Conclusin para espectrofotmetro (Necesito una conclusin para el espectrofotmetro) INTRODUCCIN El espectrofotmetro es un instrumento utilizado para medir los espectros de muestras y reas microscpicas. Se utiliza para medir espectros NIR UV visibles de muestras microscpicas. Mide la transmisin, la absorcin, la reflectancia, la polarizacin y la fluorescencia de una muestra determinada. Est diseado como un microscopio ptico combinado con un espectrofotmetro NIR UV visible. Mide un rango de muestras de hasta 1 x 1 micrmetro. Con la ayuda del software, se pueden realizar medidas de mapeo 3D y calorimetra. Con esto es posible la medicin del espesor de pelcula delgada de micropuntos sin contacto. Tiene una gran influencia en el campo de la investigacin y la industria. Dado que tiene un gran rango espectral, los cientficos e ingenieros lo utilizan para obtener espectros de reas de muestra extremadamente pequeas. Incluso funciona en el campo donde la luz visible y el infrarrojo no funcionan. Por ejemplo, un cientfico forense o un qumico lo usa para combinar fibras o pinturas de muestras microscpicas. Un gelogo puede usarlo para la calificacin de gemas. RESULTADO DE APRENDIZAJE 1. El funcionamiento mecnico bsico del espectrofotmetro secomam PRIM. 2. Los principios bsicos de la espectrofotometra, incluida la relacin/clculo del valor de transmitancia (T) y absorbancia (A). 3. Identificar la absorbancia mxima (A max) de un compuesto y cmo se determina. 4.Comprender el uso del estndar de protenas. METODOLOGIA A.Determinar el espectro de absorbancia y la longitud de onda de mxima absorbancia El instrumento que se utilizara en esta prctica es el Secomam PRIM. 1. El espectrofotmetro est encendido. calent el mquina durante 15 minutos. 2. Se presion el botn Val para activarlo. 3. El botn de transmitancia ha sido seleccionado por el utilizado del botn A 4. La longitud de onda se ha fijado en 375nm. 5. La cubeta se limpi y sec. 6. Se coloc la solucin en blanco y la cubeta en el portamuestras del espectrmetro. 7. Se presion el botn cero. 8. Se ha retirado la cubeta con la solucin en blanco. 9. Se limpi y sec otra cubeta. 10. La solucin estndar A se verti en la cubeta y la cubeta se coloc en el portamuestras del espectrmetro. 11. La transmitancia se registra en el papel de resultados. 12. Se retir la cubeta con la solucin estndar A. 13. La longitud de onda se cambia a 425 nm 14. La cubeta con la solucin en blanco se coloc en el portamuestras del espectrofotmetro. 15. Se presion el botn cero. 16. Se retir la cubeta con la solucin en blanco. 17. La cubeta con la solucin estndar A se coloc en portamuestras del espectrmetro. 18. La transmitancia se registra en el papel de resultados. 19. Se retir la cubeta con la solucin estndar A. 20. Paso 13 a paso 19 para diferentes longitudes de onda: 490, 530, 540, 550, 580, 625 y 700nm. 21. La absorbancia se calcul en papel de resultados. 22. El grfico de absorbancia y longitud de onda se registr en el papel de resultados. B. Traz.

1. Conclusin para espectrofotmetro
(Necesito una conclusin para el espectrofotmetro)
INTRODUCCIN
El espectrofotmetro es un instrumento utilizado para medir los espectros de muestras y reas
microscpicas. Se utiliza para medir espectros NIR UV visibles de muestras microscpicas. Mide
la transmisin, la absorcin, la reflectancia, la polarizacin y la fluorescencia de una muestra
determinada. Est diseado como un microscopio ptico combinado con un espectrofotmetro NIR
UV visible. Mide un rango de muestras de hasta 1 x 1 micrmetro. Con la ayuda del software, se
pueden realizar medidas de mapeo 3D y calorimetra. Con esto es posible la medicin del espesor
de pelcula delgada de micropuntos sin contacto. Tiene una gran influencia en el campo de la
investigacin y la industria. Dado que tiene un gran rango espectral, los cientficos e ingenieros lo
utilizan para obtener espectros de reas de muestra extremadamente pequeas. Incluso funciona en
el campo donde la luz visible y el infrarrojo no funcionan. Por ejemplo, un cientfico forense o un
qumico lo usa para combinar fibras o pinturas de muestras microscpicas. Un gelogo puede usarlo
para la calificacin de gemas.
RESULTADO DE APRENDIZAJE
1. El funcionamiento mecnico bsico del espectrofotmetro secomam PRIM.
2. Los principios bsicos de la espectrofotometra, incluida la relacin/clculo del valor de
transmitancia (T) y absorbancia (A).
3. Identificar la absorbancia mxima (A max) de un compuesto y cmo se determina.
4.Comprender el uso del estndar de protenas.

2. METODOLOGIA
A.Determinar el espectro de absorbancia y la longitud de onda de mxima absorbancia El
instrumento que se utilizara en esta prctica es el Secomam PRIM.
1. El espectrofotmetro est encendido. calent el
mquina durante 15 minutos.
2. Se presion el botn Val para activarlo.
3. El botn de transmitancia ha sido seleccionado por el utilizado
del botn A
4. La longitud de onda se ha fijado en 375nm.
5. La cubeta se limpi y sec.
6. Se coloc la solucin en blanco y la cubeta en el portamuestras del espectrmetro.
7. Se presion el botn cero.
8. Se ha retirado la cubeta con la solucin en blanco.
9. Se limpi y sec otra cubeta.
10. La solucin estndar A se verti en la cubeta y la cubeta se coloc en el portamuestras del
espectrmetro.
11. La transmitancia se registra en el papel de resultados.
12. Se retir la cubeta con la solucin estndar A.
13. La longitud de onda se cambia a 425 nm

3. 14. La cubeta con la solucin en blanco se coloc en el portamuestras del espectrofotmetro.
15. Se presion el botn cero.
16. Se retir la cubeta con la solucin en blanco.
17. La cubeta con la solucin estndar A se coloc en
portamuestras del espectrmetro.
18. La transmitancia se registra en el papel de resultados.
19. Se retir la cubeta con la solucin estndar A.
20. Paso 13 a paso 19 para diferentes longitudes de onda: 490, 530, 540, 550, 580, 625 y 700nm.
21. La absorbancia se calcul en papel de resultados.
22. El grfico de absorbancia y longitud de onda se registr en el papel de resultados.
B. Trazar una curva estndar de protena
1. El modo de absorbancia se seleccion presionando el botn A.
2.Se ha seleccionado la longitud de onda ptima
basado en la absorbancia del espectro (=max).
3. La longitud de onda seleccionada se configur ingresando el valor directamente con las teclas
numricas y se confirm con VAL.
4. La cubeta se limpia y se seca.
5. Se prepar protena (albmina) en concentraciones seriadas (0, 20, 40, 60, 80 y 100 mg/ml).
6. La solucin de protena estndar con una concentracin de 0 mg/ml. 7. Se presion el botn Zero.
8. La absorbancia se registra en el papel de resultados.
9. Se elimin la solucin de protena estndar (0 mg/ml). La cubeta se limpi con agua destilada y se

4. sec.
10. La solucin de protena (20 mg/ml) se vierte en la cubeta y la cubeta se coloca en el
portamuestras del espectrmetro.
11. Lea el valor de absorbancia (A). Los datos se registraron en la Tabla 2.
12. Se retira la solucin de protena estndar (20 mg/ml), se limpia y se seca la cubeta.
13. Repetir del paso 10 al paso 12 para medir el valor A de las soluciones estndar de protena a
concentraciones de 40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml, 100 mg/ml y 580 mg/ml, respectivamente.
14. La absorbancia (a max) frente a la concentracin (mg/ml) se represent en un papel
cuadriculado. La concentracin se coloc en el eje horizontal.
C. Determinar la concentracin de soluciones desconocidas usando la curva estndar de protena
1. La absorbancia se arregl con la longitud de onda seleccionada.
2. La cubeta se limpi y sec.
3. La solucin de protena estndar (0 mg/ml) fue. se verti y la cubeta se coloc en el portamuestras
del espectrmetro.
4. Se presion el botn cero.
5. Se verti una solucin desconocida en la cubeta y se coloc la cubeta en el portamuestras del
espectrofotmetro.
6. Se ha registrado la absorbancia A.
7. La concentracin de la solucin desconocida se midi segn el estndar de protena en la curva B.
RESULTADO
Tabla 1: Porcentaje de transmitancia/absorbancia de la Solucin estndar A en varias longitudes de
onda
37578.50.105
42585.00.021
49073,60.133
53064.60.190
54063.70.196
55065,00.187
58077.60.110

5. 625112.5-0.052
700162.1-0.21
La cantidad de luz que es absorbida por una solucin se expresa comnmente en trminos de
porcentaje de transmitancia (%T), como en este experimento, o en trminos de absorbancia (A).
La absorbancia se define como sigue:
Absorbancia = 2 log del porcentaje de transmitancia
A= 2-log%T
Tabla 2: Curva estndar de protena (albmina)
*Protena estndar (ml)Reactivo Biuret (ml)Volumen total (ml)Absorbancia
(a mx)
*0 mg/ml (Solucin en blanco)2.52.55.00.000
*20mg/ml2.52.55.00.069
*40mg/ml2.52.55.00.103
*60mg/ml2.52.55.00.203
*80mg/ml2.52.55.00.396
*100mg/ml2.52.55.00.485
Discusin
Un espectrofotmetro es un instrumento que mide la cantidad de fotones (la intensidad de la luz)
absorbidos despus de pasar a travs de la solucin de muestra. Con el espectrofotmetro, tambin se
puede determinar la cantidad de una sustancia qumica conocida (concentraciones) midiendo la
intensidad de la luz detectada. Dependiendo del rango de longitud de onda de la fuente de luz, se
puede clasificar en dos tipos diferentes:
Espectrofotmetro UV-visible: utiliza luz en el rango ultravioleta (185 - 400 nm) y rango visible
(400 - 700 nm) del espectro de radiacin electromagntica.
Espectrofotmetro IR: utiliza luz sobre el rango infrarrojo (700 - 15000 nm) del espectro de
radiacin electromagntica.
En espectrofotometra visible, la absorcin o la transmisin de una determinada sustancia se puede
determinar por el color observado. Por ejemplo, una muestra de solucin que absorbe luz en todos
los rangos visibles (es decir, no transmite ninguna de las longitudes de onda visibles) parece
negra en teora. Por otro lado, si se transmiten todas las longitudes de onda visibles (es decir, no

6. absorbe nada), la muestra de solucin aparece blanca. Si una muestra de solucin absorbe luz roja
(~700 nm), aparece verde porque el verde es el color complementario del rojo. Los
espectrofotmetros visibles, en la prctica, usan un prisma para reducir un cierto rango de longitud
de onda (para filtrar otras longitudes de onda) de modo que el haz de luz particular pase a travs
de una muestra de solucin.
La cantidad de luz transmitida a travs de una solucin se conoce como transmitancia (T). La
transmitancia se define como la relacin entre la energa luminosa transmitida a travs de la muestra
(I) y la energa transmitida a travs del blanco de referencia (I0). Dado que el compuesto que se est
analizando no est presente en el blanco de referencia, la transmitancia del blanco de referencia se
define como 100 %. Sin embargo, para la mayora de las aplicaciones biolgicas, medimos la
absorbancia (Al, tambin conocida como densidad ptica u ODl, donde l es la longitud de onda
utilizada para las mediciones), la cantidad de luz absorbida por una solucin. La absorbancia est
relacionada logartmicamente con la transmisin. A = -log T, se utiliza un blanco de referencia. En
este caso, para 'poner a cero' cualquier luz absorbida por algo en la solucin que no sea el
compuesto de inters. Por definicin, la absorbancia del blanco de referencia se establece en cero.
Como podemos ver en el resultado del experimento, el pico de la absorbancia est en 540 nm,
pero antes de que el pico finalmente alcanzara los 540 nm, tuvimos algunos problemas. Hicimos
el procedimiento en consecuencia, pero el pico de la longitud de onda est en 580nm, y luego,
otro grupo tambin tuvo el mismo problema. Como todos tenamos exactamente el mismo
problema, repetimos el experimento, de nuevo el pico de absorbancia no cambia. La muestra se
transform en la muestra desconocida, y luego el procedimiento se repiti en consecuencia, y
finalmente el resultado apareci como se esperaba. El pico de la absorbancia est a 540 nm.
Supuestamente, la muestra A tiene el mismo resultado que la muestra desconocida, pero hay algn
factor que afect el resultado, como la contaminacin, lo ms probable es que la muestra A est
contaminada por otro organismo u otras cosas, por lo que afecta la absorbancia de la longitud de
onda. Es algo que sucede comnmente cuando alguien que est investigando, parte del resultado no
resulta como esperaba.
Curvas estndar de protena albmina
Las curvas estndar representan la relacin entre dos cantidades. Para calcular la concentracin en
funcin de la curva estndar, primero encuentre la concentracin para la absorbancia de cada
muestra en la curva estndar y luego multiplique la concentracin por el factor de dilucin para cada
muestra.
Conclusin ??

7. (Necesito una conclusin para el espectrofotmetro)
INTRODUCCIN
El espectrofotmetro es un instrumento utilizado para medir los espectros de muestras y reas
microscpicas. Se utiliza para medir espectros NIR UV visibles de muestras microscpicas. Mide
la transmisin, la absorcin, la reflectancia, la polarizacin y la fluorescencia de una muestra
determinada. Est diseado como un microscopio ptico combinado con un espectrofotmetro NIR
UV visible. Mide un rango de muestras de hasta 1 x 1 micrmetro. Con la ayuda del software, se
pueden realizar medidas de mapeo 3D y calorimetra. Con esto es posible la medicin del espesor
de pelcula delgada de micropuntos sin contacto. Tiene una gran influencia en el campo de la
investigacin y la industria. Dado que tiene un gran rango espectral, los cientficos e ingenieros lo
utilizan para obtener espectros de reas de muestra extremadamente pequeas. Incluso funciona en
el campo donde la luz visible y el infrarrojo no funcionan. Por ejemplo, un cientfico forense o un
qumico lo usa para combinar fibras o pinturas de muestras microscpicas. Un gelogo puede usarlo
para la calificacin de gemas.
RESULTADO DE APRENDIZAJE
1. El funcionamiento mecnico bsico del espectrofotmetro secomam PRIM.
2. Los principios bsicos de la espectrofotometra, incluida la relacin/clculo del valor de
transmitancia (T) y absorbancia (A).
3. Identificar la absorbancia mxima (A max) de un compuesto y cmo se determina.
4.Comprender el uso del estndar de protenas.

8. METODOLOGIA
A.Determinar el espectro de absorbancia y la longitud de onda de mxima absorbancia El
instrumento que se utilizara en esta prctica es el Secomam PRIM.
1. El espectrofotmetro est encendido. calent el
mquina durante 15 minutos.
2. Se presion el botn Val para activarlo.
3. El botn de transmitancia ha sido seleccionado por el utilizado
del botn A
4. La longitud de onda se ha fijado en 375nm.
5. La cubeta se limpi y sec.
6. Se coloc la solucin en blanco y la cubeta en el portamuestras del espectrmetro.
7. Se presion el botn cero.
8. Se ha retirado la cubeta con la solucin en blanco.
9. Se limpi y sec otra cubeta.
10. La solucin estndar A se verti en la cubeta y la cubeta se coloc en el portamuestras del
espectrmetro.
11. La transmitancia se registra en el papel de resultados.
12. Se retir la cubeta con la solucin estndar A.
13. La longitud de onda se cambia a 425 nm
14. La cubeta con la solucin en blanco se coloc en el portamuestras del espectrofotmetro.

9. 15. Se presion el botn cero.
16. Se retir la cubeta con la solucin en blanco.
17. La cubeta con la solucin estndar A se coloc en
portamuestras del espectrmetro.
18. La transmitancia se registra en el papel de resultados.
19. Se retir la cubeta con la solucin estndar A.
20. Paso 13 a paso 19 para diferentes longitudes de onda: 490, 530, 540, 550, 580, 625 y 700nm.
21. La absorbancia se calcul en papel de resultados.
22. El grfico de absorbancia y longitud de onda se registr en el papel de resultados.
B. Trazar una curva estndar de protena
1. El modo de absorbancia se seleccion presionando el botn A.
2.Se ha seleccionado la longitud de onda ptima
basado en la absorbancia del espectro (=max).
3. La longitud de onda seleccionada se configur ingresando el valor directamente con las teclas
numricas y se confirm con VAL.
4. La cubeta se limpia y se seca.
5. Se prepar protena (albmina) en concentraciones seriadas (0, 20, 40, 60, 80 y 100 mg/ml).
6. La solucin de protena estndar con una concentracin de 0 mg/ml. 7. Se presion el botn Zero.
8. La absorbancia se registra en el papel de resultados.
9. Se elimin la solucin de protena estndar (0 mg/ml). La cubeta se limpi con agua destilada y se
sec.

10. 10. La solucin de protena (20 mg/ml) se vierte en la cubeta y la cubeta se coloca en el
portamuestras del espectrmetro.
11. Lea el valor de absorbancia (A). Los datos se registraron en la Tabla 2.
12. Se retira la solucin de protena estndar (20 mg/ml), se limpia y se seca la cubeta.
13. Repetir del paso 10 al paso 12 para medir el valor A de las soluciones estndar de protena a
concentraciones de 40 mg/ml, 60 mg/ml, 80 mg/ml, 100 mg/ml y 580 mg/ml, respectivamente.
14. La absorbancia (a max) frente a la concentracin (mg/ml) se represent en un papel
cuadriculado. La concentracin se coloc en el eje horizontal.
C. Determinar la concentracin de soluciones desconocidas usando la curva estndar de protena
1. La absorbancia se arregl con la longitud de onda seleccionada.
2. La cubeta se limpi y sec.
3. La solucin de protena estndar (0 mg/ml) fue. se verti y la cubeta se coloc en el portamuestras
del espectrmetro.
4. Se presion el botn cero.
5. Se verti una solucin desconocida en la cubeta y se coloc la cubeta en el portamuestras del
espectrofotmetro.
6. Se ha registrado la absorbancia A.
7. La concentracin de la solucin desconocida se midi segn el estndar de protena en la curva B.
RESULTADO
Tabla 1: Porcentaje de transmitancia/absorbancia de la Solucin estndar A en varias longitudes de
onda
37578.50.105
42585.00.021
49073,60.133
53064.60.190
54063.70.196
55065,00.187
58077.60.110
625112.5-0.052

11. 700162.1-0.21
La cantidad de luz que es absorbida por una solucin se expresa comnmente en trminos de
porcentaje de transmitancia (%T), como en este experimento, o en trminos de absorbancia (A).
La absorbancia se define como sigue:
Absorbancia = 2 log del porcentaje de transmitancia
A= 2-log%T
Tabla 2: Curva estndar de protena (albmina)
*Protena estndar (ml)Reactivo Biuret (ml)Volumen total (ml)Absorbancia
(a mx)
*0 mg/ml (Solucin en blanco)2.52.55.00.000
*20mg/ml2.52.55.00.069
*40mg/ml2.52.55.00.103
*60mg/ml2.52.55.00.203
*80mg/ml2.52.55.00.396
*100mg/ml2.52.55.00.485
Discusin
Un espectrofotmetro es un instrumento que mide la cantidad de fotones (la intensidad de la luz)
absorbidos despus de pasar a travs de la solucin de muestra. Con el espectrofotmetro, tambin se
puede determinar la cantidad de una sustancia qumica conocida (concentraciones) midiendo la
intensidad de la luz detectada. Dependiendo del rango de longitud de onda de la fuente de luz, se
puede clasificar en dos tipos diferentes:
Espectrofotmetro UV-visible: utiliza luz en el rango ultravioleta (185 - 400 nm) y rango visible
(400 - 700 nm) del espectro de radiacin electromagntica.
Espectrofotmetro IR: utiliza luz sobre el rango infrarrojo (700 - 15000 nm) del espectro de
radiacin electromagntica.
En espectrofotometra visible, la absorcin o la transmisin de una determinada sustancia se puede
determinar por el color observado. Por ejemplo, una muestra de solucin que absorbe luz en todos
los rangos visibles (es decir, no transmite ninguna de las longitudes de onda visibles) parece
negra en teora. Por otro lado, si se transmiten todas las longitudes de onda visibles (es decir, no
absorbe nada), la muestra de solucin aparece blanca. Si una muestra de solucin absorbe luz roja

12. (~700 nm), aparece verde porque el verde es el color complementario del rojo. Los
espectrofotmetros visibles, en la prctica, usan un prisma para reducir un cierto rango de longitud
de onda (para filtrar otras longitudes de onda) de modo que el haz de luz particular pase a travs
de una muestra de solucin.
La cantidad de luz transmitida a travs de una solucin se conoce como transmitancia (T). La
transmitancia se define como la relacin entre la energa luminosa transmitida a travs de la muestra
(I) y la energa transmitida a travs del blanco de referencia (I0). Dado que el compuesto que se est
analizando no est presente en el blanco de referencia, la transmitancia del blanco de referencia se
define como 100 %. Sin embargo, para la mayora de las aplicaciones biolgicas, medimos la
absorbancia (Al, tambin conocida como densidad ptica u ODl, donde l es la longitud de onda
utilizada para las mediciones), la cantidad de luz absorbida por una solucin. La absorbancia est
relacionada logartmicamente con la transmisin. A = -log T, se utiliza un blanco de referencia. En
este caso, para 'poner a cero' cualquier luz absorbida por algo en la solucin que no sea el
compuesto de inters. Por definicin, la absorbancia del blanco de referencia se establece en cero.
Como podemos ver en el resultado del experimento, el pico de la absorbancia est en 540 nm,
pero antes de que el pico finalmente alcanzara los 540 nm, tuvimos algunos problemas. Hicimos
el procedimiento en consecuencia, pero el pico de la longitud de onda est en 580nm, y luego,
otro grupo tambin tuvo el mismo problema. Como todos tenamos exactamente el mismo
problema, repetimos el experimento, de nuevo el pico de absorbancia no cambia. La muestra se
transform en la muestra desconocida, y luego el procedimiento se repiti en consecuencia, y
finalmente el resultado apareci como se esperaba. El pico de la absorbancia est a 540 nm.
Supuestamente, la muestra A tiene el mismo resultado que la muestra desconocida, pero hay algn
factor que afect el resultado, como la contaminacin, lo ms probable es que la muestra A est
contaminada por otro organismo u otras cosas, por lo que afecta la absorbancia de la longitud de
onda. Es algo que sucede comnmente cuando alguien que est investigando, parte del resultado no
resulta como esperaba.
Curvas estndar de protena albmina
Las curvas estndar representan la relacin entre dos cantidades. Para calcular la concentracin en
funcin de la curva estndar, primero encuentre la concentracin para la absorbancia de cada
muestra en la curva estndar y luego multiplique la concentracin por el factor de dilucin para cada
muestra.
Conclusin ??