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ENZIMA INMUNOANÁLISIS
(EIA)
Lcda. Griselda Arteaga
Departamento de Microbiología
Inmunología
Enzima Inmuno Ensayo
 Objetivo: Comprender el principio
inmunológico de la técnica de EIA,
sus aplicaciones y limitantes en el
diagnóstico clínico por el laboratorio.
Contenido
 Principios del ELISA
 Clasificación de las técnicas de ELISA
 Procedimiento
 Cálculo de Cut off
 Aplicaciones Clínicas
 Ejemplos de aplicaciones clínicas
 Flujograma diagnóstico panameño del VIH.
 Flujograma diagnóstico panameño del VIH
en niños menores de 18 meses.
EIA
 ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay
Análisis de inmunoabsorción enzimática
PRINCIPIO:
Determinación cuantitativa de un
antígeno o un anticuerpo por medio de una
molécula indicadora, la cual se encuentra
unida covalentemente a una enzima.
CONJUGADO
ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA
ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA
ENZIMA: Peroxidasa de rabano, FAL,
Glucosa oxidasa,Catalasa, AC, etc
Clasificación de las técnicas de
ELISA
 Análisis Competitivo empleando:
 Conjugado antígeno-enzima
 Conjugado anticuerpo marcado con enzima
 Análisis No Competitivos
 Sandwich
 Indirecto para medir anticuerpos
ELISA Competitivo con
Ag marcado
Anticuerpo en
fase solida
Ag libre
Ag-E
lavado
Añadir substrato, Incubar y medir
actividad enzimática
ELISA tipo Sandwich
Ag
Ac en fase sólida
Lavar
+
+
conjugado
lavar
Medición
de act. enz.
ELISA INDIRECTO,
para medir anticuerpo
REACTIVOS
LECTOR DE ELISA
Cálculo del Cut-off
y Zona Gris
 Valor de corte o Cut Off
CO=NCx +0.3
 Zona Gris o Equivoca
 CO +/- 10%CO
RESULTADOS FALSOS
POSITIVOS
 Reacciones cruzadas entre anticuerpos
con especificidades similares.
 Enfermedades Autoinmunes
 Embarazadas
 Presencias de virus como Epstein Barr,
VIH, etc.
 Contaminación cruzada entre muestras.
 Deterioro de los reactivos
 Errores Técnicos
Resultados Falsos Negativos
 Paciente no ha generado los
anticuerpos en estudio
 Los anticuerpos de la muestra no tienen
especificidad contra el antígeno de la
prueba o viceversa.
 Deterioro de los reactivos
 Errores Técnicos
APLICACIONES CLINICAS
 Diagnósticos de infecciones por
microorganismos: al detectar la presencia de
antígenos del agente infeccioso.
 Confirmación de la presencia de anticuerpos:
pueden ser anticuerpos contra
microorganismo, inclusive
cualquier
vacunas,
autoanticuerpos, etc.
metabolitos: hormonas,
 Cuantificación de
medicamentos, etc
Ejemplos
 En mujeres embarazadas:
 Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa
IgG, IgM
IgG, IgM
 Toxo
 Rubeola
 VIH
 CMV
 Diagnóstico de VIH
 Monitoreo de hormonas-tratamiento
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  • 1. ENZIMA INMUNOANÁLISIS (EIA) Lcda. Griselda Arteaga Departamento de Microbiología Inmunología
  • 2. Enzima Inmuno Ensayo  Objetivo: Comprender el principio inmunológico de la técnica de EIA, sus aplicaciones y limitantes en el diagnóstico clínico por el laboratorio.
  • 3. Contenido  Principios del ELISA  Clasificación de las técnicas de ELISA  Procedimiento  Cálculo de Cut off  Aplicaciones Clínicas  Ejemplos de aplicaciones clínicas  Flujograma diagnóstico panameño del VIH.  Flujograma diagnóstico panameño del VIH en niños menores de 18 meses.
  • 4. EIA  ELISA: Enzyme linked immunosorbent assay Análisis de inmunoabsorción enzimática PRINCIPIO: Determinación cuantitativa de un antígeno o un anticuerpo por medio de una molécula indicadora, la cual se encuentra unida covalentemente a una enzima.
  • 5. CONJUGADO ANTICUERPO MARCADO CON ENZIMA ANTIGENO MARCADO CON ENZIMA ENZIMA: Peroxidasa de rabano, FAL, Glucosa oxidasa,Catalasa, AC, etc
  • 6. Clasificación de las técnicas de ELISA  Análisis Competitivo empleando:  Conjugado antígeno-enzima  Conjugado anticuerpo marcado con enzima  Análisis No Competitivos  Sandwich  Indirecto para medir anticuerpos
  • 7. ELISA Competitivo con Ag marcado Anticuerpo en fase solida Ag libre Ag-E lavado Añadir substrato, Incubar y medir actividad enzimática
  • 8. ELISA tipo Sandwich Ag Ac en fase sólida Lavar + + conjugado lavar Medición de act. enz.
  • 12. Cálculo del Cut-off y Zona Gris  Valor de corte o Cut Off CO=NCx +0.3  Zona Gris o Equivoca  CO +/- 10%CO
  • 13. RESULTADOS FALSOS POSITIVOS  Reacciones cruzadas entre anticuerpos con especificidades similares.  Enfermedades Autoinmunes  Embarazadas  Presencias de virus como Epstein Barr, VIH, etc.  Contaminación cruzada entre muestras.  Deterioro de los reactivos  Errores Técnicos
  • 14. Resultados Falsos Negativos  Paciente no ha generado los anticuerpos en estudio  Los anticuerpos de la muestra no tienen especificidad contra el antígeno de la prueba o viceversa.  Deterioro de los reactivos  Errores Técnicos
  • 15. APLICACIONES CLINICAS  Diagnósticos de infecciones por microorganismos: al detectar la presencia de antígenos del agente infeccioso.  Confirmación de la presencia de anticuerpos: pueden ser anticuerpos contra microorganismo, inclusive cualquier vacunas, autoanticuerpos, etc. metabolitos: hormonas,  Cuantificación de medicamentos, etc
  • 16. Ejemplos  En mujeres embarazadas:  Medición de HGC-cualitativa y cuantitativa IgG, IgM IgG, IgM  Toxo  Rubeola  VIH  CMV  Diagnóstico de VIH  Monitoreo de hormonas-tratamiento