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Subido porIngrid Carboney
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FUNDAMENTOS DE LA PCR

La reacción en cadena de la polimerasa (PCR) es una técnica que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN a través de ciclos repetidos de copia fiel. Inventada en 1985 por Kary Mullis, la PCR utiliza una polimerasa termoestable para copiar un fragmento de ADN delimitado por cebadores, lo que permite su amplificación exponencial. La PCR tiene múltiples aplicaciones como la huella digital genética, pruebas de paternidad y detección de enfermedades hereditarias.

Ciencias◦
La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente. † Inventada en 1985 por KaryB.Mullis † Premio Nobel de Química, 1993
La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene de la bacteria Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas (79°C a 85°C), de ahí su nombre comercial mas conocido: taq polimerasa.
† DNA molde o templado: contiene la región que queremos amplificar. † Primers: Secuencias cortas de DNA (oligonucleótidos) que delimitan la zona que queremos amplificar. Deben ser complementarios a cada uno de los extremos de la región a amplificar. Se sintetizan in vitro de un modo preciso para que a partir de su región 3‟, la polimerasa inicie la síntesis en dirección correcta † Mezcla de los 4 deoxirribonucleótidos trifosfato que componen el DNA. † DNA Polimerasa: polimerasa capaz de resistir elevadas temperaturas (TaqPol) † Termocicladora: Una máquina que haga ciclos controlados de temperatura (Máquina de PCR, PCRra)
95° C 1 minuto 54° C 45 segundos 72° C 2 minutos
Al final de la PCR, para saber si la reacción transcurrió eficientemente, los ampliaciones son visualizados a través de una electroforesis en geles de agarosa.
PCR anidada En esta variante de PCR, el producto de una amplificación es utilizado como molde para realizar una segunda amplificación con iniciadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente específica
PCR múltiple. Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con mas de 2 primers, para amplificar varias regiones al mismo tiempo.
PCR in situ Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consiste en una reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se realiza para ello una primera amplificación del ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera puede detectarse cantidades pequeñísimas del material genético
PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR). Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de una transcriptasa inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc.  1.er paso: retrotranscripción a partir del ARN.  2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc.  3.er paso: PCR estándar.
La PCR cuantitativa o PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico PCR en tiempo real.
† Huella digital genética † Test de paternidad † Detección de enfermedades hereditarias † Comparación de la expresión génica † Clonamiento de genes † Análisis de ADN antiguo