaluación del efecto antagónico de aislados de Trichoderma sp. contra el Fito-patógeno Fusarium sp. en la planta de Phaseolus Vulgaris (frijol) Expuesta a diferentes condiciones. Selección del área temática más cercana al proyecto: Esta clasificación les permitirá definir las metas del anteproyecto. Elijan una de ellas, según el enfoque de su proyecto. Área temática Ejemplos Marque con una x Biociencias Zoología (animales), botánica (plantas), microbiología (microorganismos como bacterias, virus, protozoos, etc.), genética, biología molecular y celular, bioquímica, biotecnología, ecología, conservación, ciencias agropecuarias y afines. x Química Química orgánica, inorgánica, analítica, fisicoquímica, química de los productos naturales y afines. Ciencias Matemáticas y Física Estadística, modelación matemática, física, biofísica, óptica, acústica y afines. Ciencias de la Tierra y el Espacio Astronomía, geología, minería, climatología, sismología y afines. Ciencias Sociales y Humanas Psicología, educación y pedagogía, sociología, antropología, arqueología, paleontología, historia, economía, comunicación, periodismo, lingüística, artes, literatura, música y afines. Servicios Públicos y Medio Ambiente Agua, gas, energía (de combustibles fósiles y alternativas), saneamiento, transporte (terrestre, aéreo y acuático), gestión ambiental, impacto ambiental, contaminación, reciclaje y afines. Página 2
  • 3. Ingenierías y Tecnologías Ingeniería civil, electrónica, eléctrica, mecánica o de sistemas, desarrollo de software, TICs y telecomunicaciones, robótica, bioingeniería, ingeniería de materiales, nanotecnología y afines. Medicina y Salud Promoción y prevención, atención, nutrición, salud pública, salud ocupacional, deporte, epidemiología, enfermedades y afines Selección de la modalidad del (de los) investigador(es): Modalidad Marque con una X Modalidad III. Educación básica secundaria (6° - 9°) Modalidad IV. Media vocacional (incluye media técnica) (10°-11°) x DATOS PERSONALES DE LOS INVESTIGADORES Estudiantes que hacen parte de la investigación. Sugerimos máximo 3 estudiantes por grupo, pero podrán presentarse hasta 6 por grupo. En ese caso, agregar las filas necesarias para incluir a todos los estudiantes en este formato Nombre del investigador principal (estudiante encargado de las comunicaciones con la Feria y con el asesor) Julian Andres Agudelo Castrillon Grado del investigador principal Decimo Dirección electrónica del investigador principal Julian.andres109@gmail.com Teléfono (fijo y celular) del investigador principal Tel:269-48-99 Cel:301-688-8228 Documento de identidad del investigador principal T.I:98080761287 Nombre del coinvestigador (los coinvestigadores son los otros estudiantes investigadores que hacen parte del proyecto) Juan Diego Quiceno Hernandes Miguel Anguel Areiza Sanchez Laura Isabel Gomez Arango Grado del coinvestigador Decimo Decimo Decimo Dirección electrónica del coinvestigador Juan: pajarofokin@gmail.com Página 3
  • 4. Laura: lawgomez101@gmail.com Miguel: miguel-9806@hotmail.com Teléfono (fijo y celular) del coinvestigador Juan: Tel:337-51-54 Cel:314-895-0965 Laura: 586-15-60 Tel: Tel: 284-73-23 Cel: 321-621-4969 Documento de identidad del coinvestigador Juan: T.I: 97051505143 Laura:T.I: 99011012015 Miguel:T.l: 98060260966 DOCENTE ACOMPAÑANTE Nombre del docente William Enrique Perez Campo Área del docente Biologia Dirección electrónica del docente Wilper08@gmail.com Teléfono (fijo y celular) del docente Cel: 301-370-3442 ASESOR Datos del asesor Ana Lorena Ro mero Arroyave Biotecnologia, microbiología industrial y ambiental Lorena4656@hotmatmail.com Cel: 301-4365-865 INSTITUCIÓN EDUCATIVA Nombre de la institución I.E Colegio Loyola para la ciencia y la innovación. Municipio Bello Duración del proyecto (en meses) Aproximadamente 23 meses Indicar si este proyecto es continuación de No es una continuación, aunque ya Página 4
  • 5. otro que haya participado en ferias anteriores. En caso afirmativo indicar nombre exacto del proyecto y año de participación. participamos con un proyecto (Fung-solanum, 2013) RESUMEN En la planta de frijol (Phaseolus Vulgaris) Se ha encontrado un hongo que es nocivo para esta, el hongo se llama Fusarium sp. lo que le hace este hongo a la planta es cerrar los vasos vasculares, esto no permite en la plata el transporte del agua y lo que ocasiona que la plata se seque. Hay un hongo llamado Trichoderma sp. que presenta un efecto antagonico (no permite su crecimiento y esporulación) frente al Fusarium sp., lo esperado es que al ser Fusarium sp. expuesto con Trichoderma sp. en un cultivo, la enfermedad reduzca el numero de contagiados. Página 5
  • 6. Problemática Según se ha consultado en todo tipo de fuentes de información nos enteramos que en la planta del frijol habían muchos tipos de microorganismos presentes, ocasionando (miles de pérdidas al año), también se encontró que uno de los principales hongos fueron: fusarium que es uno de los que más afectan la planta, ya que tiene una incidencia de 71%,en ella, fuera de este se hallaron más como penisillium que su incidencia es de 8%, Rbizoctonia incidencia 7% Por. principios observamos que el fusarium acababa con la planta no solo por su incidencia si no también ya que sus conidias son un medio de transporte muy veloz Página 6
  • 7. JUSTIFICACION. En el cultivo del frijol se presenta un hongo nocivo para él , este hongo se llama Fusarium sp. , Lo que hace este, es tapar los conductos vasculares de la planta, (donde se transporta el agua para la hidratación ) esto provoca la marchitación de la planta del frijol. Lo que se ara es implementar aislados de trichoderma sp. (hongo) que presenta un efecto antagónico frente a fusarium sp. y así darle una posible solución a esta problemática que tanto afecta a los agricultores en Colombia. Según bibliografía de universidades que trataron de darle una posible solución esto se halló que hay una gran serie de microorganismos que presentan efecto antagónico frente a fusarium sp. Página 7
  • 8. PREGUNTA DE INVESTIGACIÓN. ¿Cómo varia el crecimiento y ( porcentaje de inhibición de las esporas )reproducción de las esporas del fito-patogeno Fusarium sp. Cuando se coloca en contacto con aislados de Trichoderma sp. En diferentes condiciones, laboratorio, invernadero y campo? Lunes: Determinación de porcentaje de esporas. Identificación macro y micro de los fito-patogeno partes de los hongos espora microscópica estructura del hongo(identificación) Glosario ir a la finca (muestreo) Viernes: Traer como se identifica a los hongos macro y micro. Se tendra que hacer diarios fowoufh: Revicion de proyecto (teórica y prácticamente) Hacer preliminares: Página 8
  • 9. OBJETIVO GENERAL. Analizar el efecto antagónico de aislados de Trichoderma sp. contra el Fitopatógeno fusarium sp. en diferentes condiciones de laboratorio, invernadero y campo. Página 9
  • 10. Objetivos específicos: • Aislar e identificar los hongos presentes en el grano de frijol • Evaluar la capacidad antagonica del Thichoderma sp. Contra el Fusarium sp. • Liberar el hongo Tricoderma sp. en un invernadero con plantas de frijol contagiadas con fusarium sp.. • Exponer las plantas de un cultivo de frijol en el campo con Trichoderma sp.. Página 10
  • 11. METODOLOGIA. 1. Recolección de muestras. Se recolectaran las muestras de un cultivo de frijol del Nor-oriente antioqueño, se tomaran muestras de la raíz de la plata y de sus granos, todas las muestras se recolectaran desde el misma cultivo y se depositaran en bolsas ermiticas estériles con guantes, batas y tapabocas, transportadas en una nevera de icopor llena de hielo y así llevadas al congelador. 2. Aislamiento e identificación del hongo.(Fusarium sp.) Las muestras (granos de frijol) se colocaran en cajas de Petri con agar PDA al 2% y con antibiótico Rifucina (400 microlitros/L), todo esto cuan este combinado se dejara reposar por 2 min hay se echan los granos, 5 en cada caja de Petri, todos los hongos se encubaran a 20°C – 25°C por 48 horas (2 dias) observación del hongo cada 12 horas. 3. Evaluación de la capacidad antagónico In-vitro Página 11
  • 12. de Trichoderna sp. Con Fusarium sp. Se colocaran los asilados de fusarium sp. y a Trichoderma sp. En conjunto en cajas de Petri y se trataran dos controles, el control negativo que es el del agar PDA y el tratamiento testigo, que es la medición del radio de las cajas cada 24 horas esto se le hará con el patógeno (fusarium) y se encubaran a 30 grados centígrados en la oscuridad. MARCO TEORICO. ARTICULO 1 Evaluación de la capacidad antagónica de Trichoderma koningii sobre Fusarium sp. f. sp. lycopersici Página 12
  • 13. Evaluation of the antagonistic capacity of Trichoderma koningii above Fusarium sp. f. sp. lycopersici M.E. Paez1 y N. Sanabria de Albarracin2 1Ministerio del Ambiente, Centro Nacional de Conservación de los Recursos Genéticos. Apartado 4661, Maracay 2101-A 2Universidad Central de Venezuela, Facultad de Agronomía. Resumen Fusarium sp. f. sp. lycopersici causa la marchitez vascular del tomate, afectando su rendimiento en el Estado Aragua (Venezuela), en la bús-queda de alternativas para su control se realizó la presente investigación con el objetivo de determinar la capacidad antagónica de diferentes aislamientos de Trichoderma koningii, provenientes de cuatro localidades, sobre el patógeno. Se evaluaron en condiciones in vitro , en medio papa-dextrosa-agar acidificado (PDAA), incubándolos en oscuridad por 96h a 30ºC. Se estableció un diseño completamente aleatorizado, con cuatro tratamientos y cuatro repeticiones. El aislamiento T. koningii de Guanayen produjo el mayor porcentaje de inhibición de crecimiento (PIC=22,50%) a las 24 horas y de porcentaje de inhibición de esporulación (PIE=59,64%) del patógeno, siendo la antibiosis el mecanismo de acción en todos los tratamientos. Palabras clave: Control biológico, Fusarium sp. f. sp. lycopersici, Trichoderma koningii. Introducción Diferentes especies del género Fusarium son Página 13
  • 14. responsables de causar enfermedades en importantes culti-vos, particularmente Fusarium sp. f. sp. lycopersici (Sacc.) Snyder & Hansen, es responsable de la marchitez vascular del tomate (Lycopersicon esculentum Mill.). En- tre los métodos más empleados para su control esta la aplicación de agroquímicos con la obtención de re- sultados desfavorables para el am-biente y la población, por lo cual sur-gen alternativas como el control bio-lógico dentro de un manejo integrado de enfermedades, a través del uso de bacterias del género Pseudomonas y hongos como Trichoderma, Gliocadium y Penicillium (1, 2). El género Trichoderma es el más empleado en el control de enfermeda-des causadas por hongos y puede ac-tuar por medio de una combinación de diferentes mecanismos de acción como antibiosis, competencia, micoparasitismo e inducción de resis-tencia a la planta que van a depender de la diferencia en cuanto a la pro- ducción de sustancias con capacidad inhibitoria en los diferentes aisla-mientos del antagonista, así como de la interacción existente con el aisla-miento patógeno y con la planta (3). Por lo antes expuesto se realizó la pre-sente investigación con el objetivo de evaluar en condiciones in vitro la ca-pacidad antagónica de aislamientos de Trichoderma koningii Oudem, so-bre F. sp. f. sp. lycopersici de cuatro localidades del Estado Aragua, Venezuela. Artículo en portugués 2 Seleção de antagonistas fúngicos a Fusarium solani e Fusarium sp. em substrato comercial para mudas Selection of fungi antagonistic to Fusarium solani and Fusarium sp. in commercial substrate for seedlings Luciana Zago EthurI Elena BlumeI* Marlove Fátima Brião MunizI Maria Georgina Veiga FloresI - NOTA - Página 14
  • 15. RESUMO Testes in vitro são geralmente utilizados para a seleção inicial de agentes de biocontrole contra fungos de solo, faltando metodologias que utilizem solo e/ou substrato. O objetivo deste trabalho foi realizar a seleção massal de isolados fúngicos antagônicos a F. solani e F. sp. em substrato comercial para mudas. Foram realizados dois experimentos com os patógenos F. solani e F. sp. e com 98 possíveis antagonistas fúngicos, dos gêneros Trichoderma, Penicillium, Aspergillus e Cladosporium. A suspensão dos patógenos foi inserida no substrato, em copos plásticos, sendo acrescentada, cinco dias depois, a suspensão dos demais fungos. Avaliou-se o número de unidades formadoras de colônia de F. solani e F. sp. por grama de substrato após nove dias. Dos 98 isolados utilizados contra F. solani, 43 % não diferiram da testemunha e 57% reduziram o seu desenvolvimento em substrato, sendo que os três melhores isolados fúngicos foram do gênero Trichoderma. Os três isolados de Trichoderma selecionados para F. solani também foram eficientes para F. sp.. Palavras-chave: biocontrole, fungos de solo, Trichoderma sp.p. ABSTRACT Tests in vitro are usually used for the initial selection of biocontrol agents against soil fungi, lacking methodologies using soil and/or substrate. The objective of this research was to accomplish the mass selection of fungi isolates antagonistic to F. solani and F. sp. in commercial substrate for seedlings. Two experiments were conducted, with the pathogens F. solani and F. sp., and 98 possible antagonistic fungi of the genera Trichoderma, Penicillium, Aspergillus and Cladosporium. The suspension of the pathogens was inoculated Página 15
  • 16. in the substrate, in plastic cups, and the suspension of the other fungi was added five days later. The number of colony- forming unit of F. solani and F. sp./g of substrate was counted after nine days. Of the 98 isolates used against F. solani, 43% did not differ from the control, and 57% reduced its development in the substrate, with the three best isolates belonging to the genus Trichoderma. The three isolates of Trichoderma selected for F. solani were also efficient against F. sp.. Key words: biocontrol, soil fungi, Trichoderma sp.p. F. solani (Mart.) Hans e F. sp. Schlecht são fitopatógenos habitantes do solo causadores de podridões de raiz e murchas, respectivamente. Esses patógenos são importantes devido aos danos econômicos causados no setor agrícola e por sua distribuição cosmopolita (GHINI & NAKAMURA, 2001). O controle de doenças causadas por patógenos de solo é dificultado devido à complexidade do ambiente, no qual o controle químico tem sua eficiência prejudicada ou sua aplicação dificultada. Além disso, o controle químico pode causar danos na microbiota benéfica e deixar resíduos no ambiente, buscando-se no controle biológico uma alternativa mais sustentável. Um dos pontos centrais para o biocontrole ser efetivo contra fungos de solo é o antagonista, pois as chances de sucesso nos programas de controle biológico estão no isolamento e na seleção de I Departamento de Defesa Fitossanitária, Centro de Ciências Rurais (CCR), Universidade Federal de Santa Maria (UFSM), 97105-900, Santa Maria, RS, Brasil. E- mail:eblume@smail.ufsm.br. *Autor para correspondência. Rece bido para publi caçã o 11.10. 06 Apro vado em Página 16
  • 17. microrganismos antagônicos eficientes (GHINI & KIMATI, 1989). A maior parte dos trabalhos que visam à seleção de antagonistas fúngicos a fitopatógenos ocorre com testes in vitro, que são mais fáceis e rápidos que os efetuados com solo, permitindo que uma grande população seja avaliada (MARIANO, 1993), mas que nem sempre apresentam correlação com os resultados obtidos em condições de campo (GHINI & NAKAMURA, 2001). Para Trichoderma sp.p., os testes in vitro mais utilizados na seleção em massa de isolados antagonistas de fungos de solo são o pareamento de culturas (confronto direto) e a detecção de metabólitos voláteis e não-voláteis, todos realizados em meios de cultura à base de ágar (BELL et al., 1982; ASKEW & LAING, 1994; PATRICIO et al., 2001; ETHUR et al., 2005). Uma alternativa à seleção in vitro, para a supressividade de solos contra Fusarium, foi proposta por TOYOTA et al. (1996) e GHINI & NAKAMURA (2001), baseando-se no desenvolvimento do patógeno sobre agregados de solo previamente colonizados por possíveis antagonistas. Entretanto, essa metodologia é trabalhosa e difícil de ser empregada em seleção massal com vários isolados de possíveis antagonistas. Nesse contexto, o objetivo deste trabalho foi realizar seleção massal de isolados fúngicos antagônicos a F. solani e F. sp. em substrato comercial para mudas, para serem utilizados em programas de controle biológico. Nos ensaios, foram utilizados um isolado de F. solani e dois isolados de F. sp., causadores de murcha no pepineiro e no tomateiro, e 98 isolados fúngicos de possíveis antagonistas, obtidos de solo não-rizosférico e rizosférico dessas olerícolas. No primeiro experimento para a seleção de antagonistas, foram utilizados os 98 isolados dos gêneros Trichoderma (73 isolados), Penicillium (14), Aspergillus (7) e Cladosporium (4) e um isolado de F. solani. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 99 tratamentos (98 isolados de possíveis antagonistas e testemunha apenas com F. solani), com quatro repetições. O fitopatógeno foi repicado para placas de Petri contendo meio NS (Nash & Snyder - 20g de ágar, 15g de peptona, 0,5g de MgSO4.7H 2O, 1,0g de KH2PO 4, 1g de quintozene e 1L de água), as quais foram deixadas em incubadora a 24ºC por 7 dias. Após isso, foram acrescentados 3mL de água destilada e esterilizada por placa, e o micélio e os esporos foram removidos com o auxílio da alça de Drigalsky, formando uma suspensão. As suspensões foram ajustadas para 106 esporos mL-1 .
  • 18. Dois gramas de substrato (não esterilizado) foram adicionados em copos plásticos com capacidade para 50mL. Em seguida, foi inoculado 1mL da suspensão do fitopatógeno no substrato e os copos foram fechados com papel filme e papel manteiga. Os copos foram deixados em temperatura ambiente e, a cada dois dias, foi acrescentado 1mL de água destilada e esterilizada para evitar o ressecamento do substrato. Cinco dias depois da inoculação do patógeno, após ter ocorrido a colonização do substrato (constatada por testes anteriores, dados não publicados), foi acrescentado 0,5mL da suspensão dos possíveis antagonistas fúngicos (108 esporos mL-1 ) retirados com o auxílio de alça de Drigalsky de placas de Petri contendo meio BDA (batata, dextrose e ágar). No tratamento testemunha, foi aplicado 0,5mL de água destilada e esterilizada. Após nove dias, os dois gramas de substrato dos copos foram acrescentados a frascos de vidro com 98mL de água destilada e esterilizada e colocados em agitador mecânico por 30 minutos. Dessa suspensão original, foram retirados 5mL e acrescentados em frasco com 95mL de água destilada e esterilizada. Dessa diluição, uma alíquota de 1mL foi espalhada em placas de Petri contendo meio NS, utilizando-se quatro repetições. Antes de o meio de cultura ser plaqueado, acrescentaram-se 5mL de cloranfenicol 10% para cada litro de meio de cultura. As placas foram incubadas em câmara climatizada a 24ºC, com fotoperíodo de 12h, durante sete dias. Após a incubação, o número de colônias de Fusarium foi contado em cada placa e calculado o número de unidades formadoras de colônia (UFC) g-1 de substrato. Para o segundo experimento, o delineamento experimental foi inteiramente casualizado em esquema fatorial 16 (15 isolados fúngicos e testemunha) x 2 (isolados de F. sp.), com 4 repetições. Foram utilizados 15 isolados fúngicos dos gêneros Trichoderma (9 isolados), Penicillium (2), Aspergillus (2) e Cladosporium (2); e dois isolados de F. sp., que foram utilizados separadamente. Foi realizado sorteio de dois isolados fúngicos para cada gênero e, para Trichoderma, foram sorteados seis mais os três isolados que apresentaram melhor desempenho no experimento anterior. A metodologia foi a mesma utilizada no primeiro experimento. Os resultados foram submetidos à análise de variância pelo teste F e ao teste de Tukey a 5%, para comparação de médias. As médias em UFC de F. solani e F. sp. foram transformadas para LOG10 (UFC + 1). As análises foram realizadas com o auxílio do programa estatístico SOC
  • 19. (EMBRAPA, 1997). Dos 98 isolados fúngicos utilizados como possíveis antagonistas, 42 isolados (43%) não diferiram da testemunha e os demais isolados reduziram BIBLIOGRAFIA. http://www.scielo.br/pdf/cr/v37n6/a47v37n6.pdf REFERÊNCIAS ASKEW, D.J.; LAING, M.D. The in vitro screening of 118 Trichoderma isolates for antagonism to Rhizoctonia solani and an evaluation of different environmental sites of Trichoderma as sources of aggressive strains. Plant and Soil, v.159, p.277-281, 1994. BELL, D.K. et al. In vitro antagonism of Trichoderma sp.ecies against six fungal plant pathogens. Phytopathology, v.72, n.4, p.379-382, 1982. EMBRAPA - Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária. Ambiente de software NTIA, versão 3.2.2 ; manual do usuário. Campinas: Centro Nacional de Pesquisa Tecnológica em Informática para Agricultura, 1997. 258p. ETHUR, L.Z. et al. Fungos antagonistas a Sclerotinia sclerotiorum em pepineiro cultivado em estufa. Fitopatologia Brasileira, v.30, n.2, p.127-133, 2005. GHINI, R.; KIMATI, H. Método de iscas para obtenção de isolados de Trichoderma antagônicos a Botrytis cinerea. Jaguariúna: EMBRAPA-CNPDA, 1989. 13p. (Boletim de Pesquisa, 3).
  • 20. GHINI, R.; NAKAMURA, D. Seleção de antagonistas e nutrientes que induzem supressividade de solos a Fusarium sp. f. sp. phaseoli em microcosmos e in vivo. Summa Phytopathologica, v.27, n.3, p.318-322, 2001. MARIANO, R.L.R. Métodos de seleção in vitro para o controle microbiológico de patógenos de plantas. Revisão Anual de Patologia de Plantas, v.1, p.369-409, 1993. PATRICIO, F.R.A. et al. Seleção de isolados de Trichoderma sp.p. antagônicos a Pythium aphanidermatum e Rhizoctonia solani. Summa Phytopathologica, v.27, p.223-229, 2001. TOYOTA, K. et al. Microbiological factors affecting the colonisation of soil aggregates by Fusarium sp. f. sp. raphani. Soil Biology & Biochemistry, v.28, n.10, p.1513-1521, 1996. http://www.revfacagronluz.org.ve/PDF/supl_mayo_2007/v24s upl5.pdf REFERENCIAS 1. Abdelhaq, H. 2006. Integrated Production and Protection in Greenhouse Crops. Institut Agronomique et Vétérinaire Hassan II Complexe Horticole d’Agadir. BP: 12042. 95-112. 2. Elad, Y. y K. F. Baker, 1985. The role of competition for irn and carbon in supresión of clamydospore germination of Fusarium spp. by Pseudomonas spp. Phytpathology. 75:1053-1059. 3.González, R. M., G. L. Castellanos, F. M. Ramos y G. G. Pérez. 2002. Utilización de Trichoderma sp.p., para el control de hongos patógenos de la semilla y del suelo en el cultivo del fríjol. Laboratorio Provincial de Sanidad Vegetal. 7 p.