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Determinación de glucosa basal y posprandial
Universidad Nacional Federico Villarreal
Facultad de Tecnología Médica
Escuela Profesional de Laboratorio y Anatomía Patológica
Docente:
Lic. TM. Andrés E. Huarachi Saavedra
Integrantes:
 Apaza Delgado , Elizabeth
 Cárdenas Espinoza, Karen
 Rabanal Casimiro, Caroline
 Rodas Cancho, Elsa
 Sandoval Mallma, Milagros
 Torres Mora, Carolina
2015
Página 2
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
INTRODUCCIÓN
Los carbohidratos son aldehídos y cetonas que tienen dos o más grupos hidroxilo. Se clasifican como
monosacáridos (que tienen grupo aldehído o cetona), oligosacáridos (algunos monosacáridos enlazados
entre sí) o polisacáridos (muchos monosacáridos enlazados). El monosacárido más abundante e importante
en la naturaleza es el azúcar de seis carbonos D-glucosa.
La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a
través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en
el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia).
Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda
de la insulina, sustancia producida por el páncreas. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula
en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta
es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y
alteraciones que también la provocan.
Es vital detectar, identificar y cuantificar la glucosa en suero o plasma y orina para el diagnóstico de la
diabetes y para el control de los pacientes diabéticos. Los procedimientos analíticos que se utilizan con
mayor frecuencia son el método enzimático de la glucooxidasa y el método de la hexocinasa, porque son
específicos para la glucosa. Con frecuencia se utiliza la prueba oral de tolerancia
Página 3
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
OBJETIVOS
 Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relación con diversas
patologías.
 Determinar la concentración de glucosa en estado basal y posprandial en una muestra biológica
mediante el método enzimático colorimétrico.
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
MARCO TEORICO
I. Glucosa plasmática en ayunas:
Los individuos normales mantienen una concentración de glucosa plasmática tras ayuno de 10 a 16 hrs de
55-110 mg/dl aunque los valores tienden a aumentar con la edad. La elevación de la concentración de
glucosa plasmática en ayunas constituye una indicación de diabetes sacarina. El National Diabetes Data
Group propone que una concentración de glucosa plasmática en ayunas igual o mayor a en más de una
ocasión constituye diagnóstico de diabetes sacarina.
II. Glucosa plasmática poprandial de dos horas:
La prueba de glucosa plasmática posprandial de dos horas es una prueba de carga sencilla en la cual mide
la glucosa plasmática dos horas después de que el paciente consume algún alimento ; por ejemplo: azúcar
de mesa, Frutas, lácteos, dulces, harinas, y cereales, etc. ; que contenga aproximadamente 100g de
carbohidratos, mezclado con otras sustancias. Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnóstico
de diabetes mellitus.
Normalmente luego de ingerir alimentos, la glucosa en sangre tiene un aumento moderado. Con la ayuda
de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las células del organismo para que estas puedan
aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado
aumento, determinando si hay hiperglucemia pospandrial, para ello se mide la concentración de glucosa
dos horas después de la ingesta de un alimento.
Si el nivel de glucosa está entre 140 y 199 mg/dl dos horas después de haber bebido el líquido, se tiene una
forma de pre-diabetes llamada Intolerancia a la glucosa, lo que significa que existe el riesgo de desarrollar
diabetes tipo dos pero aún no se tiene.
Página 5
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
MATERIALES
a) 5 Tubos de ensaye de 13 X100mm.
b) Micropipetas de 1000 y 10µL.
c) Puntas para micropipeta.
d) Gradilla.
EQUIPOS:
a) Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 490-550 nm.
b) Centrifuga.
REACTIVOS:
I. S. Standard: solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l).
II. A.Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona
(4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato
A B C D
A
B
I II
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
FUNDAMENTO DEL MÉTODO
La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrógeno. La
concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse apareándolo con un indicador de
peroxidasa. La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes
reacciones:
PROCEDIMIENTO
I. ANÁLISIS PREANALÍTICO
CONDICIONES PREVIAS A LA PTOG
 Dieta sin restricciones los tres días previos ( 150 gr de carbohidratos)
 Suspender tratamientos que interfieren con el metabolismo de la glucosa
 No cambiar el estilo de vida los tres días previos
 No estar cursando por un proceso febril o infecciones
 No fumas , no tomar café
 Evitar el estrés
 Es obligatorio el ayuno de 10 a 12 horas antes de la prueba ( solo tomar agua)
 Explicar al paciente, en qué consiste la prueba y el tiempo de duración
 El paciente debe acudir puntualmente a la hora indicada.
INDICACIONES EN EL MOMENTO EN QUE SE VA A REALIZAR LA PTOG
 Indicar al paciente o familiar que lea cuidadosamente la declaración de consentimiento y luego de
haber entendido lo informado debe de firmar dicho documento
 El paciente debe guardar treinta minutos de reposo antes de empezar y permanecer en reposo
durante el tiempo que demora la prueba.
 El paciente debe ingerir toda la solución glucosada en el lapso no mayor de 5 minutos
 Se invalidaría la prueba si el paciente llegara a vomitar, di fuma o mascara chicles.
POD = Peroxidasa
4-AF = 4-aminofenazona
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
II. ANÁLISIS ANALÍTICO:
1. Realizamos la venopunción a una compañera, la cual previamente debió de haber cumplido con
las condiciones previas a la PTOG. La persona a la que se le hizo la venopunción estuvo en ayunas
(el ayuno no debe ser menor de 10 horas ni mayor a 12 horas).
2. Luego de realizar la primera venopuncion, dar de comer y beber la carga oral de glucosa (verificar
la hora).En este caso fue un plátano, un vaso de leche y tostadas con mermelada.
1ra muestra ( 3ml ):
Esta vendría a ser la
muestra basal,
muestra que se
deberá tomar al
paciente que a estado
en ayuna.
Todos estos alimentos fueron
suministrados a partir de las 9.30 am.
 Muy importante la hora para
calcular después de dos horas la
glucosa posprandial.
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
3. Después de 2 horas, es decir a las 11.30 am , realizamos la última venopunción para la
determinacion de la PTOG (separar el suero o plasma para evitar la glicolisis).
ESQUEMA DE TRABAJO :
Muestra basal I Muestra corresponde a cero minutos.
9.30 a.m. Termina de comer y beber la solución glucosada
Muestra post -pandrial
11:30 a.m.
II Muestra a las 2 horas
4. Luego centrifugamos las dos muestras (muestra basal y post – pandrial ) , por 10 minutos a 1500
rpm.
2da muestra (3ml) :
Esta vendría a ser la
muestra posprandial
, debido a que fue
tomada a los 120
minutos después de
haber ingerido los
alimentos con carga
de glucosa
(desayuno).
10 minutos
a 1500 rpm,
en la
centrifuga.
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
5. Luego trabajamos de la siguiente forma con lamuestrabasal , post – pandrial , y la solución estándar
( S) que nos viene con el kit DE WIENER LAB. Esta solución S nos sirve para medir el control de
calidad del procedimiento que vamos a realizar y de su resultado, ya que esta contiene una solución
de glucosa conocida que es de 100 mg/dl (1 g/l).
T1 T2 ST ( 100mg/dl) GLUCOSA
ENZIMATICA
MP1 ( 0’) 30 µl - - 3000 µl ( 3ml)
MP2 ( 120’) - 30 µl - 3000 µl( 3ml)
ST - - 30 µl 3000 µl( 3ml)
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
Cogemos 30 µl de cada uno ( MP1,MP2,ST) , con la pipeta automática, y lo echamos en tres
tubos respectivamente.
Vaciar cada uno en un tubo diferente.
Luego a cada
uno agregar
3ml (3000 µl)
del reactivo A
(glucosa
enzimática)
con la pipeta
automática.
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
6. Incubar los siguientes
tubos en baño maría, a una
temperatura de 37°C por 5
minutos.
7. Realizar la espectrofotometría de cada uno de los anteriores tubos a una longitud de onda de 505
nmt. MEDIR DE MENOR A MAYOR COLOR DEL TUBO
Aquí tenemos todos los tubos con la muestra
respectiva (MP1, MP2, sol. estándar) más 3
ml de la solución de glucosa enzimática.
A la vez preparamos un tubo blanco*, que
contiene reactivo A.
*también puede ser la misma cantidad de
agua destilada.
Este tubo blanco nos servirá para calibrar
nuestro espectrofotómetro, y obtener un
resultado mucho más específico.
Echamos cada solución de cada
tubo ,para la leida tenemos que
colocarlo en un tubo spectronic ,
los ponemos en el
espectrofotómetro y leemos la
absorbancia que nos da cada uno
a una longitud de onda de 505nm.
 M1 : 0,311
 M2: 0,213
 ST: 0,404
Página 12
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
III. POST- ANALÍTICO
1. Luego de realizar el procedimiento en el espectrofotómetro, se van a interpretar los resultados de
la siguiente manera:
* MP 1: Muestra problema 1 ; MP2: muestra problema 2
2. Previamente se halla el Factor de Calibración
Se observa la concentración de la solución estándar de la
glicemia enzimática en la etiqueta del envase de
1 g/L <> 100 mg/dL.
Factor de calibración = 100 = 247.5
0. 404
Absorvancia
MP 1 0.311
MP 2 0.213
Solución
Estándar
0.404
Observación...
Al momento de medir con el espectrofotómetro lo
calibramos con ayuda del BLANCO. El cual si se
desea ser exactos se utiliza como blanco el reactivo
de glicemia enzimática pero si dicho reactivo está
muy colorido es porque se ha pasado y en vez de eso
se usa agua destilada como blanco.
Factor de calibración = [ST]
Lº[ST]
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
3. Luego se determina la concentración de la glucosa o concentración de la muestra problema.
[MP 1] = 247.5 x 0.311 = 76.9 mg/dL
[MP 2] = 247.5 x 0.213 = 52.7 mg/dL
4. CONTROL DE CALIDAD
Se realiza según las indicaciones que vienen con el reactivo.
A B
Low 50 - 100 50 - 80
High 120 - 140 110 - 130
[MP x] = Factor de calibración x absorción de C/ MPx
Para nuestros resultados se
encuentran dentro del rango
establecido ya que
A(MP 1) : 76.9 mg/dL
B (MP2): 52.7 mg/dL
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
CUESTIONARIO
1. ¿ Cuál sería la carga de glucosa anhidra indicada para los pacientes pediátricos?
Para la realización de una prueba oral de tolerancia a la glucosa en niños, la OMS recomienda la
administración de 1,75 g/KG de masa corporal (9,7mmol) hasta un máximo de 75g; esta
recomendación era seguida por el 72,2% de los centros. Para la interpretación de la prueba oral de
tolerancia a la glucosa en niños y adultos no gestantes, la OMS utiliza los valores de la concentración
de glucosa en plasma basal y a las 2 horas post sobrecarga.
2. ¿En qué casos el Lic. Tecnólogo medico puede rechazar o invalidar la PTOG?
Prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa (PTOG): se requiere que el individuo haya ayunado al menos
ocho horas antes de la prueba. Individuo debe tomar una solución glucosada con 75 gramos de
glucosa disuelta en agua.
Entonces no debe comer ni beber nada después de la medianoche. Sino será rechazada la PTOG.
Si el individuo tiene un nivel de glucosa en la sangre entre 140 y 199 mg/dl, se le diagnostica un pre
diabetes llamada intolerancia a la glucosa, significa que el individuo puede llegar a tener una
diabetes tipo 2.
3. ¿Por qué es importante procesar la primera muestra basal, antes de suministrar al paciente la
solución glucosada?
Como sabemos, que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve anormal sólo
cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la glucosa sérica ayuda a evaluar la
función e integridad, el equilibrio del sistema.
La prueba de glucosa en ayunas va evaluar de modo aproximado la capacidad del cuerpo para
regular la glucosa y nos va a proporcionar información acerca de la clase de anormalidad, si es que
la hay.
4. ¿Considera usted que debe de existir una declaración de consentimiento de parte del paciente
para poder proceder a realizar la PTOG. Si o No por qué?
Si, considero que una declaración de consentimiento se debería desarrollar desde el primer
momento en que se toma contacto con el paciente y a lo largo de toda su atención. Ya que es
importante reconocer y respetar el derecho y la autonomía de los pacientes, lo que enmarca no
solo una exigencia jurídica, sino, sobre todo una exigencia ética como trabajadores de la salud.
Además se promueve la participación del paciente en su proceso de salud lo que significa que
COMPARTE RESPONSABILIDADES Y ASUME RIESGOS.
Página 15
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
5. ¿Explique el comportamiento observado en las concentraciones sanguíneas de PTOG, el
incremento observado y su posterior disminución en la concentración de este carbohidrato en
sangre?
Muestra problema 1: resultado de glucosa plasmática en ayuna, al realizar mis cálculos me salió
como resultado 76.9mg/dl de glucosa en ayuna.
Muestra problema 2: resultado de mi glucosa plasmática posprandial de dos horas, al realizar los
respectivos cálculos, resultó 52,7mg/dl.
En esta persona los valores de glucosa en ayuna están dentro de los valores referenciales, debido a
que existe una buena interacción al momento de regular la glucosa en sangre, ya que no se ha
ingerido ningún alimento; sin embargo el sistema lo regula adecuadamente. Por el contrario nos
indicaría valores anormales si es que el sistema no funcionaría correctamente.
Normalmente luego de ingerir alimentos (como frutas, harinas, dulces, etc), la glucosa en sangre
tiene un aumento moderado. Con la ayuda de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las
células del organismo para que estas puedan aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa
pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado aumento, que luego se regularizara por el
propio sistema.
Página 16
Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
RECOMENDACIONES
 Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no afectan los
resultados.
 La hemólisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.
 La muestra es inaceptable si:
 Si el suero se obtiene turbio.
 Si la identificación es inadecuada.
 Si el tubo de recolección no es el adecuado.
 Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis permisible
 No usar reactivos fuera de la fecha indicada.
 No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
CONCLUSIONES
Esta prueba mide la cantidad de glucosa (azúcar) que hay en la sangre. El azúcar es una fuente importante
de energía, especialmente para el cerebro. El sistema endócrino (glandular) controla con exactitud la
cantidad de glucosa en la sangre. Este sistema hace que el azúcar se almacene o se utilice para energía,
según las necesidades de su cuerpo.
Usted puede obtener la glucosa directamente de algunos alimentos, como el azúcar de mesa. El cuerpo
también puede producir glucosa cuando se digieren otros alimentos, como el pan y los cereales. Por lo
general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus.
La glucosa postprandial los niveles de glucosa en sangre a las dos horas de la ingesta de un alimento. La
determinación de este parámetro se utiliza para el diagnóstico de la diabetes y otras enfermedades del
metabolismo de la glucosa y para el cálculo del índice glucémico de los alimentos. Algunos autores señalan
que la glucosa postprandial es un mejor marcador de la diabetes que la glucosa en ayunas
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Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II
BIBLIOGRAFÍA
 Glicemia enzimática AA para la determinación de glucosa en suero, plasma, orina o liquido
cefalorraquídeo.
Obtenido en:
http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/glicemia_enzi
matica_aa_liquida_sp.pdf
 Manual practica de bioquímica clínica – UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MEXICO. Facultad de
QUIMICA.
Obtenido en:
http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf
 Glucosa plasmática en ayunas y glucosa plasmática posprandial .
Obtenido de:
Libro de Quimica clínica . - Shauna C.Anderson,Ph.D ,Susan Cockayne, Ph.D. Mc Graw-
Hill.Intearmericana.
 Estado posprandial y el riesgo de enfermedad cardiovascular, declaratoria de posición.
Obtenido en:
http://www.medigraphic.com/pdfs/cardio/h-2003/h032a.pdf
 Clases dictadas en la Facultad de Tecnología médica en la UNFV.

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Determinacion de glucosa basal y posprandial

  • 1. Determinación de glucosa basal y posprandial Universidad Nacional Federico Villarreal Facultad de Tecnología Médica Escuela Profesional de Laboratorio y Anatomía Patológica Docente: Lic. TM. Andrés E. Huarachi Saavedra Integrantes:  Apaza Delgado , Elizabeth  Cárdenas Espinoza, Karen  Rabanal Casimiro, Caroline  Rodas Cancho, Elsa  Sandoval Mallma, Milagros  Torres Mora, Carolina 2015
  • 2. Página 2 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II INTRODUCCIÓN Los carbohidratos son aldehídos y cetonas que tienen dos o más grupos hidroxilo. Se clasifican como monosacáridos (que tienen grupo aldehído o cetona), oligosacáridos (algunos monosacáridos enlazados entre sí) o polisacáridos (muchos monosacáridos enlazados). El monosacárido más abundante e importante en la naturaleza es el azúcar de seis carbonos D-glucosa. La glucosa es la principal fuente de energía para el metabolismo celular. Se obtiene fundamentalmente a través de la alimentación, y se almacena principalmente en el hígado, el cual tiene un papel primordial en el mantenimiento de los niveles de glucosa en sangre (glucemia). Para que esos niveles se mantengan y el almacenamiento en el hígado sea adecuado, se precisa la ayuda de la insulina, sustancia producida por el páncreas. Cuando la insulina es insuficiente, la glucosa se acumula en sangre, y si esta situación se mantiene, da lugar a una serie de complicaciones en distintos órganos. Esta es la razón principal por la que se produce aumento de glucosa en sangre, pero hay otras enfermedades y alteraciones que también la provocan. Es vital detectar, identificar y cuantificar la glucosa en suero o plasma y orina para el diagnóstico de la diabetes y para el control de los pacientes diabéticos. Los procedimientos analíticos que se utilizan con mayor frecuencia son el método enzimático de la glucooxidasa y el método de la hexocinasa, porque son específicos para la glucosa. Con frecuencia se utiliza la prueba oral de tolerancia
  • 3. Página 3 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II OBJETIVOS  Destacar la importancia de la glucosa en el metabolismo humano y su relación con diversas patologías.  Determinar la concentración de glucosa en estado basal y posprandial en una muestra biológica mediante el método enzimático colorimétrico.
  • 4. Página 4 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II MARCO TEORICO I. Glucosa plasmática en ayunas: Los individuos normales mantienen una concentración de glucosa plasmática tras ayuno de 10 a 16 hrs de 55-110 mg/dl aunque los valores tienden a aumentar con la edad. La elevación de la concentración de glucosa plasmática en ayunas constituye una indicación de diabetes sacarina. El National Diabetes Data Group propone que una concentración de glucosa plasmática en ayunas igual o mayor a en más de una ocasión constituye diagnóstico de diabetes sacarina. II. Glucosa plasmática poprandial de dos horas: La prueba de glucosa plasmática posprandial de dos horas es una prueba de carga sencilla en la cual mide la glucosa plasmática dos horas después de que el paciente consume algún alimento ; por ejemplo: azúcar de mesa, Frutas, lácteos, dulces, harinas, y cereales, etc. ; que contenga aproximadamente 100g de carbohidratos, mezclado con otras sustancias. Los niveles por encima de 200 mg/dl indican un diagnóstico de diabetes mellitus. Normalmente luego de ingerir alimentos, la glucosa en sangre tiene un aumento moderado. Con la ayuda de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las células del organismo para que estas puedan aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado aumento, determinando si hay hiperglucemia pospandrial, para ello se mide la concentración de glucosa dos horas después de la ingesta de un alimento. Si el nivel de glucosa está entre 140 y 199 mg/dl dos horas después de haber bebido el líquido, se tiene una forma de pre-diabetes llamada Intolerancia a la glucosa, lo que significa que existe el riesgo de desarrollar diabetes tipo dos pero aún no se tiene.
  • 5. Página 5 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II MATERIALES a) 5 Tubos de ensaye de 13 X100mm. b) Micropipetas de 1000 y 10µL. c) Puntas para micropipeta. d) Gradilla. EQUIPOS: a) Espectrofotómetro o analizador para lecturas de 490-550 nm. b) Centrifuga. REACTIVOS: I. S. Standard: solución de glucosa 100 mg/dl (1 g/l). II. A.Reactivo A: solución conteniendo glucosa oxidasa (GOD), peroxidasa (POD), 4-aminofenazona (4-AF), buffer fosfatos pH 7,0 y 4-hidroxibenzoato A B C D A B I II
  • 6. Página 6 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II FUNDAMENTO DEL MÉTODO La enzima glucooxidasa cataliza la oxidación de glucosa a gluconato y peróxido de hidrógeno. La concentración de glucosa es proporcional al H2O2, este puede medirse apareándolo con un indicador de peroxidasa. La determinación de glucosa se efectúa mediante el método de Trinder según las siguientes reacciones: PROCEDIMIENTO I. ANÁLISIS PREANALÍTICO CONDICIONES PREVIAS A LA PTOG  Dieta sin restricciones los tres días previos ( 150 gr de carbohidratos)  Suspender tratamientos que interfieren con el metabolismo de la glucosa  No cambiar el estilo de vida los tres días previos  No estar cursando por un proceso febril o infecciones  No fumas , no tomar café  Evitar el estrés  Es obligatorio el ayuno de 10 a 12 horas antes de la prueba ( solo tomar agua)  Explicar al paciente, en qué consiste la prueba y el tiempo de duración  El paciente debe acudir puntualmente a la hora indicada. INDICACIONES EN EL MOMENTO EN QUE SE VA A REALIZAR LA PTOG  Indicar al paciente o familiar que lea cuidadosamente la declaración de consentimiento y luego de haber entendido lo informado debe de firmar dicho documento  El paciente debe guardar treinta minutos de reposo antes de empezar y permanecer en reposo durante el tiempo que demora la prueba.  El paciente debe ingerir toda la solución glucosada en el lapso no mayor de 5 minutos  Se invalidaría la prueba si el paciente llegara a vomitar, di fuma o mascara chicles. POD = Peroxidasa 4-AF = 4-aminofenazona
  • 7. Página 7 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II II. ANÁLISIS ANALÍTICO: 1. Realizamos la venopunción a una compañera, la cual previamente debió de haber cumplido con las condiciones previas a la PTOG. La persona a la que se le hizo la venopunción estuvo en ayunas (el ayuno no debe ser menor de 10 horas ni mayor a 12 horas). 2. Luego de realizar la primera venopuncion, dar de comer y beber la carga oral de glucosa (verificar la hora).En este caso fue un plátano, un vaso de leche y tostadas con mermelada. 1ra muestra ( 3ml ): Esta vendría a ser la muestra basal, muestra que se deberá tomar al paciente que a estado en ayuna. Todos estos alimentos fueron suministrados a partir de las 9.30 am.  Muy importante la hora para calcular después de dos horas la glucosa posprandial.
  • 8. Página 8 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II 3. Después de 2 horas, es decir a las 11.30 am , realizamos la última venopunción para la determinacion de la PTOG (separar el suero o plasma para evitar la glicolisis). ESQUEMA DE TRABAJO : Muestra basal I Muestra corresponde a cero minutos. 9.30 a.m. Termina de comer y beber la solución glucosada Muestra post -pandrial 11:30 a.m. II Muestra a las 2 horas 4. Luego centrifugamos las dos muestras (muestra basal y post – pandrial ) , por 10 minutos a 1500 rpm. 2da muestra (3ml) : Esta vendría a ser la muestra posprandial , debido a que fue tomada a los 120 minutos después de haber ingerido los alimentos con carga de glucosa (desayuno). 10 minutos a 1500 rpm, en la centrifuga.
  • 9. Página 9 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II 5. Luego trabajamos de la siguiente forma con lamuestrabasal , post – pandrial , y la solución estándar ( S) que nos viene con el kit DE WIENER LAB. Esta solución S nos sirve para medir el control de calidad del procedimiento que vamos a realizar y de su resultado, ya que esta contiene una solución de glucosa conocida que es de 100 mg/dl (1 g/l). T1 T2 ST ( 100mg/dl) GLUCOSA ENZIMATICA MP1 ( 0’) 30 µl - - 3000 µl ( 3ml) MP2 ( 120’) - 30 µl - 3000 µl( 3ml) ST - - 30 µl 3000 µl( 3ml)
  • 10. Página 10 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II Cogemos 30 µl de cada uno ( MP1,MP2,ST) , con la pipeta automática, y lo echamos en tres tubos respectivamente. Vaciar cada uno en un tubo diferente. Luego a cada uno agregar 3ml (3000 µl) del reactivo A (glucosa enzimática) con la pipeta automática.
  • 11. Página 11 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II 6. Incubar los siguientes tubos en baño maría, a una temperatura de 37°C por 5 minutos. 7. Realizar la espectrofotometría de cada uno de los anteriores tubos a una longitud de onda de 505 nmt. MEDIR DE MENOR A MAYOR COLOR DEL TUBO Aquí tenemos todos los tubos con la muestra respectiva (MP1, MP2, sol. estándar) más 3 ml de la solución de glucosa enzimática. A la vez preparamos un tubo blanco*, que contiene reactivo A. *también puede ser la misma cantidad de agua destilada. Este tubo blanco nos servirá para calibrar nuestro espectrofotómetro, y obtener un resultado mucho más específico. Echamos cada solución de cada tubo ,para la leida tenemos que colocarlo en un tubo spectronic , los ponemos en el espectrofotómetro y leemos la absorbancia que nos da cada uno a una longitud de onda de 505nm.  M1 : 0,311  M2: 0,213  ST: 0,404
  • 12. Página 12 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II III. POST- ANALÍTICO 1. Luego de realizar el procedimiento en el espectrofotómetro, se van a interpretar los resultados de la siguiente manera: * MP 1: Muestra problema 1 ; MP2: muestra problema 2 2. Previamente se halla el Factor de Calibración Se observa la concentración de la solución estándar de la glicemia enzimática en la etiqueta del envase de 1 g/L <> 100 mg/dL. Factor de calibración = 100 = 247.5 0. 404 Absorvancia MP 1 0.311 MP 2 0.213 Solución Estándar 0.404 Observación... Al momento de medir con el espectrofotómetro lo calibramos con ayuda del BLANCO. El cual si se desea ser exactos se utiliza como blanco el reactivo de glicemia enzimática pero si dicho reactivo está muy colorido es porque se ha pasado y en vez de eso se usa agua destilada como blanco. Factor de calibración = [ST] Lº[ST]
  • 13. Página 13 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II 3. Luego se determina la concentración de la glucosa o concentración de la muestra problema. [MP 1] = 247.5 x 0.311 = 76.9 mg/dL [MP 2] = 247.5 x 0.213 = 52.7 mg/dL 4. CONTROL DE CALIDAD Se realiza según las indicaciones que vienen con el reactivo. A B Low 50 - 100 50 - 80 High 120 - 140 110 - 130 [MP x] = Factor de calibración x absorción de C/ MPx Para nuestros resultados se encuentran dentro del rango establecido ya que A(MP 1) : 76.9 mg/dL B (MP2): 52.7 mg/dL
  • 14. Página 14 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II CUESTIONARIO 1. ¿ Cuál sería la carga de glucosa anhidra indicada para los pacientes pediátricos? Para la realización de una prueba oral de tolerancia a la glucosa en niños, la OMS recomienda la administración de 1,75 g/KG de masa corporal (9,7mmol) hasta un máximo de 75g; esta recomendación era seguida por el 72,2% de los centros. Para la interpretación de la prueba oral de tolerancia a la glucosa en niños y adultos no gestantes, la OMS utiliza los valores de la concentración de glucosa en plasma basal y a las 2 horas post sobrecarga. 2. ¿En qué casos el Lic. Tecnólogo medico puede rechazar o invalidar la PTOG? Prueba de Tolerancia Oral a la Glucosa (PTOG): se requiere que el individuo haya ayunado al menos ocho horas antes de la prueba. Individuo debe tomar una solución glucosada con 75 gramos de glucosa disuelta en agua. Entonces no debe comer ni beber nada después de la medianoche. Sino será rechazada la PTOG. Si el individuo tiene un nivel de glucosa en la sangre entre 140 y 199 mg/dl, se le diagnostica un pre diabetes llamada intolerancia a la glucosa, significa que el individuo puede llegar a tener una diabetes tipo 2. 3. ¿Por qué es importante procesar la primera muestra basal, antes de suministrar al paciente la solución glucosada? Como sabemos, que la concentración de glucosa sérica por lo general se vuelve anormal sólo cuando hay un trastorno grave de esta interacción, el verificar la glucosa sérica ayuda a evaluar la función e integridad, el equilibrio del sistema. La prueba de glucosa en ayunas va evaluar de modo aproximado la capacidad del cuerpo para regular la glucosa y nos va a proporcionar información acerca de la clase de anormalidad, si es que la hay. 4. ¿Considera usted que debe de existir una declaración de consentimiento de parte del paciente para poder proceder a realizar la PTOG. Si o No por qué? Si, considero que una declaración de consentimiento se debería desarrollar desde el primer momento en que se toma contacto con el paciente y a lo largo de toda su atención. Ya que es importante reconocer y respetar el derecho y la autonomía de los pacientes, lo que enmarca no solo una exigencia jurídica, sino, sobre todo una exigencia ética como trabajadores de la salud. Además se promueve la participación del paciente en su proceso de salud lo que significa que COMPARTE RESPONSABILIDADES Y ASUME RIESGOS.
  • 15. Página 15 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II 5. ¿Explique el comportamiento observado en las concentraciones sanguíneas de PTOG, el incremento observado y su posterior disminución en la concentración de este carbohidrato en sangre? Muestra problema 1: resultado de glucosa plasmática en ayuna, al realizar mis cálculos me salió como resultado 76.9mg/dl de glucosa en ayuna. Muestra problema 2: resultado de mi glucosa plasmática posprandial de dos horas, al realizar los respectivos cálculos, resultó 52,7mg/dl. En esta persona los valores de glucosa en ayuna están dentro de los valores referenciales, debido a que existe una buena interacción al momento de regular la glucosa en sangre, ya que no se ha ingerido ningún alimento; sin embargo el sistema lo regula adecuadamente. Por el contrario nos indicaría valores anormales si es que el sistema no funcionaría correctamente. Normalmente luego de ingerir alimentos (como frutas, harinas, dulces, etc), la glucosa en sangre tiene un aumento moderado. Con la ayuda de la insulina del cuerpo, la glucosa, ingresa en las células del organismo para que estas puedan aprovecharla. Y es justamente el examen de glucosa pospandrial la que nos ayudara a medir este moderado aumento, que luego se regularizara por el propio sistema.
  • 16. Página 16 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II RECOMENDACIONES  Los anticoagulantes de uso corriente como la EDTA, oxalato, heparina o fluoruro no afectan los resultados.  La hemólisis hasta 0,3 g/dL de hemoglobina no interfiere.  La muestra es inaceptable si:  Si el suero se obtiene turbio.  Si la identificación es inadecuada.  Si el tubo de recolección no es el adecuado.  Cuando se haya excedido el tiempo máximo de análisis permisible  No usar reactivos fuera de la fecha indicada.  No pipetee los reactivos con la boca y evite el contacto con piel y ojos.
  • 17. Página 17 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II CONCLUSIONES Esta prueba mide la cantidad de glucosa (azúcar) que hay en la sangre. El azúcar es una fuente importante de energía, especialmente para el cerebro. El sistema endócrino (glandular) controla con exactitud la cantidad de glucosa en la sangre. Este sistema hace que el azúcar se almacene o se utilice para energía, según las necesidades de su cuerpo. Usted puede obtener la glucosa directamente de algunos alimentos, como el azúcar de mesa. El cuerpo también puede producir glucosa cuando se digieren otros alimentos, como el pan y los cereales. Por lo general, la prueba de glucosa en la sangre se hace para detectar la diabetes mellitus. La glucosa postprandial los niveles de glucosa en sangre a las dos horas de la ingesta de un alimento. La determinación de este parámetro se utiliza para el diagnóstico de la diabetes y otras enfermedades del metabolismo de la glucosa y para el cálculo del índice glucémico de los alimentos. Algunos autores señalan que la glucosa postprandial es un mejor marcador de la diabetes que la glucosa en ayunas
  • 18. Página 18 Universidad Nacional Federico Villarreal Bioquímica II BIBLIOGRAFÍA  Glicemia enzimática AA para la determinación de glucosa en suero, plasma, orina o liquido cefalorraquídeo. Obtenido en: http://www.wienerlab.com.ar/VademecumDocumentos/Vademecum%20espanol/glicemia_enzi matica_aa_liquida_sp.pdf  Manual practica de bioquímica clínica – UNIVERSIDAD AUTONOMA DE MEXICO. Facultad de QUIMICA. Obtenido en: http://depa.fquim.unam.mx/amyd/archivero/MANUALBIOQUIMICACLINICA_10817.pdf  Glucosa plasmática en ayunas y glucosa plasmática posprandial . Obtenido de: Libro de Quimica clínica . - Shauna C.Anderson,Ph.D ,Susan Cockayne, Ph.D. Mc Graw- Hill.Intearmericana.  Estado posprandial y el riesgo de enfermedad cardiovascular, declaratoria de posición. Obtenido en: http://www.medigraphic.com/pdfs/cardio/h-2003/h032a.pdf  Clases dictadas en la Facultad de Tecnología médica en la UNFV.