este mega resumen es una compilacion de todo el laboratorio. lo esencial que necesitas para pasar el laboratorio. incluye preguntas para practicar , material inedito , fotos porno para motivarte y ademas trae un CD de talia!

1. Nicolas Mora

2. • Objetivos
• Dar a conocer los fundamentos de las técnicas
básicas en biología molecular.
• Conocer algunos métodos que permitan el estudio
de la estructura molecular de la célula.
• Desarrollar habilidades y destrezas en la aplicación
de las técnicas propuestas.
• Discutir las ventajas y limitaciones de cada uno de
los métodos utilizados.

3.  Conjunto de técnicas que nos permiten
trabajar con las moléculas que contienen
información biológica y que nos permite
manipular dicha información.
 Ejemplo: ADN, ARN, proteínas, etc.
 Áreas de aplicación:
• Biotecnología (medicina, microbiología,
agricultura, etc)
• Bioingienería.

4.  Es posible separar regiones determinadas de DNA.
• Se pueden obtener en cantidades prácticamente ilimitadas.
• Se puede determinar su secuencia de nucleótidos a alta
velocidad.
• Un gen puede ser alterado y transferido a cultivos de células.
 Impacto de la bilogía molecular:
• Determinar funciones de muchas proteínas.
• Comprender complejos mecanismos de regulación génica.
• A nivel comercial se pueden obtener gran cantidad de
hormonas y vacunas a bajo costo.

5.  Estas enzimas cortan la doble cadena de la molécula de
DNA en puntos específicos definidos por la secuencia
de nucleótidos, produciendo así fragmentos de DNA de
diversos tamaños.
 Bacterias de diferentes especies producen nucleasas de
restricción diferentes, cumpliendo una función de
protección contra DNA exógeno, degradando el DNA
vírico que entra a la bacteria. Las secuencias de
reconocimiento propias están protegidas por la
metilación de un residuo A o C, en cambio las
secuencias de DNA exógeno no se hallan metiladas
por lo que están expuestas a la acción de estas
enzimas.

7.  El nombre de cada enzima, corresponde a una
abreviatura de tres letras que se refiere al
organismo del cuál se aisló la enzima, la primera
letra indica el género de la bacteria, las dos
próximas la especie, una cuarta letra la
cepa, seguida de un número romano :
 Eco RI Escherichia coli
 HindIII Haemophilus influenzae
 HaeIII Haemophilus aegyptius

8.  TIPO I y III
• Actividad de restricción (cortan) y de modificación ( metilan).
• Los de tipo I cortan lejos de la secuencia de reconocimiento.
• Las de tipo III cortan de 5-8 bases antes o después de la
secuencia de reconocimiento.
• Necesitan de ATP para moverse de un lugar de
reconocimiento hasta el sitio de corte.
 TIPO II
• Sólo actividad de restricción.
• Cortan dentro de la secuencia que reconocen.
• No necesitan de ATP, sólo utilizan Magnesio como co-factor.

10.  APLICACIONES:
• Realizar mapas de restricción.
• Fragmentar DNA para separación en electroforesis
y Southern Blot.
• Generación de sondas.
• DNA recombinante.

15. El resultado de la
electroforesis es una especie
de papel con líneas brillantes
que ven en la imagen. Para
saber como interpretar el
resultado y graficarlo accede
al siguiente link donde se
explicara “el grafico del mal”
http://es.slideshare.net/nikoli
noroll/grafico-del-mal

17. MEDICINA
AGRICULTURA
ACUICULTURA

18. Antibiotic-sensitive
Bacterial cell
Treatment
Plasmid DNA
“Transformed” bacterial cell
Selection on bacterial growth medium
containing appropiate antibiotic

19. a) Competentes Naturales
b) Competentes Inducidas
Escherichia Coli ( E. Coli) Cepa HB101
Solución TSS:
- PEG
- DMSO
- MgCl2
- Medio LB

21. 
GPF
plásmido
Aequorea victoria

24.  Medios Líquidos
 Medios Sólidos *(coloidales)
 LB
◦ Extracto de levadura (5g/L)
◦ Triptona (10 g)
◦ Agua (llevar a 1 litro)
◦ NaCl (10g)
◦ *Agar (15g/L)

25. +DNA -DNA
200
ul
Incubar 10’
En hielo
10 ul
pGLO
Incubar O/N a 37 ºC
Heat-Shock
45’’ a 42
°C
Plaquear
(Sembrar) en
mechero
Incubar 10’
En hielo
PROCEDIMIENTO

26. -ADN/LB -ADN/LB/amp +ADN/LB/amp +ADN/LB/amp/ara

27. -ADN/LB -ADN/LB/amp +ADN/LB/amp +ADN/LB/amp/ara

29. Manipulamos a la bacteria insertándole un
plásmido con nuestro gen de interés. Ahora
el siguiente paso es Aislar nuestro gen de
interés dentro de la bacteria.
En las siguientes diapo sabrás purificarlas OMG
:o!!!

30. Proteínas
bacterianas
Bacteria
HB101
transformada
PURIFICACION
GFP
¿Que tenemos que hacer?
Purificar!!!!

31.  Existen muchos métodos y formas. Nosotros
usaremos :
 CROMATOGRAFIA (proviene del griego
khromatos y graphos que significan
respectivamente "color" y "escribir").
 En toda cromatografía existe un contacto
entre dos fases, una fija que suele llamarse
fase estacionaria, y una móvil que fluye
durante el proceso de separación.

32.  1.- Según el estado físico de la fase móvil:
 FASE MÓVIL líquido  Cromatografía de LÍQUIDOS
 gas  Cromatografía de GASES
 2.- Según la causa por la que se separan los componentes de la
muestra.
 -Tamaño Cromatografía de filtración en gel
 -Carga Cromatografía de intercambio iónico
 -Afinidad biológica Cromatografía de afinidad
 -Hidrofobicidad Cromatografía de interacción hidrofóbica
 3.- Según el modo operativo para el desarrollo de la
cromatografía (relacionado con la fase estacionaria):

FASE ESTACIONARIA  Sobre superficie plana
 En columna

33.  Se emplea en la purificación de proteínas

34.  Cromatografía de intercambio iónico

37.  La Cromatografía de Interacción Hidrofóbica
implica una interacción entre los grupos
hidrofóbicos expuestos de las proteínas y los
grupos hidrofóbicos de la matriz cromatografía
Esta interacción se produce por la asociación de
regiones apolares en medio acuoso.

38.  Buffer de Enlace
: Buffer TE +
Sulfato de
Amonio (4 M)
 Buffer de
Equilibrio: Buffer
TE + Sulfato de
Amonio (2 M)
 Buffer de Lavado
: Buffer TE +
Sulfato de
Amonio (1,3M)
 Buffer de Elución
: Buffer TE pH:
8.0
 Buffer TE : Tris +
EDTA

40. sonicador
Micro centrifuga
Transiluminador
Columna
cromatografía
Matriz

42.  Si has llegado hasta esta parte de la
presentación, me imagino que estas chato de
tanta biología. Muy bien, ahora jugaremos
para ver que tanto aprendiste de la
presentación. A continuación se presentaran
imágenes, tienes que saber que es, para que
sirve, su característica, en el caso que estén
con flechas indicar SOLO LO QUE SE INDICA

43. Que empiece el juego

44.  Nombre del objeto:
 transiluminador
UV

45.  Color de la punta que utiliza
Nombre del artefacto: micropipeta
amarilla
P20

46. Mediante que instrumento se logran
visualizar las bandas:
TRANSILUMINADOR UV
Composición del gel utilizado
POLICRILAMIDA O
AGAROSA, INDICAR
COMPOSICION.

47. ACA TIENES QUE INDICAR COMO SE
LLAMA EL LADO – Y EL LADO + , ME
DA PAJA HACERLO ES MUY FACIL.
¬¬

48. Nombre que recibe las secuencias en celeste
PALINDROMICAS
Quienes reconocen estas secuencias:
enzimas de restricción

49.  Sorry men, me da paja seguir animando las
diapo, asique pondre imagen y todo listo para
que estudies. No teni escusa para echarte el
ramo!!
Nombre uno de los laboratorios en que
lo utilizamos: transformación genética
Nombre del tubo: ependorff o
microtubo

50.  nombre del gen que
permite la
característica
observable.
 Nombre los
componentes del
medio en que se
encuentra.

51.  Nombre de la
estructura
 Tipo de rotor que
usa

52.  Nombre la
estructura que
esta viendo
 (que wea es?)

53.  Nombre de la
estructura: estufa de
cultivo
 Función: incubar y
calentar cultivos
microbiológicos
(bacterianos )

54.  Nombre de la
estructura:
cámara
electroforesis
vertical
 Laboratorio
utilizado:
métodos de
estudio biología
molecular

55.  Mi viejo me esta llamando para almorzar
asique me tengo que ir.
 Ehhmm no están todas las preguntas pero
ahora ya sabes como es el tipo de pregunta,
no te hare la pega facil, estudia lo que esta
arriba y léelo hasta que lo sepas de memoria.
 Si tienes alguna duda twitteamela
(https://twitter.com/nikolino_roll)
 @nikolino_roll
EXITOOOOOOO!!!!!

56.  El año pasado esa pregunta hizo la diferencia del
3.95 y el 4.00 para aprobar. Analicemos la
respuesta:
 En el laboratorio de transformación genética se
usa para sacar la colonia de bacterias de una
placa y se pone en el tubo eppendorf marcado
+ADN en el cual se gira el asa para desprender
las bacterias, se hace lo mismo en el tubo -ADN.
Se usa también para sacar el plásmido pGLO
quedando una fina película líquida en ella.
 Viste? La wea es facil es logica vo dale vo dalee!!!