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MÉTODOS INMUNOLÓGICOS
DOCENTE: Blog. Santos Evaristo Chozo Inoñán.
ESTUDIANTES: Angélica Fabiana Rivera Leo .
SISTEMA INMUNOLOGICO
▪ Esta compuesto por células y proteínas.
FUNCIÓN:
La función del sistema inmunológico es mantener los microorganismos
infecciosos (agentes patógenos) como determinadas bacterias, virus,
hongos, parásitos, células tumorales fuera de nuestro cuerpo y destruir
cualquier microorganismo infeccioso que logre invadir nuestro
organismo.
Cualquier agente considerado extraño por un sistema inmunológico se
denomina ANTIGENO y los que protegen se denominan
ANTICUERPOS.
ANTÍÍGENO (Ag):e:esuna susttanciaiaque desencadenalalafforrmmaacióiónd
e
an
tt
ic
icue
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p
pos yp
puede causar unarr
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ita
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..
ANTICUERPO (Ac):
También conocidos como inmunoglobulinas, son un grupo de moléculas
séricas que producen los linfocitos B.
• Inmunoglobulinas G (IgG): Se forman en grandes cantidades y
pueden viajar del fluido sanguíneo a los tejidos. Estas
inmunoglobulinas (anticuerpos) son la única clase que cruza la
placenta y le pasa inmunidad de la madre al recién nacido.
•
•
•
Inmunoglobulinas A (IgA): Se producen cerca de las
membranas mucosas y llegan hasta secreciones como las
lágrimas, bilis, saliva, mucosa, donde protegen contra
infecciones en el tracto respiratorio y los intestinos.
Inmunoglobulinas M (IgM): Son los primeros anticuerpos que
se forman en respuesta a las infecciones y por lo tanto son
importantes para proteger durante los primeros días de una
infección.
Inmunoglobulinas E (IgE): Se encargan de reacciones alérgicas.
Principales clases de anticuerpos o
gammaglobulinas:
TECNICAS INMUNOLOGICAS
Los antígenos presentes en los tejidos y líquidos biológicos
se pueden detectar y cuantificar mediante muchas técnicas
inmunológicas basadas en la extraordinaria especificidad
de las reacciones antígeno-anticuerpo.
Existen diversos métodos basados en procedimientos
distintos para visualizar la unión Ag-Ac . Así tenemos:
1. Técnicas de aglutinación Cuando el antígenos e
encuentra unido o formando parte de células, bacterias o
partículas, la reacción Ag-Ac se puede detectar y cuantificar
por el aglutinado celular o bacteriano formado.
AGLUTINACION
Son útiles para la detección de antígenos y
anticuerpos. Su fundamento es inducir una agrupación
microscópicamente visible de partículas, causada por
interacciones antígeno anticuerpo que forman
puentes entre ellas. Existen varios tipos de
aglutinación en donde se destacan:
❖AGLUTINACION ACTIVA-: anticuerpos dirigidos
contra componentes de las partículas (eritrocitos,
bacterias). - Un ejemplo de este caso es la
determinación de grupos sanguíneos.
❖AGLUTINACION PASIVA: los anticuerpos se dirigen
contra moléculas que se han adherido
intencionalmente a una partícula que actúa como
medio de soporte pasivo (látex). Una variante es la
aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se
detecta es el antígeno y las partículas están
recubiertas por el anticuerpo.
2. Técnicas de fluorescencia y citometría de flujo. Para la realización
de estas técnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectándose la
formación del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida.
CITOMETRIA DE FLUJO
•Es una técnica de análisis celular que implica medir las características de
dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace
pasar a través de un rayo de luz. Para su análisis por citometría de flujo, las
células deben encontrarse individualmente en suspensión en un fluido.
INMUNOFLUORESCENCIA
Es una técnica utilizada para visualizar la distribución de una proteína o antígeno
específico en células o secciones de tejidos utilizando la especificidad de los
anticuerpos por su antígeno para dirigir marcadores fluorescentes a las
biomoléculas dianas de forma específica.
❑INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA:
El marcaje directo en el que el anticuerpo primario está marcado con marcador
fluorescente.
❑INMUNOFLUORESCENTE INDIRECTA:
El marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado con un
fluorcromo se utiliza ara reconocer un anticuerpo primario.
NOTA: Las muestras marcadas inmunofluorescencia se examinan bajo un
microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal.
TECNICAS IMDX.2.pptx
3. Técnicas de radioinmunoensayo. En estas técnicas al anticuerpo se une un
isótopo radiactivo siendo posible la cuantificación del complejo Ag-Ac a través de la
radiactividad emitida.
RADIO INMUNOENSAYO
•El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radioimmunoassay) es un método
radioinmunométrico que se basa en la formación específica de los complejos Antígeno-
Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad unido a la sensibilidad de los
métodos radiológicos. La técnica ha sido prácticamente reemplazada por el método ELISA el
cual mide la unión Ag-Ac mediante colorimetrías en lugar de radiometrías
4. Cromatografía de afinidad. La especificidad de la unión
Ag-Ac puede utilizarse para obtener Acs y Ags puros.
PRUEBA ELISA
Es una técnica de inmunoensayo
en la cual un antígeno
inmovilizado se detecta
mediante un anticuerpo
enlazado a un enzima capaz de
generar un producto detectable
como cambio de color o algún
otro tipo.
La interacción antígeno-
anticuerpo en el laboratorio
puede ser utilizada para
determinar si un paciente tiene
una infección o una enfermedad
autoinmune.
NEFELOMETRIA
La nefelometría es un
procedimiento analítico que se basa
en la dispersión de la radiación que
atraviesan las partículas de materia.
Cuando la luz atraviesa un medio
transparente en el que existe una
suspensión de partículas sólidas, se
dispersa en todas direcciones y
como consecuencia se observa
turbia. La dispersión no supone la
pérdida neta de potencia radiante,
solo es afectada la dirección de la
propagación, porque la intensidad
de la radiación es la misma en
cualquier ángulo..
5. Inmunoprecipitación e inmunoblotting. Permite
detectar la presencia y cantidad de antígenos y anticuerpos
específicos.
INMUNOBLOT
•El Inmunoblot o Western blot es una técnica mediante la cual se
separan proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida y
después se transfieren electroforéticamente a un papel de
nitrocelulosa o una membrana similar, donde son detectadas con
anticuerpos que reconocen los antígenos que hay en ellas.
BIBLIOGRAFIA:
✓http://mesa54dinmuno.blogspot.pe/2009/05/tecnicas-
inmunologicas.html
✓http://es.slideshare.net/AnclesPerez/prueba-ifat-
inmunofluorescencia-directa-e-indirecta
✓https://www.youtube.com/watch?v=lQhMST2XFqg
✓http://educativa.catedu.es/44700165/aula/archivos/repositorio//32
50/3413/html/21_estructura_y_clases_de_anticuerpos.html
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  • 2. SISTEMA INMUNOLOGICO ▪ Esta compuesto por células y proteínas. FUNCIÓN: La función del sistema inmunológico es mantener los microorganismos infecciosos (agentes patógenos) como determinadas bacterias, virus, hongos, parásitos, células tumorales fuera de nuestro cuerpo y destruir cualquier microorganismo infeccioso que logre invadir nuestro organismo. Cualquier agente considerado extraño por un sistema inmunológico se denomina ANTIGENO y los que protegen se denominan ANTICUERPOS.
  • 3. ANTÍÍGENO (Ag):e:esuna susttanciaiaque desencadenalalafforrmmaacióiónd e an tt ic icue rr p pos yp puede causar unarr eespues ttain in m m u un it ita rr ia ia ..
  • 4. ANTICUERPO (Ac): También conocidos como inmunoglobulinas, son un grupo de moléculas séricas que producen los linfocitos B.
  • 5. • Inmunoglobulinas G (IgG): Se forman en grandes cantidades y pueden viajar del fluido sanguíneo a los tejidos. Estas inmunoglobulinas (anticuerpos) son la única clase que cruza la placenta y le pasa inmunidad de la madre al recién nacido. • • • Inmunoglobulinas A (IgA): Se producen cerca de las membranas mucosas y llegan hasta secreciones como las lágrimas, bilis, saliva, mucosa, donde protegen contra infecciones en el tracto respiratorio y los intestinos. Inmunoglobulinas M (IgM): Son los primeros anticuerpos que se forman en respuesta a las infecciones y por lo tanto son importantes para proteger durante los primeros días de una infección. Inmunoglobulinas E (IgE): Se encargan de reacciones alérgicas. Principales clases de anticuerpos o gammaglobulinas:
  • 6. TECNICAS INMUNOLOGICAS Los antígenos presentes en los tejidos y líquidos biológicos se pueden detectar y cuantificar mediante muchas técnicas inmunológicas basadas en la extraordinaria especificidad de las reacciones antígeno-anticuerpo. Existen diversos métodos basados en procedimientos distintos para visualizar la unión Ag-Ac . Así tenemos: 1. Técnicas de aglutinación Cuando el antígenos e encuentra unido o formando parte de células, bacterias o partículas, la reacción Ag-Ac se puede detectar y cuantificar por el aglutinado celular o bacteriano formado.
  • 7. AGLUTINACION Son útiles para la detección de antígenos y anticuerpos. Su fundamento es inducir una agrupación microscópicamente visible de partículas, causada por interacciones antígeno anticuerpo que forman puentes entre ellas. Existen varios tipos de aglutinación en donde se destacan: ❖AGLUTINACION ACTIVA-: anticuerpos dirigidos contra componentes de las partículas (eritrocitos, bacterias). - Un ejemplo de este caso es la determinación de grupos sanguíneos. ❖AGLUTINACION PASIVA: los anticuerpos se dirigen contra moléculas que se han adherido intencionalmente a una partícula que actúa como medio de soporte pasivo (látex). Una variante es la aglutinación pasiva reversa, en donde lo que se detecta es el antígeno y las partículas están recubiertas por el anticuerpo.
  • 8. 2. Técnicas de fluorescencia y citometría de flujo. Para la realización de estas técnicas el anticuerpo se marca con un fluorocromo detectándose la formación del complejo Ag-Ac por la fluorescencia emitida. CITOMETRIA DE FLUJO •Es una técnica de análisis celular que implica medir las características de dispersión de luz y fluorescencia que poseen las células conforme se las hace pasar a través de un rayo de luz. Para su análisis por citometría de flujo, las células deben encontrarse individualmente en suspensión en un fluido.
  • 9. INMUNOFLUORESCENCIA Es una técnica utilizada para visualizar la distribución de una proteína o antígeno específico en células o secciones de tejidos utilizando la especificidad de los anticuerpos por su antígeno para dirigir marcadores fluorescentes a las biomoléculas dianas de forma específica. ❑INMUNOFLUORESCENCIA DIRECTA: El marcaje directo en el que el anticuerpo primario está marcado con marcador fluorescente. ❑INMUNOFLUORESCENTE INDIRECTA: El marcaje indirecto en el que un anticuerpo secundario marcado con un fluorcromo se utiliza ara reconocer un anticuerpo primario. NOTA: Las muestras marcadas inmunofluorescencia se examinan bajo un microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal.
  • 11. 3. Técnicas de radioinmunoensayo. En estas técnicas al anticuerpo se une un isótopo radiactivo siendo posible la cuantificación del complejo Ag-Ac a través de la radiactividad emitida. RADIO INMUNOENSAYO •El Radioinmunoensayo (o abreviado RIA del inglés Radioimmunoassay) es un método radioinmunométrico que se basa en la formación específica de los complejos Antígeno- Anticuerpo (Ag-Ac) lo que le dota de una gran especificidad unido a la sensibilidad de los métodos radiológicos. La técnica ha sido prácticamente reemplazada por el método ELISA el cual mide la unión Ag-Ac mediante colorimetrías en lugar de radiometrías
  • 12. 4. Cromatografía de afinidad. La especificidad de la unión Ag-Ac puede utilizarse para obtener Acs y Ags puros. PRUEBA ELISA Es una técnica de inmunoensayo en la cual un antígeno inmovilizado se detecta mediante un anticuerpo enlazado a un enzima capaz de generar un producto detectable como cambio de color o algún otro tipo. La interacción antígeno- anticuerpo en el laboratorio puede ser utilizada para determinar si un paciente tiene una infección o una enfermedad autoinmune.
  • 13. NEFELOMETRIA La nefelometría es un procedimiento analítico que se basa en la dispersión de la radiación que atraviesan las partículas de materia. Cuando la luz atraviesa un medio transparente en el que existe una suspensión de partículas sólidas, se dispersa en todas direcciones y como consecuencia se observa turbia. La dispersión no supone la pérdida neta de potencia radiante, solo es afectada la dirección de la propagación, porque la intensidad de la radiación es la misma en cualquier ángulo..
  • 14. 5. Inmunoprecipitación e inmunoblotting. Permite detectar la presencia y cantidad de antígenos y anticuerpos específicos. INMUNOBLOT •El Inmunoblot o Western blot es una técnica mediante la cual se separan proteínas por electroforesis en gel de poliacrilamida y después se transfieren electroforéticamente a un papel de nitrocelulosa o una membrana similar, donde son detectadas con anticuerpos que reconocen los antígenos que hay en ellas.