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CETis No.62
Práctica No.2: Separación de
pigmentos vegetales mediante
cromatografía en papel.
Especialidad: Laboratorio clínico.
Asignatura: Bioquímica.
Profesora: Marta Gabriela Aceves
Morales.
Equipo No.5:
Moreno Vidal Manuel Alejandro.
Quintanilla Moreno Jennifer.
Razo Arredondo Ramón Emmanuel.
Romero Vázquez Leslie.
Vidal Ramírez Ramiro.
Grado y grupo: “6°E
OBJETIVO.
Extraer diferentes pigmentos, de productos vegetales, así como la identificación de
estos.
INTRODUCCIÓN.
Los colores de los alimentos se deben a distintos compuestos, principalmente
orgánicos, algunos que se producen durante su manejo y procesamiento y otros
que son pigmentos naturales o colorantes sintéticos o añadidos.
La mayoría de los alimentos vegetales y animales le deben su color a sus
correspondientes pigmentos, que son sustancias que tienen función biológica muy
importante en el tejido. Éste es el caso de la clorofila y la fotosíntesis y el de
mioglobina y al almacenamiento muscular del oxígeno, entre otros.
FUNDAMENTO.
Pigmentos.
Los pigmentos son moléculas que producen color. Estos pueden ser encontrados
en varios organismos que tienen células especializadas llamadas cromatóforos.
En el caso de los vegetales, los pigmentos pueden localizarse en diferentes
órganos celulares llamados plástidos. Estas moléculas pueden absorber ciertas
cantidades de onda y reflejar otras dependiendo de su estructura química.
Tipos.
Existen varios tipos de pigmentos vegetales que pueden ser encontrados en la
clorofila de las células de estas. Cada una de ellas contiene un color en específico
y estas también absorben cierta cantidad que les da el color. Como en el caso de
la xantofila, clorofila A, clorofila B y caroteno.
Caroteno: Es el pigmento que da la coloración amarilla clara. Estos ceden la
energía captada a la clorofila. Son moléculas de fotoprotección.
Xantofilas: Es el pigmento que da la coloración amarillenta como en el caso de las
hojas secas. Estas son compuestos que presentan características fotosintéticas y
son más resistentes a la oxidación.
Clorofila-A: Es el pigmento que da la coloración verde intensa como en el caso de
las plantas. Se encuentran en los cloroplastos y estas presentan características
fotosintéticas.
Clorofila-B: Es el pigmento que da la coloración verde que caracteriza a los plastos
de las algas verdes y sus predecesores terrenales. Todos los organismos que
contienen estos plastos son verdes.
Cromatografía.
La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de
mezclas complejas. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de
retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una
mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos
componentes.
La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas: Separar los componentes
de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente
y medir la proporción de los componentes de la mezcla.
MATERIALES.
-Mortero.
-Tijeras.
-Espinacas u hojas verdes.
-Betabel.
-Embudo con papel de filtro.
-Tubos de ensayo en gradilla.
-Éter etílico.
-Alcohol metílico puro (cuidado, sus vapores son muy tóxicos).
- Capsula de Petri o vaso de precipitados.
- Capilar o micropipeta (cuentagotas en su defecto).
-Tira de papel cromatográfico WHatmAN.
TÉCNICA.
1. Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas, quitando las
nervaduras más gruesas, junto con 10 o 15 cc de éter etílico.
2. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa
(utilizar campana de gases a lo largo de toda la práctica).
3. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es
suficiente con 2 o3 cc de solución de pigmentos).
4. Colocar en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura
de 0.5 a 1cm.
5. Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cm de anchura y unos 10 a 15 cm
de altura.
6. Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de
solución de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya
secándose el éter etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se
pondrán siempre en el mismo punto (se puede marcar con un lápiz), situado a
unos 2 cm por encima del borde inferior del papel.
7. Doblar el papel cromatográfico a lo largo y colocarlo en la placa de Petri con la
mancha de pigmento a 1 cm de la superficie del eluyente. Podemos sustituir la
placa Petri por un vaso de precipitados y fijar el papel cromatográfico con una
pinza a un soporte horizontal colocado en el borde del vaso (por ejemplo, una
varilla de vidrio).
8. Espera unos 30 minutos y observar.
9. Repite el mismo procedimiento con otro vegetal.
RESULTADOS.
El betabel es la sustancia más soluble, Pues se desplazó a mayor velocidad,
acompañando al disolvente a medida que este asciende.
Las espinas, son menos solubles, porque esta avanzo menos en la tira de papel
filtro.
Tiempo Espinacas Betabel
Inicio
10 Minutos
Transcurridos
20 Minutos
Transcurridos
30 Minutos
Transcurridos
Final
OBSERVACIONES.
Aspectos importantes para obtener buenos resultados:
 Era necesario machacar bien los pedazos tanto de betabel como de
espinacas para poder obtener una sustancia lo más homogénea posible y
con el mínimo de partículas sólidas que se pudiera.
 Al momento de colocar las gotas en el papel filtro debía hacerse con
cuidado de no exceder un tamaño, para no provocar que se hiciera una
mancha grande; así como de al momento de mover el papel para que se
secaran cuidar que la gota no fuera muy grande para evitar que se corriera.
 Cuando colocamos el papel sujeto a la pinza en el soporte para que este
estuviese dentro del cristalizador apenas tocando la sustancia, era
importante que este papel no estuviese en contacto con las paredes del
cristalizador así como de que no fuese mucho lo que se sumergía en el
líquido.
CONCLUSIONES.
La presente práctica nos permitió acercarnos al tema de la cromatografía en
papel, es uno de los métodos más usados, por lo cual es necesario aprender y
entender cómo realizarlo correctamente.
Al realizar la práctica, pudimos observar cómo los diferentes colorantes vegetales
de las espinacas y el betabel se separó, y con ello nos permitió identificar los
distintos componentes de cada uno de los pigmentos vegetales.
Muchas de las separaciones que se realizan en los laboratorios requieren de la
cromatografía, ya que son separaciones muy complejas de realizar. He ahí la
razón de su importancia.
Podemos concluir que nuestro objetivo planteado al inicio de la práctica se cumplió
en su totalidad, gracias a la realización correcta de cada paso y al entendimiento
de la práctica, dejándonos los resultados esperados.
CUESTIONARIO.
1.- La solubilidad en alcohol de los pigmentos es de mayor a menor:
Carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Indica que pigmento
corresponde a cada banda.
Banda con espinaca: El pigmento que le da su color es la Clorofila a.
Banda con betabel: El pigmento que le da color es uno llamado betacianina el cual
es un antioxidante y le da su color rojizo.
2.- ¿Por qué empleamos éter etílico para extraer la clorofila?
El éter etílico es un solvente orgánico por lo cual la clorofila tiene un alto nivel de
solubilidad en solventes orgánicos, esto nos lleva a que la clorofila se disolverá en
el éter creando una solución homogénea.
3.- ¿Qué pigmentos son más abundantes?
El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un color verde y verde
intenso.
También existen otros pigmentos como son los carotenos que dan un color
amarillo, y xantofilas que da color amarillo-anaranjado.
4.- Por encima de las clorofilas aparece más abundante una banda ¿Qué
significado tiene?
En nuestras bandas, el pigmento del betabel (betacianina) lo vimos expandirse
más en la banda que el pigmento de las espinacas (clorofila).
Esto quiere decir que el pigmento del betabel es más soluble en el solvente (éter
etílico) que la clorofila.
5.- Explica el proceso de separación por cromatografía en papel.
El papel que ocupamos estaba poroso, lo cual el alcohol subía por medio de
capilaridad. El color se expandía dependiendo al pigmento que tan soluble era en
el alcohol metílico, ya que al momento de subir el alcohol subía el color.
6.- Explica que es el beta-caroteno. ¿Cuáles son los beneficios de su
consumo?
El beta-caroteno es uno de los pigmentos de un grupo de pigmentos rojos,
anaranjados y amarillos llamados carotenoides. El beta-caroteno y otros
carotenoides proveen aproximadamente el 50% de la vitamina A.
Los beneficios de su consumo es que es eficaz para muchas cosas, como puede
ser:
 Un enfermedad ocular denominada Degeneración macular relacionada con
la edad.
 Cáncer de mama.
 Prevención de complicaciones de enfermedad pulmonar
 Etc.
BIBLIOGRAFÍA.
Fundamento.
- Título: UNAD. Tema: Pigmentos. Dirección:
http://datateca.unad.edu.co/contenidos/301203/301203/leccin_33_pigmento
s.html Fecha: 28/02/16
- Título: Prezi. Tema: Separación de pigmentos vegetales por cromatografía
sobre papel filtro. Dirección: https://prezi.com/5hwf_v0a7kd0/separacion-de-
pigmentos-vegetales-por-cromatografia-sobre-pa/ Fecha: 28/02/16
Cuestionario.
- Título: Yahoo. Tema: ¿Pigmentos hoja de espinaca? Link:
https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120514102537AALP
QdC Fecha: 29-Feb-16
- Título: Comida saludable. Tema: Las proteínas del betabel y sus beneficios.
Link: https://bellandpcinfografic.wordpress.com/2014/09/23/la-proteinas-del-
betabel-y-sus-beneficios/ Fecha: 29-Feb-16
- Título: Yahoo. Tema: ¿porque se usa éter etílico para extraer la clorofila?
Link:
https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20081008164344AARQ
vVW Fecha: 29-Feb-16
- Título: Plantas en secundaria. Tema: Pigmentos fotosintéticos. Link:
https://sites.google.com/site/plantasensecunadria/2o-eso/pigmentos--
fotosinteticos Fecha: 29-Feb-16
- Título: Medlineplus. Tema: Beta-caroteno. Link:
https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/druginfo/natural/999.html#Effe
ctiveness Fecha: 29-Feb-16.

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Práctica 2. separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía en papel

  • 1. CETis No.62 Práctica No.2: Separación de pigmentos vegetales mediante cromatografía en papel. Especialidad: Laboratorio clínico. Asignatura: Bioquímica. Profesora: Marta Gabriela Aceves Morales. Equipo No.5: Moreno Vidal Manuel Alejandro. Quintanilla Moreno Jennifer. Razo Arredondo Ramón Emmanuel. Romero Vázquez Leslie. Vidal Ramírez Ramiro. Grado y grupo: “6°E
  • 2. OBJETIVO. Extraer diferentes pigmentos, de productos vegetales, así como la identificación de estos. INTRODUCCIÓN. Los colores de los alimentos se deben a distintos compuestos, principalmente orgánicos, algunos que se producen durante su manejo y procesamiento y otros que son pigmentos naturales o colorantes sintéticos o añadidos. La mayoría de los alimentos vegetales y animales le deben su color a sus correspondientes pigmentos, que son sustancias que tienen función biológica muy importante en el tejido. Éste es el caso de la clorofila y la fotosíntesis y el de mioglobina y al almacenamiento muscular del oxígeno, entre otros. FUNDAMENTO. Pigmentos. Los pigmentos son moléculas que producen color. Estos pueden ser encontrados en varios organismos que tienen células especializadas llamadas cromatóforos. En el caso de los vegetales, los pigmentos pueden localizarse en diferentes órganos celulares llamados plástidos. Estas moléculas pueden absorber ciertas cantidades de onda y reflejar otras dependiendo de su estructura química. Tipos. Existen varios tipos de pigmentos vegetales que pueden ser encontrados en la clorofila de las células de estas. Cada una de ellas contiene un color en específico y estas también absorben cierta cantidad que les da el color. Como en el caso de la xantofila, clorofila A, clorofila B y caroteno. Caroteno: Es el pigmento que da la coloración amarilla clara. Estos ceden la energía captada a la clorofila. Son moléculas de fotoprotección. Xantofilas: Es el pigmento que da la coloración amarillenta como en el caso de las hojas secas. Estas son compuestos que presentan características fotosintéticas y son más resistentes a la oxidación. Clorofila-A: Es el pigmento que da la coloración verde intensa como en el caso de las plantas. Se encuentran en los cloroplastos y estas presentan características fotosintéticas.
  • 3. Clorofila-B: Es el pigmento que da la coloración verde que caracteriza a los plastos de las algas verdes y sus predecesores terrenales. Todos los organismos que contienen estos plastos son verdes. Cromatografía. La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas. Es un conjunto de técnicas basadas en el principio de retención selectiva, cuyo objetivo es separar los distintos componentes de una mezcla, permitiendo identificar y determinar las cantidades de dichos componentes. La cromatografía puede cumplir dos funciones básicas: Separar los componentes de la mezcla, para obtenerlos más puros y que puedan ser usados posteriormente y medir la proporción de los componentes de la mezcla. MATERIALES. -Mortero. -Tijeras.
  • 4. -Espinacas u hojas verdes. -Betabel. -Embudo con papel de filtro. -Tubos de ensayo en gradilla.
  • 5. -Éter etílico. -Alcohol metílico puro (cuidado, sus vapores son muy tóxicos). - Capsula de Petri o vaso de precipitados. - Capilar o micropipeta (cuentagotas en su defecto).
  • 6. -Tira de papel cromatográfico WHatmAN. TÉCNICA. 1. Colocar en un mortero trozos de hojas de espinacas lavadas, quitando las nervaduras más gruesas, junto con 10 o 15 cc de éter etílico. 2. Triturar sin golpear hasta que el líquido adquiera una coloración verde intensa (utilizar campana de gases a lo largo de toda la práctica). 3. Filtrar en un embudo con papel de filtro y recoger en un tubo de ensayo (es suficiente con 2 o3 cc de solución de pigmentos). 4. Colocar en la tapadera de una caja de Petri metanol absoluto hasta una altura de 0.5 a 1cm. 5. Cortar una tira de papel de filtro de unos 8 cm de anchura y unos 10 a 15 cm de altura. 6. Poner con el capilar en el papel de cromatografía entre 5 y 10 gotas de solución de pigmentos, espaciadas en el tiempo con el fin de que vaya secándose el éter etílico y aumente la cantidad de pigmentos. Las gotas se pondrán siempre en el mismo punto (se puede marcar con un lápiz), situado a unos 2 cm por encima del borde inferior del papel. 7. Doblar el papel cromatográfico a lo largo y colocarlo en la placa de Petri con la mancha de pigmento a 1 cm de la superficie del eluyente. Podemos sustituir la placa Petri por un vaso de precipitados y fijar el papel cromatográfico con una pinza a un soporte horizontal colocado en el borde del vaso (por ejemplo, una varilla de vidrio). 8. Espera unos 30 minutos y observar. 9. Repite el mismo procedimiento con otro vegetal. RESULTADOS. El betabel es la sustancia más soluble, Pues se desplazó a mayor velocidad, acompañando al disolvente a medida que este asciende.
  • 7. Las espinas, son menos solubles, porque esta avanzo menos en la tira de papel filtro. Tiempo Espinacas Betabel Inicio 10 Minutos Transcurridos 20 Minutos Transcurridos 30 Minutos Transcurridos Final
  • 8. OBSERVACIONES. Aspectos importantes para obtener buenos resultados:  Era necesario machacar bien los pedazos tanto de betabel como de espinacas para poder obtener una sustancia lo más homogénea posible y con el mínimo de partículas sólidas que se pudiera.  Al momento de colocar las gotas en el papel filtro debía hacerse con cuidado de no exceder un tamaño, para no provocar que se hiciera una mancha grande; así como de al momento de mover el papel para que se secaran cuidar que la gota no fuera muy grande para evitar que se corriera.  Cuando colocamos el papel sujeto a la pinza en el soporte para que este estuviese dentro del cristalizador apenas tocando la sustancia, era importante que este papel no estuviese en contacto con las paredes del cristalizador así como de que no fuese mucho lo que se sumergía en el líquido. CONCLUSIONES. La presente práctica nos permitió acercarnos al tema de la cromatografía en papel, es uno de los métodos más usados, por lo cual es necesario aprender y entender cómo realizarlo correctamente. Al realizar la práctica, pudimos observar cómo los diferentes colorantes vegetales de las espinacas y el betabel se separó, y con ello nos permitió identificar los distintos componentes de cada uno de los pigmentos vegetales. Muchas de las separaciones que se realizan en los laboratorios requieren de la cromatografía, ya que son separaciones muy complejas de realizar. He ahí la razón de su importancia. Podemos concluir que nuestro objetivo planteado al inicio de la práctica se cumplió en su totalidad, gracias a la realización correcta de cada paso y al entendimiento de la práctica, dejándonos los resultados esperados. CUESTIONARIO. 1.- La solubilidad en alcohol de los pigmentos es de mayor a menor: Carotenos, clorofila a, clorofila b y xantofila. Indica que pigmento corresponde a cada banda. Banda con espinaca: El pigmento que le da su color es la Clorofila a. Banda con betabel: El pigmento que le da color es uno llamado betacianina el cual es un antioxidante y le da su color rojizo.
  • 9. 2.- ¿Por qué empleamos éter etílico para extraer la clorofila? El éter etílico es un solvente orgánico por lo cual la clorofila tiene un alto nivel de solubilidad en solventes orgánicos, esto nos lleva a que la clorofila se disolverá en el éter creando una solución homogénea. 3.- ¿Qué pigmentos son más abundantes? El pigmento más abundante es la clorofila, la cual da un color verde y verde intenso. También existen otros pigmentos como son los carotenos que dan un color amarillo, y xantofilas que da color amarillo-anaranjado. 4.- Por encima de las clorofilas aparece más abundante una banda ¿Qué significado tiene? En nuestras bandas, el pigmento del betabel (betacianina) lo vimos expandirse más en la banda que el pigmento de las espinacas (clorofila). Esto quiere decir que el pigmento del betabel es más soluble en el solvente (éter etílico) que la clorofila. 5.- Explica el proceso de separación por cromatografía en papel. El papel que ocupamos estaba poroso, lo cual el alcohol subía por medio de capilaridad. El color se expandía dependiendo al pigmento que tan soluble era en el alcohol metílico, ya que al momento de subir el alcohol subía el color. 6.- Explica que es el beta-caroteno. ¿Cuáles son los beneficios de su consumo? El beta-caroteno es uno de los pigmentos de un grupo de pigmentos rojos, anaranjados y amarillos llamados carotenoides. El beta-caroteno y otros carotenoides proveen aproximadamente el 50% de la vitamina A. Los beneficios de su consumo es que es eficaz para muchas cosas, como puede ser:  Un enfermedad ocular denominada Degeneración macular relacionada con la edad.  Cáncer de mama.  Prevención de complicaciones de enfermedad pulmonar  Etc.
  • 10. BIBLIOGRAFÍA. Fundamento. - Título: UNAD. Tema: Pigmentos. Dirección: http://datateca.unad.edu.co/contenidos/301203/301203/leccin_33_pigmento s.html Fecha: 28/02/16 - Título: Prezi. Tema: Separación de pigmentos vegetales por cromatografía sobre papel filtro. Dirección: https://prezi.com/5hwf_v0a7kd0/separacion-de- pigmentos-vegetales-por-cromatografia-sobre-pa/ Fecha: 28/02/16 Cuestionario. - Título: Yahoo. Tema: ¿Pigmentos hoja de espinaca? Link: https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20120514102537AALP QdC Fecha: 29-Feb-16 - Título: Comida saludable. Tema: Las proteínas del betabel y sus beneficios. Link: https://bellandpcinfografic.wordpress.com/2014/09/23/la-proteinas-del- betabel-y-sus-beneficios/ Fecha: 29-Feb-16 - Título: Yahoo. Tema: ¿porque se usa éter etílico para extraer la clorofila? Link: https://mx.answers.yahoo.com/question/index?qid=20081008164344AARQ vVW Fecha: 29-Feb-16 - Título: Plantas en secundaria. Tema: Pigmentos fotosintéticos. Link: https://sites.google.com/site/plantasensecunadria/2o-eso/pigmentos-- fotosinteticos Fecha: 29-Feb-16 - Título: Medlineplus. Tema: Beta-caroteno. Link: https://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/druginfo/natural/999.html#Effe ctiveness Fecha: 29-Feb-16.