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ESPECTOFOTOMETRIA DE CAROTENOS
PRESENTADO POR:
Sonia Marcela Arias Ortiz (73967)
Andrea Moreno Gil (73920)
OBJETIVOS:
 Determinar la absorbancia en una muestra natural de un extracto de carotenos.
 Realizar una curva de calibración teniendo en cuenta las concentraciones a usar.
 Calcular la cantidad de carotenos presentes en la muestra.
MARCO TEORICO
Los carotenoides son pigmentos orgánicos que se encuentran en forma natural en
plantas y otros organismos fotosintéticos, como algas, algunas clases de hongos y
bacterias. Se conoce la existencia de más de 700 compuestos pertenecientes a este
grupo.
Los carotenoides son una clase de pigmentos con 40 átomos de carbono derivados
biosintéticamente a partir de dos unidades de geranil-geranilpirofosfato, en su mayoría
son solubles en solventes apolares y de coloraciones que oscilan entre el amarillo (por
ejemplo el β-caroteno) y el rojo (por ejemplo el licopeno). Los carotenoides se clasifican
en dos grupos:carotenosy xantofilos.Loscarotenossólocontienencarbonoe hidrógeno
(por ejemplo el β-caroteno, el licopeno, etc.), mientras que los xantofilos contienen
además oxígeno (por ejemplo la luteína).
Los carotenoides se encuentran ampliamente distribuidos en el reino vegetal, en
bacterias y muy pocos se han reportado en animales (por ejemplolos colores rojizos de
las plumas del flamenco son debidas a la cantaxantina, un carotenoide), y
particularmente invertebrados marinos como las esponjas, estrellas de mar, pepinos de
mar, erizos de mar y otros. En los animales superiores el β-caroteno es un requerimiento
dietético esencial pues es precursor de la vitamina A. Los carotenoides son muy
importantes ya que representan una fuente de provitamina A (1 equivalente de retinol =
1 g de retinol = 6 g de β-caroteno), no son tóxicos, presentan dentro de la célula
actividad antioxidante, participan en la desactivación de radicales libres, producidos en
el metabolismo celular, imparten colores amarillos y rojos a las plantas y animales; la
purificación de estos metabolitos permitiría utilizarlos como colorantes naturales para la
fortificacióndel colorenlosjugosy/o en cualquierotroalimentoenlugardela utilización
de los colorantes artificiales que son de naturaleza tóxica. Los colorantes utilizados en la
agroindustria, en su mayoría son importados y de origen artificial.
Muchos de estos compuestos producen alergias en los niños y en valores altos son
tóxicos. Por el contrario estudios epidemiológicos han demostrado que existe una
relación inversa entre la incidencia de cáncer y el consumo de fuentes naturales de 4
carotenoides, sin embargo, la purificación de estos compuestos es costosa para el uso
de solventes orgánicos en su extracción. Los métodos más utilizados en la extracción de
carotenoides son: remoción con solventes orgánicos, fluidos supercríticos y aceites.
MATERIALES Y REACTIVOS
MATERIALES REACTIVOS
Zanahoria Éter de petróleo
Papel de filtro o gasa Sulfato de sodio anhídrido
Embudo de decantación Acetona
3 vasos de precipitado
8 tubos de ensayo
3 pipetas (1 ml, 5 ml, 10 ml)
Agitador
Placa de calentamiento
Soporte trípode
Balón aforado de 100 ml
PROCEDIMIENTO:
Transferir a un matraz aforado de 100
ml
Completarel aforoconeterde petroleo
Reposar
15 min luego agitar
Agregar una pequeña cantidad de
Na2SO4
Agregar 60 ml de ester de
petroleo
Lavar el residuo
Agreagar 20 o 30 ml de acetona.
Decantar
Se extrae ensu totalidadel pigmento(usar
el papel de filtroogasa)
Homogenizacion
Usar la licuadora triturar y agregar 60
ml de acetona por 3 min
Pesar 1 g de muestra fresca
La zanahoriadebe estarcortadao picada
Para realizar la curva de calibración y el contenido de carotenos
CUESTIONARIO:
1. Como influye la variación de longitud de onda en la medición de la absorbancia
de los carotenos?
2. Si se varia la concentración inicial varia el contenido de carotenos en la muestra?
3. Que otros métodos se pueden realizar para la extracción de carotenos?
4. El éter de petróleo al ser el blanco como varia su absorbancia si se cambia de
longitud de onda?
Realizar los calculos correspondientes
Realizar la curva de calibracion Determinar el contenido de
carotenos
Medir la absorbancia
Usar el pespectofotometro a una
longitud de onda de 645 nm
Usar el pespectofotometro a una
longitud de onda de 665 nm
Realizar un blanco usando 10 ml de eter de petroleo y calibar el
espectofotometro
Curva de calibracion Contenidode carotenos
Realizar diluciones de 1,3,5,7,9,
ml en los tubos de ensayo
•Completar harta 10 ml con eter de
petroleo
Tomar con una pipeta 2 ml de
solucion patron y transferir a un
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Espectofotometria de carotenos

  • 1. ESPECTOFOTOMETRIA DE CAROTENOS PRESENTADO POR: Sonia Marcela Arias Ortiz (73967) Andrea Moreno Gil (73920) OBJETIVOS:  Determinar la absorbancia en una muestra natural de un extracto de carotenos.  Realizar una curva de calibración teniendo en cuenta las concentraciones a usar.  Calcular la cantidad de carotenos presentes en la muestra. MARCO TEORICO Los carotenoides son pigmentos orgánicos que se encuentran en forma natural en plantas y otros organismos fotosintéticos, como algas, algunas clases de hongos y bacterias. Se conoce la existencia de más de 700 compuestos pertenecientes a este grupo. Los carotenoides son una clase de pigmentos con 40 átomos de carbono derivados biosintéticamente a partir de dos unidades de geranil-geranilpirofosfato, en su mayoría son solubles en solventes apolares y de coloraciones que oscilan entre el amarillo (por ejemplo el β-caroteno) y el rojo (por ejemplo el licopeno). Los carotenoides se clasifican en dos grupos:carotenosy xantofilos.Loscarotenossólocontienencarbonoe hidrógeno (por ejemplo el β-caroteno, el licopeno, etc.), mientras que los xantofilos contienen además oxígeno (por ejemplo la luteína). Los carotenoides se encuentran ampliamente distribuidos en el reino vegetal, en bacterias y muy pocos se han reportado en animales (por ejemplolos colores rojizos de las plumas del flamenco son debidas a la cantaxantina, un carotenoide), y particularmente invertebrados marinos como las esponjas, estrellas de mar, pepinos de mar, erizos de mar y otros. En los animales superiores el β-caroteno es un requerimiento dietético esencial pues es precursor de la vitamina A. Los carotenoides son muy importantes ya que representan una fuente de provitamina A (1 equivalente de retinol = 1 g de retinol = 6 g de β-caroteno), no son tóxicos, presentan dentro de la célula actividad antioxidante, participan en la desactivación de radicales libres, producidos en el metabolismo celular, imparten colores amarillos y rojos a las plantas y animales; la purificación de estos metabolitos permitiría utilizarlos como colorantes naturales para la fortificacióndel colorenlosjugosy/o en cualquierotroalimentoenlugardela utilización de los colorantes artificiales que son de naturaleza tóxica. Los colorantes utilizados en la agroindustria, en su mayoría son importados y de origen artificial.
  • 2. Muchos de estos compuestos producen alergias en los niños y en valores altos son tóxicos. Por el contrario estudios epidemiológicos han demostrado que existe una relación inversa entre la incidencia de cáncer y el consumo de fuentes naturales de 4 carotenoides, sin embargo, la purificación de estos compuestos es costosa para el uso de solventes orgánicos en su extracción. Los métodos más utilizados en la extracción de carotenoides son: remoción con solventes orgánicos, fluidos supercríticos y aceites. MATERIALES Y REACTIVOS MATERIALES REACTIVOS Zanahoria Éter de petróleo Papel de filtro o gasa Sulfato de sodio anhídrido Embudo de decantación Acetona 3 vasos de precipitado 8 tubos de ensayo 3 pipetas (1 ml, 5 ml, 10 ml) Agitador Placa de calentamiento Soporte trípode Balón aforado de 100 ml
  • 3. PROCEDIMIENTO: Transferir a un matraz aforado de 100 ml Completarel aforoconeterde petroleo Reposar 15 min luego agitar Agregar una pequeña cantidad de Na2SO4 Agregar 60 ml de ester de petroleo Lavar el residuo Agreagar 20 o 30 ml de acetona. Decantar Se extrae ensu totalidadel pigmento(usar el papel de filtroogasa) Homogenizacion Usar la licuadora triturar y agregar 60 ml de acetona por 3 min Pesar 1 g de muestra fresca La zanahoriadebe estarcortadao picada
  • 4. Para realizar la curva de calibración y el contenido de carotenos CUESTIONARIO: 1. Como influye la variación de longitud de onda en la medición de la absorbancia de los carotenos? 2. Si se varia la concentración inicial varia el contenido de carotenos en la muestra? 3. Que otros métodos se pueden realizar para la extracción de carotenos? 4. El éter de petróleo al ser el blanco como varia su absorbancia si se cambia de longitud de onda? Realizar los calculos correspondientes Realizar la curva de calibracion Determinar el contenido de carotenos Medir la absorbancia Usar el pespectofotometro a una longitud de onda de 645 nm Usar el pespectofotometro a una longitud de onda de 665 nm Realizar un blanco usando 10 ml de eter de petroleo y calibar el espectofotometro Curva de calibracion Contenidode carotenos Realizar diluciones de 1,3,5,7,9, ml en los tubos de ensayo •Completar harta 10 ml con eter de petroleo Tomar con una pipeta 2 ml de solucion patron y transferir a un tubo de ensayo •Completar hasta 10 ml con eter de petroleo