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This article is about the genetic manipulation that humans can do to the genome, and improve  some characteristics of the cell, for example, here they show us how manipulating de genetic material, specific the histones ( proteins that suport and fold the DNA)  the anticancer drugs could improve  treatment of this illness.
This studio wanted to show how from a selective inhibition on the HDAC6 through some anticancer drugs, in the cellular cycle is going to increase the apoptosis above cancer cells.
Basic protein responsible in the formation of the chromatin with the DNA Involved in removing acetyl groups from lysine residues on histones. Set of changes in the DNA molecule leading to alterations in the replication and transcription Group of diseases characterized by uncontrolled cell division leading to growth of abnormal tissue.
Células HFS:  Fibroblastos del prepucio humano (the Yale Skin Diseases Research Center Core). LNCaP:   células humanas derivadas de adenocarcinoma de próstata, extraídas del ganglio linfático supraclavicular izquierdo. PC3:   célula del cancer de próstata, tiene alto potencial metastásico. MCF-7:  es una célula característica del cáncer de seno.
Las células se trataron con Doxorubicina y  etoposida, MS-275 , Tubacina y nil-tubacina, DMSO( dimetil sulfoxido) que se utilizó como medio de control. Celulas cancerigenas Agente químico Incuban de 24 – 48h
Separación de proteinas por electroforesis en un gel (SDS-PAGE), que posteriormente se pasan a un filtro con anticuerpos que reaccionan con la proteina de interés y son reveladas.  Los anticuerpos usados fueron HDAC6, HDAC1, HDAC3, tubulina   alfa   acetilada, alfa tubulina,  γ H2AX, H2AX, Phospho CHK2, DDIT3
Células cancerígenas 1 x 10 a la 6  2.Se lavan con PBS y lisan con una sln buffer (Tris, KCl… e inhibidores de proteasas 3. Se centrifugan a 600 rpm/ 5 min a 4ºC 4. el aglomerulado  se resuspende en una solucion  TE 5. Se centrifugans a 600 rpm/5 min a 4ºC 6.El aglomerulado se resuspendio en una solucion  0.2 M H2S04,  seguidas por la incubacion en hielo por una hora, haciendo vortex cada 15 min por 10s . 7. Centrifugar a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 8.El sobrenadante se incuba con acetona fría por almenos 1 hora. 9. Las muestras fueron centrifugadas  a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 10. Los granulos se secan y se  resuspenden en agua destilada.
Es una molécula de RNA que suprime la expresión de genes específicos mediante mecanismos conocidos globalmente como ribointerferencia o interferencia por ARN
Basada  en hibridación de hebras  complementarias de ADN. Obtener información sobre el comportamiento transcripcional de genes o sobre la composición genómica del organismo en estudio.  Involucra la adhesión o “impresión ”de secuencias de ADN sobre un soporte sólido “sonda ”.
Los procesos de amplificación y de detección se realizan simultáneamente. Menor contaminación. Identificación y cuantificación de agentes infecciosos. Se  puede cuantificar la cantidad de ADN producido
 
Figura 1. El tubacin produce daño en la tubulina, pero no en las histonas en células HFS.
Figura 2. El tubacin produce daño en la tubulina, pero NO en las histonas en células LNCaP
Figura 3. Efecto de shRNA en diferentes dominios sobre la expresión de histonas
Figura 4. Degradación de PARP en células LNCaP. 4A. Con tubacin, SAHA o ambos. 4B. Con tubacin, etopocido o ambos.
Figura 5. Acumulación de H2AX y pChk2, como evidencia de la degradación de HDAC 6, mejorada por agentes químicos.
Figura 6. Aparición de DDIT3, podría conribuir a mejorar el efecto quimiosensibilizante de la célula LNCaP.
Ropero S, Esteller M (2007 Mol Oncol ) The role of histone deacetylases (HDACs) in human cancer. yes Martínez-López W, Folle GA, Obe G, Jeppesen P (2001) Chromosome regions enriched in hyperacetylated histone H4 are preferred sites for endonuclease- and radiationinduced breakpoints.  yes Munshi A, et al. (2005) Histone deacetylase inhibitors radiosensitize human melanoma cells by suppressing DNA repair activity.  yes Kawaguchi Y, et al. (2003) The deacetylase HDAC6 regulates aggresome formation and cell viability in response to misfolded protein stress. Yes
The Quantitative real time PCR and Western blot analysis  are very important studies that provide and support protein information to diagnose genetic abnormalities that produce pathologies, like cancer. We concluded that the HDAC6 inhibition increased the chemo sensitizing effect in transformed cells to anticancer agents (drugs).
This article is important to implement even more different methods of genetic manipulation, that  could gave us the possibility to create effective techniques that improve the recovery hope of the patients that development cancer  and an efficient treatment for them. This article gave us more information about the uses of the molecular biology in medicine, and the importance of knowledge about the cell and the mechanisms that it use to maintain us health, because based on that cell normal mechanisms, we can manipulate and create different treatments and investigations.
 
 
Martínez, L. Biología Molecular. Ed. UPB. Medellín. 2011.  Lhttp://www.google.com/imgres?imgurl=http://www.piercenet.com/media/fig1profound.gif&imgrefurl=http://microvirology.blogspot.com/2009/02/methods-of-studying-viruses.html&usg=__irI-EfPzYL4FQdTRn0GgObAW2j0=&h=375&w=550&sz=44&hl=es&start=0&zoom=1&tbnid=yuEu7sRHSSpoYM:&tbnh=144&tbnw=211&ei=fKxpTem-MomEtgeFmPznAw&prev=/images%3Fq%3Dwestern%2Bblot%2Bdiagrama%2Banalysis%2Bof%2Bprotein%26um%3D1%26hl%3Des%26gbv%3D2%26biw%3D1280%26bih%3D656%26tbs%3Disch:1&um=1&itbs=1&iact=hc&vpx =138&vpy=278&dur=2175&hovh=185&hovw=272&tx=192&ty=101&oei=fKxpTem-MomEtgeFmPznAw&page=1&ndsp=15&ved=1t:429,r:5,s:0 http://virology-mania.blogspot.com/
 

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Seminario presentacion3

  • 1.  
  • 2. This article is about the genetic manipulation that humans can do to the genome, and improve some characteristics of the cell, for example, here they show us how manipulating de genetic material, specific the histones ( proteins that suport and fold the DNA) the anticancer drugs could improve treatment of this illness.
  • 3. This studio wanted to show how from a selective inhibition on the HDAC6 through some anticancer drugs, in the cellular cycle is going to increase the apoptosis above cancer cells.
  • 4. Basic protein responsible in the formation of the chromatin with the DNA Involved in removing acetyl groups from lysine residues on histones. Set of changes in the DNA molecule leading to alterations in the replication and transcription Group of diseases characterized by uncontrolled cell division leading to growth of abnormal tissue.
  • 5. Células HFS: Fibroblastos del prepucio humano (the Yale Skin Diseases Research Center Core). LNCaP: células humanas derivadas de adenocarcinoma de próstata, extraídas del ganglio linfático supraclavicular izquierdo. PC3: célula del cancer de próstata, tiene alto potencial metastásico. MCF-7: es una célula característica del cáncer de seno.
  • 6. Las células se trataron con Doxorubicina y etoposida, MS-275 , Tubacina y nil-tubacina, DMSO( dimetil sulfoxido) que se utilizó como medio de control. Celulas cancerigenas Agente químico Incuban de 24 – 48h
  • 7. Separación de proteinas por electroforesis en un gel (SDS-PAGE), que posteriormente se pasan a un filtro con anticuerpos que reaccionan con la proteina de interés y son reveladas. Los anticuerpos usados fueron HDAC6, HDAC1, HDAC3, tubulina alfa acetilada, alfa tubulina, γ H2AX, H2AX, Phospho CHK2, DDIT3
  • 8. Células cancerígenas 1 x 10 a la 6 2.Se lavan con PBS y lisan con una sln buffer (Tris, KCl… e inhibidores de proteasas 3. Se centrifugan a 600 rpm/ 5 min a 4ºC 4. el aglomerulado se resuspende en una solucion TE 5. Se centrifugans a 600 rpm/5 min a 4ºC 6.El aglomerulado se resuspendio en una solucion 0.2 M H2S04, seguidas por la incubacion en hielo por una hora, haciendo vortex cada 15 min por 10s . 7. Centrifugar a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 8.El sobrenadante se incuba con acetona fría por almenos 1 hora. 9. Las muestras fueron centrifugadas a 10.000 rpm/ 10 min a 4ºC 10. Los granulos se secan y se resuspenden en agua destilada.
  • 9. Es una molécula de RNA que suprime la expresión de genes específicos mediante mecanismos conocidos globalmente como ribointerferencia o interferencia por ARN
  • 10. Basada en hibridación de hebras complementarias de ADN. Obtener información sobre el comportamiento transcripcional de genes o sobre la composición genómica del organismo en estudio. Involucra la adhesión o “impresión ”de secuencias de ADN sobre un soporte sólido “sonda ”.
  • 11. Los procesos de amplificación y de detección se realizan simultáneamente. Menor contaminación. Identificación y cuantificación de agentes infecciosos. Se puede cuantificar la cantidad de ADN producido
  • 12.  
  • 13. Figura 1. El tubacin produce daño en la tubulina, pero no en las histonas en células HFS.
  • 14. Figura 2. El tubacin produce daño en la tubulina, pero NO en las histonas en células LNCaP
  • 15. Figura 3. Efecto de shRNA en diferentes dominios sobre la expresión de histonas
  • 16. Figura 4. Degradación de PARP en células LNCaP. 4A. Con tubacin, SAHA o ambos. 4B. Con tubacin, etopocido o ambos.
  • 17. Figura 5. Acumulación de H2AX y pChk2, como evidencia de la degradación de HDAC 6, mejorada por agentes químicos.
  • 18. Figura 6. Aparición de DDIT3, podría conribuir a mejorar el efecto quimiosensibilizante de la célula LNCaP.
  • 19. Ropero S, Esteller M (2007 Mol Oncol ) The role of histone deacetylases (HDACs) in human cancer. yes Martínez-López W, Folle GA, Obe G, Jeppesen P (2001) Chromosome regions enriched in hyperacetylated histone H4 are preferred sites for endonuclease- and radiationinduced breakpoints. yes Munshi A, et al. (2005) Histone deacetylase inhibitors radiosensitize human melanoma cells by suppressing DNA repair activity. yes Kawaguchi Y, et al. (2003) The deacetylase HDAC6 regulates aggresome formation and cell viability in response to misfolded protein stress. Yes
  • 20. The Quantitative real time PCR and Western blot analysis  are very important studies that provide and support protein information to diagnose genetic abnormalities that produce pathologies, like cancer. We concluded that the HDAC6 inhibition increased the chemo sensitizing effect in transformed cells to anticancer agents (drugs).
  • 21. This article is important to implement even more different methods of genetic manipulation, that could gave us the possibility to create effective techniques that improve the recovery hope of the patients that development cancer and an efficient treatment for them. This article gave us more information about the uses of the molecular biology in medicine, and the importance of knowledge about the cell and the mechanisms that it use to maintain us health, because based on that cell normal mechanisms, we can manipulate and create different treatments and investigations.
  • 22.  
  • 23.  
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