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AUTOMATIZACION EN
HEMATOLOGICA
LIC. TM. NOE OLAYA NIÑO
BLGA. SANDRA CRUZ GUERRERO
INTRODUCCION
 Los métodos manuales tradicionales han sido
sustituidos por contadores electrónicos que
conllevan mejores condiciones en rentabilidad,
fiabilidad y condiciones de trabajo.
 Estos contadores permiten realizar el hemograma
analizando en pocos segundos miles de células.
HISTORIA
 1934: Andrew Moldavan, recuento fotoeléctrico de células en
suspensión que pasan a través de un capilar montado a un
microscopio (detectaría cambios de luz producidos por GR).
 1956: Hermanos Coulter, Wallace y Joseph, patentan su equipo
basado en el método de la impedancia eléctrica, únicamente
para contar leucocitos y eritrocitos.
AUTOMATIZACION VENTAJAS
 RAPIDEZ
 EFICIENCIA
 PRECISIÓN
 EXACTITUD
 NUEVOS ÍNDICES
REPRODUCIBILIDAD (CV)
MANUAL AUTOMATIZADO
Eritrocitos 11% 1%
Leucocitos 16% 2%
Plaquetas 22% 4%
VCM 9.5% 1%
HCM 10% 1.5%
Delta Check
 Delta Check - el proceso
de revisar los resultados
de pacientes actuales y
compararlos con
resultados previos en
busca de diferencias
significativas.
Generación según avance tecnológico
4ta. G: Hemograma automatizado
Con perforación de tapa, histograma,
dispersograma para GB, diferencial GB
de 5 estirpes.
3ra. G: Hemograma automatizado:
Histogramas de GR, Plaquetas y
recuento diferencial de GB en 3 estirpes.
2da. G: Hemograma semiautomatizado:
1ra. G: Hemograma manual.
Parámetros hematológicos Directos (determinados)
• Recuento de eritrocitos
• Volumen de eritrocitos
• Recuento de Plaquetas
• Volumen de plaquetas
• Hemoglobina
• Recuento de leucocitos,
• Volumen de leucocitos
• Formula leucocitaria
Parámetros hematológicos Indirectos (calculados)
• Hematocrito
• Índices eritrocitarios: VCM, HCM, CHCM
• ADE (RDW)
• VPM, Plaquetocrito.
• Histograma leucocitario, eritrocitario, plaquetario
Diagrama funcional simplificado de un sistema
multiparamétrico de recuentos celulares
Equipos automatizados
TECNICAS DE RECUENTO CELULAR:
Existen tres tipos de equipos automatizados
según su funcionamiento:
 Por impedancia
 Radiofrecuencia y Corriente directa.
 Por dispersión de luz
IMPEDANCIA ELECTRICA
PRINCIPIO
 Se basa en la resistencia
que ofrecen las células al
paso de la corriente
eléctrica, cuando atraviesan
un orifico de apertura que
separa dos medios con
diferente potencias (uno
positivo y otro negativo)
 Sistema de medición no óptico,
con un rango de medición que
excede las 6000 células
individuales por segundo.
 El numero de células contadas
por muestra es aproximadamente
100 veces mayor que los
recuentos microscópicos,
reduciendo el error estadístico
aproximadamente 10 veces.
IMPEDANCIA ELECTRICA
IMPEDANCIA ELECTRICA
Eritrocitos y Plaquetas:
 Las células de una muestra de
sangre total es diluida en una
solución electrolítica.
 Se hacen pasar, una detrás de
la otra, a través de una abertura
de determinado diámetro, por la
que circula una corriente
eléctrica de cierta intensidad
inducida por 2 electrodos
dispuestos a ambos lados de la
abertura u orificio.
IMPEDANCIA ELECTRICA
Cada que una célula atraviesa el orificio de apertura
obstaculiza la corriente (se produce un cambio de
resistencia eléctrica), que genera un cambio en la diferencia
de potencial: Pulso
IMPEDANCIA ELECTRICA
Se producen pulsos que son clasificados por tamaños, varias
miles de células por segundo, haciendo que los resultados sean
más fiables que los obtenidos por métodos manuales
La amplitud de los pulsos es directamente proporcional al
tamaño de la partícula (Volumen celular).
Nº CantidadTamaño
Volumen
PULSO
Flujo
CC
AP : 50 um : GR >= 36 fl Pq >= 2 – 20 fl
AP : 100 um : GB >= 35 fl
PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO
 IMPEDANCIA ELECTRICA:
 SUSPENSIÓN CELULAR EN MEDIO ELECTROLÍTICO.
 PASO DE CÉLULAS POR APERTURA PEQUEÑA.
 GR y Plaquetas: 50 x 60 micras
 Leucocitos: 100 x 70 micras
 FLUJO ELÉCTRICO POR EL PORO.
 ELABORACIÓN DE GRÁFICAS:
 Eritrocitos: 30 a 350 fL
 Plaquetas: 2 a 20 fL
 Leucocitos: 35 a 430 fL
Impedancia Electrica
Gráficas
X
Y
ENFOQUE HIDRODINAMICO
 Para conseguir una trayectoria
uniforme de las células por el
centro de la región sensible del
orificio de apertura (en hilera).
 Con esto se evita que las células
pasen por el borde del orificio de
apertura o que, una vez
atravesado este, retrocedan e
interfieran en la lectura de las
otras células que le siguen.
ENFOQUE HIDRODINAMICO
 La sensibilidad y exactitud de la
lectura dependen de que las
células en suspensión fluyan por
un núcleo central sin mezclarse
con el liquido de arrastre (flujo en
hilera)
 Mejora la exactitud y
reproducibilidad del conteo de
células sanguíneas.
 Previene la generación de pulsos
anormales.
IMPEDANCIA ELECTRICA
Eritrocitos y plaquetas:
Son contados en un canal exclusivo.
Discriminadores automáticos separan las dos
poblaciones celulares.
GR y Plaquetas se cuentan juntos y se separan por
la altura de los pulsos.
IMPEDANCIA ELECTRICA
Impedancia de Leucocitos:
 El conteo es posible gracias a la adición del lisante, que
ocasiona salida de agua del citoplasma, ocasionando que la
membrana se adhiera al núcleo de la célula.
 Las células lisadas pasan por la apertura de 70 u, lo que
genera impulsos eléctricos de alta variabilidad, generándose 3
poblaciones:
 Linfocitos
 Región media: (monocitos,
eosinófilos y basófilos.
 Granulocitos: Neutrófilos.
IMPEDANCIA ELECTRICA
 En la actualidad, este principio se
aplica como método de
referencia para el recuento
celular hemático y la medición de
los volúmenes (tamaño) de cada
población celular.
 Es utilizado por la mayoría de los
contadores hematológicos
debido a su marcada
reproducibilidad, rapidez y
disminución del error estadístico.
Automatizacion en hematologia
RADIOFRECUENCIA Y CORRIENTE DIRECTA
PRINCIPIO:
 El tamaño de las células es detectado por
medio de cambios en la resistencia a la
corriente eléctrica y
 La densidad del interior de las células
(tamaño del núcleo y otras informaciones)
se detecta por medio de cambios en la
resistencia a la frecuencia de radio.
DISPERSION LUMINICA (método óptico)
PRINCIPIO
 Técnica de análisis
celular multiparamétrico.
 Analiza el efecto que
sobre un haz de luz
monocromática de alta
densidad (Láser) ejercen
las células de la sangre al
cruzarse, una a una en
su trayectoria.
DISPERSION LUMINICA
 Una suspensión de células
diluidas fluye a través de una
abertura.
 Las células pasan alineadas una
detrás de otra, a través de una
pequeña zona sobre la que incide
perpendicularmente un haz de luz
halógena o láser, lo que provoca
la interrupción y dispersión
lumínica de la energía radiante en
diversos ángulos.
DISPERSION LUMINICA
 Es mas complejo que la impedancia:
 Además del tamaño y la concentración de
las células permite analizar la complejidad
de la estructura celular (Granularidad,
características del núcleo) y así
diferenciarlas.
 Por ello es el procedimiento de elección
para la automatización de la fórmula
leucocitaria.
METODOS ADICIONALES
Los métodos pueden incluir también:
 Actividad de enzimas celulares como la
peroxidasa. (Citoquímica)
 Fluorescencia
 Análisis digital de la imagen.
CITOQUIMICA CELULAR
 Citoquímica: Son aquellas reacciones químicas
que se dan en la célula para evidenciar las
estructuras que la componen.
 Proporcionan la formula leucocitaria, de
acuerdo con el tamaño de los leucocitos y su
tinción con determinados colorantes.
 Ventaja: En cada espécimen se cuentan
muchas células (unas 10,000), lo que hace
que aumente su precisión.
CITOQUIMICA
Actividad de enzimas celulares: Peroxidasa
 Para aumentar la fiabilidad del recuento
diferencial combinan Citometría de flujo con la
Citoquímica
 Miden con un colorante la actividad peroxidasa:
 Alta en eosinófilos,
 Menor positividad en neutrófilos,
 Monocitos tienen muy poca actividad y
 Linfocitos no tienen actividad peroxidasa.
RECUENTO DIFERENCIAL
AUTOMATIZADO
 La mayoría de contadores diferenciales
automatizados utilizan la citometría de flujo
incorporada a un contador de sangre total.
 Proporcionan recuento diferencial de 3, 5 a 7
componentes.
 Los recuentos se realizan en sangre completa
diluida en la que los eritrocitos se han lisado o
se han vuelto transparentes.
RECUENTO DIFERENCIAL
AUTOMATIZADO
Recuento diferencial de 5 componentes:
 Neutrófilos
 Eosinófilos
 Basófilos
 Linfocitos
 Monocitos
Recuento extendido:
 Grandes células inmaduras (Blastos y granulocitos
inmaduros)
 Linfocitos atípicos (incluye blastos pequeños)
ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN
PRINCIPIO:
 Se basa en el reconocimiento de los
leucocitos por medio del análisis
computarizado de las imágenes que
proporciona un microscopio, a partir de
extensiones sanguíneas teñidas.
 Estas se comparan con imágenes
programadas en el ordenador.
ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN
• La extensión teñida se coloca en un
microscopio, que se mueve controlada por el
ordenador.
• Se inicia el sistema de rastreo semejante al
manual.
• Cuando se localiza un leucocito, se digitaliza la
imagen con una cámara de video.
• Se compara con las características
morfológicas programadas en la memoria del
equipo para los distintos tipos de leucocitos
ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN
REPORTE:
 Polinucleares neutrófilos: segmentados y no
segmentados.
 Eosinófilos
 Basófilos
 Monocitos
 Linfocitos.
 Algunos identifican; Mielocitos,
metamielocitos, linfocitos atípicos y blastos.
Recuentos de Reticulocitos
 Método de Referencia: Azul de Metileno
Altos coeficientes de variación, laboriosos
 Métodos automatizados
 Fluorescentes: naranja de tiazol, auramina O.
 Absorvancia: oxazina 750 , azul de metileno.
 Colorantes que interaccionan con el ARN de
reticulocitos.
Canal reticulocitos - Fluorescente
Fl alta
Fl baja
Fl muy alta
Tinción:
Polimetino: ARN
Oxazina: ADN
RET
WBC
RBC
RETSEARCH II (Diluyente + Colorante)
Recuentos de Reticulocitos
Actualmente, diversos autoanalizadores tienen la
capacidad de contar los reticulocitos de sangre
periférica, ofrecen:
Parámetros:
•Nº porcentual y absoluto,
• Volumen reticulocitario
• Concentración en
hemoglobina.
DETERMINACIÓN DE LA
CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA
 El sistema utiliza la dilución de LEU lisados para
calcular la hemoglobina.
 La absorbancia de luz de un foco incandescente se
determina en 525 nm a través de la longitud óptica
del baño.
 Un haz de luz del foco pasa a través de la muestra,
con un filtro de 525, y se determina mediante un
fotodiodo.
 La señal se amplifica y el voltaje se calcula y se
compara con la lectura del blanco de referencia.
Tecnologías de Hemoglobinometría
 Con Cianuro
 Cianmetahemoglobina
 Sin Cianuro
 Hidroxilamina
 Lauril Sulfato de Sodio
 Formulado a partir de concentración de
Hemoglobina y Rcto. De GR
Hemoglobina
Lauril sulfato sódico:
 Reactivo libre de cianuro
 No causa daño al medio ambiente
 Menor interferencia en muestras:
 Lipémicas
 Ictéricas
 Conteos altos de leucocitos
 Proteinas anormales
Determinación de Hb
Instrumento Método de
identificación
Método de
detección:
Beckman-
Coulter
HiCN Absorción a 525 nm
Sysmex LSS-meta-Hb Absorción a 555 nm
Bayer HiCN con Hb
celular directa
Absorción a 546 nm
Abbott HiCN Absorción a 546 nm
ABX HiCN Absorción a 540 nm
Hematocrito
Calculado:
 VCM x Número de GR
No se mide directamente con los citómetros de
flujo y se calcula a partir del VCM y en número
de GR. Tiene menor precisión.
Indices Hematimétricos
 VCM
 HCM
 CHCM
 RDW-CV
 RDW-SD
 Plaquetocrito
 VMP
CONTROL DE CALIDAD
Control de Calidad
Métodos estadísticos y
cuantitativos usados en
el laboratorio para
asegurar la validez de
los resultados de tests.
LIMITACIONES DE LA
AUTOMATIZACIÓN
 No se detectan inclusiones intraeritrocitarias
 No puede distinguir exactamente los leucocitos
patológicos
 Existen interferencias que afectan las
determinaciones
 Pseudo trombocitopenia por EDTA
 Policromatofilia, Eliptocitos, Esferocitos,
Acantocitos, Hematíes fragmentados, GR en
lágrima, Macroovalocitos, Punteado Basófilo, Anillos
de Cabot, Corpúsculos de Howell-Jolly, Rouleaux,
Parásitos hemáticos, etc.
AUTOMATIZACIÓN: ASPECTOS ORGANIZATIVOS
LA AUTOMATIZACIÓN NO PUEDE LLEVAR A QUE EL
LABORATORIO SE CONVIERTA EN UN EXPEDIDOR DE
CIFRAS AISLADAMENTE.
ES NECESARIO AUMENTAR LA EFICIENCIA Y CALIDAD
DE LOS RESULTADOS Y UNA CONTINUA SUPERACIÓN
DE TODO EL PERSONAL QUE LABORA EN ESTE.
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Automatizacion en hematologia

  • 1. AUTOMATIZACION EN HEMATOLOGICA LIC. TM. NOE OLAYA NIÑO BLGA. SANDRA CRUZ GUERRERO
  • 2. INTRODUCCION  Los métodos manuales tradicionales han sido sustituidos por contadores electrónicos que conllevan mejores condiciones en rentabilidad, fiabilidad y condiciones de trabajo.  Estos contadores permiten realizar el hemograma analizando en pocos segundos miles de células.
  • 3. HISTORIA  1934: Andrew Moldavan, recuento fotoeléctrico de células en suspensión que pasan a través de un capilar montado a un microscopio (detectaría cambios de luz producidos por GR).  1956: Hermanos Coulter, Wallace y Joseph, patentan su equipo basado en el método de la impedancia eléctrica, únicamente para contar leucocitos y eritrocitos.
  • 4. AUTOMATIZACION VENTAJAS  RAPIDEZ  EFICIENCIA  PRECISIÓN  EXACTITUD  NUEVOS ÍNDICES
  • 5. REPRODUCIBILIDAD (CV) MANUAL AUTOMATIZADO Eritrocitos 11% 1% Leucocitos 16% 2% Plaquetas 22% 4% VCM 9.5% 1% HCM 10% 1.5%
  • 6. Delta Check  Delta Check - el proceso de revisar los resultados de pacientes actuales y compararlos con resultados previos en busca de diferencias significativas.
  • 7. Generación según avance tecnológico 4ta. G: Hemograma automatizado Con perforación de tapa, histograma, dispersograma para GB, diferencial GB de 5 estirpes. 3ra. G: Hemograma automatizado: Histogramas de GR, Plaquetas y recuento diferencial de GB en 3 estirpes. 2da. G: Hemograma semiautomatizado: 1ra. G: Hemograma manual.
  • 8. Parámetros hematológicos Directos (determinados) • Recuento de eritrocitos • Volumen de eritrocitos • Recuento de Plaquetas • Volumen de plaquetas • Hemoglobina • Recuento de leucocitos, • Volumen de leucocitos • Formula leucocitaria
  • 9. Parámetros hematológicos Indirectos (calculados) • Hematocrito • Índices eritrocitarios: VCM, HCM, CHCM • ADE (RDW) • VPM, Plaquetocrito. • Histograma leucocitario, eritrocitario, plaquetario
  • 10. Diagrama funcional simplificado de un sistema multiparamétrico de recuentos celulares
  • 11. Equipos automatizados TECNICAS DE RECUENTO CELULAR: Existen tres tipos de equipos automatizados según su funcionamiento:  Por impedancia  Radiofrecuencia y Corriente directa.  Por dispersión de luz
  • 12. IMPEDANCIA ELECTRICA PRINCIPIO  Se basa en la resistencia que ofrecen las células al paso de la corriente eléctrica, cuando atraviesan un orifico de apertura que separa dos medios con diferente potencias (uno positivo y otro negativo)
  • 13.  Sistema de medición no óptico, con un rango de medición que excede las 6000 células individuales por segundo.  El numero de células contadas por muestra es aproximadamente 100 veces mayor que los recuentos microscópicos, reduciendo el error estadístico aproximadamente 10 veces. IMPEDANCIA ELECTRICA
  • 14. IMPEDANCIA ELECTRICA Eritrocitos y Plaquetas:  Las células de una muestra de sangre total es diluida en una solución electrolítica.  Se hacen pasar, una detrás de la otra, a través de una abertura de determinado diámetro, por la que circula una corriente eléctrica de cierta intensidad inducida por 2 electrodos dispuestos a ambos lados de la abertura u orificio.
  • 15. IMPEDANCIA ELECTRICA Cada que una célula atraviesa el orificio de apertura obstaculiza la corriente (se produce un cambio de resistencia eléctrica), que genera un cambio en la diferencia de potencial: Pulso
  • 16. IMPEDANCIA ELECTRICA Se producen pulsos que son clasificados por tamaños, varias miles de células por segundo, haciendo que los resultados sean más fiables que los obtenidos por métodos manuales La amplitud de los pulsos es directamente proporcional al tamaño de la partícula (Volumen celular).
  • 17. Nº CantidadTamaño Volumen PULSO Flujo CC AP : 50 um : GR >= 36 fl Pq >= 2 – 20 fl AP : 100 um : GB >= 35 fl
  • 18. PRINCIPIOS DE FUNCIONAMIENTO  IMPEDANCIA ELECTRICA:  SUSPENSIÓN CELULAR EN MEDIO ELECTROLÍTICO.  PASO DE CÉLULAS POR APERTURA PEQUEÑA.  GR y Plaquetas: 50 x 60 micras  Leucocitos: 100 x 70 micras  FLUJO ELÉCTRICO POR EL PORO.  ELABORACIÓN DE GRÁFICAS:  Eritrocitos: 30 a 350 fL  Plaquetas: 2 a 20 fL  Leucocitos: 35 a 430 fL
  • 20. ENFOQUE HIDRODINAMICO  Para conseguir una trayectoria uniforme de las células por el centro de la región sensible del orificio de apertura (en hilera).  Con esto se evita que las células pasen por el borde del orificio de apertura o que, una vez atravesado este, retrocedan e interfieran en la lectura de las otras células que le siguen.
  • 21. ENFOQUE HIDRODINAMICO  La sensibilidad y exactitud de la lectura dependen de que las células en suspensión fluyan por un núcleo central sin mezclarse con el liquido de arrastre (flujo en hilera)  Mejora la exactitud y reproducibilidad del conteo de células sanguíneas.  Previene la generación de pulsos anormales.
  • 22. IMPEDANCIA ELECTRICA Eritrocitos y plaquetas: Son contados en un canal exclusivo. Discriminadores automáticos separan las dos poblaciones celulares. GR y Plaquetas se cuentan juntos y se separan por la altura de los pulsos.
  • 23. IMPEDANCIA ELECTRICA Impedancia de Leucocitos:  El conteo es posible gracias a la adición del lisante, que ocasiona salida de agua del citoplasma, ocasionando que la membrana se adhiera al núcleo de la célula.  Las células lisadas pasan por la apertura de 70 u, lo que genera impulsos eléctricos de alta variabilidad, generándose 3 poblaciones:  Linfocitos  Región media: (monocitos, eosinófilos y basófilos.  Granulocitos: Neutrófilos.
  • 24. IMPEDANCIA ELECTRICA  En la actualidad, este principio se aplica como método de referencia para el recuento celular hemático y la medición de los volúmenes (tamaño) de cada población celular.  Es utilizado por la mayoría de los contadores hematológicos debido a su marcada reproducibilidad, rapidez y disminución del error estadístico.
  • 26. RADIOFRECUENCIA Y CORRIENTE DIRECTA PRINCIPIO:  El tamaño de las células es detectado por medio de cambios en la resistencia a la corriente eléctrica y  La densidad del interior de las células (tamaño del núcleo y otras informaciones) se detecta por medio de cambios en la resistencia a la frecuencia de radio.
  • 27. DISPERSION LUMINICA (método óptico) PRINCIPIO  Técnica de análisis celular multiparamétrico.  Analiza el efecto que sobre un haz de luz monocromática de alta densidad (Láser) ejercen las células de la sangre al cruzarse, una a una en su trayectoria.
  • 28. DISPERSION LUMINICA  Una suspensión de células diluidas fluye a través de una abertura.  Las células pasan alineadas una detrás de otra, a través de una pequeña zona sobre la que incide perpendicularmente un haz de luz halógena o láser, lo que provoca la interrupción y dispersión lumínica de la energía radiante en diversos ángulos.
  • 29. DISPERSION LUMINICA  Es mas complejo que la impedancia:  Además del tamaño y la concentración de las células permite analizar la complejidad de la estructura celular (Granularidad, características del núcleo) y así diferenciarlas.  Por ello es el procedimiento de elección para la automatización de la fórmula leucocitaria.
  • 30. METODOS ADICIONALES Los métodos pueden incluir también:  Actividad de enzimas celulares como la peroxidasa. (Citoquímica)  Fluorescencia  Análisis digital de la imagen.
  • 31. CITOQUIMICA CELULAR  Citoquímica: Son aquellas reacciones químicas que se dan en la célula para evidenciar las estructuras que la componen.  Proporcionan la formula leucocitaria, de acuerdo con el tamaño de los leucocitos y su tinción con determinados colorantes.  Ventaja: En cada espécimen se cuentan muchas células (unas 10,000), lo que hace que aumente su precisión.
  • 32. CITOQUIMICA Actividad de enzimas celulares: Peroxidasa  Para aumentar la fiabilidad del recuento diferencial combinan Citometría de flujo con la Citoquímica  Miden con un colorante la actividad peroxidasa:  Alta en eosinófilos,  Menor positividad en neutrófilos,  Monocitos tienen muy poca actividad y  Linfocitos no tienen actividad peroxidasa.
  • 33. RECUENTO DIFERENCIAL AUTOMATIZADO  La mayoría de contadores diferenciales automatizados utilizan la citometría de flujo incorporada a un contador de sangre total.  Proporcionan recuento diferencial de 3, 5 a 7 componentes.  Los recuentos se realizan en sangre completa diluida en la que los eritrocitos se han lisado o se han vuelto transparentes.
  • 34. RECUENTO DIFERENCIAL AUTOMATIZADO Recuento diferencial de 5 componentes:  Neutrófilos  Eosinófilos  Basófilos  Linfocitos  Monocitos Recuento extendido:  Grandes células inmaduras (Blastos y granulocitos inmaduros)  Linfocitos atípicos (incluye blastos pequeños)
  • 35. ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN PRINCIPIO:  Se basa en el reconocimiento de los leucocitos por medio del análisis computarizado de las imágenes que proporciona un microscopio, a partir de extensiones sanguíneas teñidas.  Estas se comparan con imágenes programadas en el ordenador.
  • 36. ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN • La extensión teñida se coloca en un microscopio, que se mueve controlada por el ordenador. • Se inicia el sistema de rastreo semejante al manual. • Cuando se localiza un leucocito, se digitaliza la imagen con una cámara de video. • Se compara con las características morfológicas programadas en la memoria del equipo para los distintos tipos de leucocitos
  • 37. ANALISIS DIGITAL DE LA IMAGEN REPORTE:  Polinucleares neutrófilos: segmentados y no segmentados.  Eosinófilos  Basófilos  Monocitos  Linfocitos.  Algunos identifican; Mielocitos, metamielocitos, linfocitos atípicos y blastos.
  • 38. Recuentos de Reticulocitos  Método de Referencia: Azul de Metileno Altos coeficientes de variación, laboriosos  Métodos automatizados  Fluorescentes: naranja de tiazol, auramina O.  Absorvancia: oxazina 750 , azul de metileno.  Colorantes que interaccionan con el ARN de reticulocitos.
  • 39. Canal reticulocitos - Fluorescente Fl alta Fl baja Fl muy alta Tinción: Polimetino: ARN Oxazina: ADN RET WBC RBC RETSEARCH II (Diluyente + Colorante)
  • 40. Recuentos de Reticulocitos Actualmente, diversos autoanalizadores tienen la capacidad de contar los reticulocitos de sangre periférica, ofrecen: Parámetros: •Nº porcentual y absoluto, • Volumen reticulocitario • Concentración en hemoglobina.
  • 41. DETERMINACIÓN DE LA CONCENTRACIÓN DE HEMOGLOBINA  El sistema utiliza la dilución de LEU lisados para calcular la hemoglobina.  La absorbancia de luz de un foco incandescente se determina en 525 nm a través de la longitud óptica del baño.  Un haz de luz del foco pasa a través de la muestra, con un filtro de 525, y se determina mediante un fotodiodo.  La señal se amplifica y el voltaje se calcula y se compara con la lectura del blanco de referencia.
  • 42. Tecnologías de Hemoglobinometría  Con Cianuro  Cianmetahemoglobina  Sin Cianuro  Hidroxilamina  Lauril Sulfato de Sodio  Formulado a partir de concentración de Hemoglobina y Rcto. De GR
  • 43. Hemoglobina Lauril sulfato sódico:  Reactivo libre de cianuro  No causa daño al medio ambiente  Menor interferencia en muestras:  Lipémicas  Ictéricas  Conteos altos de leucocitos  Proteinas anormales
  • 44. Determinación de Hb Instrumento Método de identificación Método de detección: Beckman- Coulter HiCN Absorción a 525 nm Sysmex LSS-meta-Hb Absorción a 555 nm Bayer HiCN con Hb celular directa Absorción a 546 nm Abbott HiCN Absorción a 546 nm ABX HiCN Absorción a 540 nm
  • 45. Hematocrito Calculado:  VCM x Número de GR No se mide directamente con los citómetros de flujo y se calcula a partir del VCM y en número de GR. Tiene menor precisión.
  • 46. Indices Hematimétricos  VCM  HCM  CHCM  RDW-CV  RDW-SD  Plaquetocrito  VMP
  • 47. CONTROL DE CALIDAD Control de Calidad Métodos estadísticos y cuantitativos usados en el laboratorio para asegurar la validez de los resultados de tests.
  • 48. LIMITACIONES DE LA AUTOMATIZACIÓN  No se detectan inclusiones intraeritrocitarias  No puede distinguir exactamente los leucocitos patológicos  Existen interferencias que afectan las determinaciones  Pseudo trombocitopenia por EDTA  Policromatofilia, Eliptocitos, Esferocitos, Acantocitos, Hematíes fragmentados, GR en lágrima, Macroovalocitos, Punteado Basófilo, Anillos de Cabot, Corpúsculos de Howell-Jolly, Rouleaux, Parásitos hemáticos, etc.
  • 49. AUTOMATIZACIÓN: ASPECTOS ORGANIZATIVOS LA AUTOMATIZACIÓN NO PUEDE LLEVAR A QUE EL LABORATORIO SE CONVIERTA EN UN EXPEDIDOR DE CIFRAS AISLADAMENTE. ES NECESARIO AUMENTAR LA EFICIENCIA Y CALIDAD DE LOS RESULTADOS Y UNA CONTINUA SUPERACIÓN DE TODO EL PERSONAL QUE LABORA EN ESTE. Gracias por su atención