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 OBTENCIÓN DE MUESTRAS
 FIJACIÓN
 DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO
 INCLUSIÓN
 CORTE
 MONTAJE
TINCIÓN DE LOS CORTES
PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICAPASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
 OBTENCIÓN DE MUESTRASOBTENCIÓN DE MUESTRAS
Todas las muestras de tejido, ya seaTodas las muestras de tejido, ya sea
obtenidas de materiales quirúrgicos,obtenidas de materiales quirúrgicos,
necropsias, biopsias deben ser procesadasnecropsias, biopsias deben ser procesadas
adecuadamente para obtener buenosadecuadamente para obtener buenos
cortes histológicos.cortes histológicos.
Se debe obtener toda laSe debe obtener toda la
información posible delinformación posible del
material a procesar.material a procesar.
 OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
En caso de ser necesario se debe realizarEn caso de ser necesario se debe realizar
un examen y descripción preliminar de losun examen y descripción preliminar de los
materiales y su adecuación para unmateriales y su adecuación para un
correcto procesamiento.correcto procesamiento.
 OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
 OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
 FIJACIÓNFIJACIÓN
Tratamiento del tejido con sustancias
químicas que no solo retardan las alteraciones
hísticas posteriores a la muerte, sino que
conservan la configuración normal del tejido.
Fijador:Fijador:
Sustancia que detiene en forma rápida los
procesos de autólisis y que, al mismo tiempo,
conserva los tejidos, en lo posible, en el estado
en que se encontraban en la vida.
 FIJACIÓNFIJACIÓN
 Desecación:Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.Extendidos, líquidos de punciones.
 Calor seco:Calor seco: Bacteriología.Bacteriología.
 Calor húmedo:Calor húmedo: Microquímica, Zoología.Microquímica, Zoología.
 Frío:Frío: No es una verdadera fijación. Detiene losNo es una verdadera fijación. Detiene los
procesos de autólisis y necrosis, pero cuando dejaprocesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja
de actuar los mismos se reanudan.de actuar los mismos se reanudan.
TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES
Físicos:
 FIJACIÓNFIJACIÓN
 Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .(no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .
 MercurialesMercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).
 AlcoholesAlcoholes (precipitan proteínas)(precipitan proteínas)..
 Agentes oxidantesAgentes oxidantes (precipitan proteínas(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).y tóxico por sus vapores).
 PicratosPicratos (precipitan proteínas).(precipitan proteínas).
Químicos:
TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES
 FIJACIÓNFIJACIÓN
 AldehídosAldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más(formaldehido/glutaraldehido): Son los más
utilizados. Los tejidos son fijados por unionesutilizados. Los tejidos son fijados por uniones
cruzadas en las proteínas, al reaccionar con loscruzadas en las proteínas, al reaccionar con los
grupos amino.grupos amino.
La Formalina (formaldehido al 40%), se utilizaLa Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza
normalmente al 10%, en una solución bufferada.normalmente al 10%, en una solución bufferada.
TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES
Químicos:
 FIJACIÓNFIJACIÓN
 FIJACIÓNFIJACIÓN
Un defecto de fijación noUn defecto de fijación no
puede ser subsanado.puede ser subsanado.
Es inútil hacer un estudioEs inútil hacer un estudio
histológico de un materialhistológico de un material
mal fijado.mal fijado.
No debe olvidarse que:No debe olvidarse que:
 FIJACIÓNFIJACIÓN
 DESHIDRATACIÓNDESHIDRATACIÓN
Se obtiene por medio de un reactivo anhidroSe obtiene por medio de un reactivo anhidro
pero ávido de agua:pero ávido de agua:
Alcohol Etílico.Alcohol Etílico.
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Alcohol Butílico.Alcohol Butílico.
AcetonaAcetona
 ACLARADOACLARADO
Se debe embeber la pieza con una sustanciaSe debe embeber la pieza con una sustancia
miscible con el alcohol y la parafina:miscible con el alcohol y la parafina:
Xileno.Xileno.
Tolueno.Tolueno.
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 INCLUSIÓNINCLUSIÓN
LaLa parafinaparafina penetra en los vasos, en los espaciospenetra en los vasos, en los espacios
intercelulares y también en el interior de las célulasintercelulares y también en el interior de las células
embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtenciónembebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención
de cortes con el micrótomo.de cortes con el micrótomo.
Procesador AutomáticoProcesador Automático
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Obtención del bloque de parafina de formaObtención del bloque de parafina de forma
regular, para ser cortado con el micrótomo.regular, para ser cortado con el micrótomo.
CONFECCIÓN DEL TACO
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DEL TACO
 CORTECORTE
Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.
Micrótomo de Deslizamiento.Micrótomo de Deslizamiento.
Micrótomo de Congelación.Micrótomo de Congelación.
Crióstato.Crióstato.
Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.
Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.
Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo.
CrióstatoCrióstato
CrióstatoCrióstato

EXTENSIÓNEXTENSIÓN
 Utilizar portaobjetos limpios y
preparados con el adhesivo
adecuado.
 Se realiza en agua tibia (38oC).
 Precaución: el preparado debe
quedar bien extendido y sin
pliegues.
 Rotular.
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agua llevar a estufa (60 °C) no
más de dos horas.

EXTENSIÓNEXTENSIÓN
 TINCIÓN DE LOS CORTES
Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:
 Colorantes que diferencian los componentes
básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y
eosina).
 Colorantes especializados que distinguen los
componentes fibrosos de la matriz extracelular.
 Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y
forman depósitos de metales en ellos.
Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:
 TINCIÓN DE LOS CORTES
La reacción de los grupos aniónicos con un
colorante básico se denomina BASOFILIA
(que tiene afinidad por lo básico)
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colorante ácido se denomina EOSINOFILIA
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Coloración con
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  • 1.
  • 2.  OBTENCIÓN DE MUESTRAS  FIJACIÓN  DESHIDRATACIÓN Y ACLARAMIENTO  INCLUSIÓN  CORTE  MONTAJE TINCIÓN DE LOS CORTES PASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICAPASOS DE LA TÉCNICA HISTOLÓGICA
  • 3.  OBTENCIÓN DE MUESTRASOBTENCIÓN DE MUESTRAS Todas las muestras de tejido, ya seaTodas las muestras de tejido, ya sea obtenidas de materiales quirúrgicos,obtenidas de materiales quirúrgicos, necropsias, biopsias deben ser procesadasnecropsias, biopsias deben ser procesadas adecuadamente para obtener buenosadecuadamente para obtener buenos cortes histológicos.cortes histológicos.
  • 4. Se debe obtener toda laSe debe obtener toda la información posible delinformación posible del material a procesar.material a procesar.  OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
  • 5. En caso de ser necesario se debe realizarEn caso de ser necesario se debe realizar un examen y descripción preliminar de losun examen y descripción preliminar de los materiales y su adecuación para unmateriales y su adecuación para un correcto procesamiento.correcto procesamiento.  OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
  • 6.  OBTENCIÓNOBTENCIÓN DE MUESTRASDE MUESTRAS
  • 7.  FIJACIÓNFIJACIÓN Tratamiento del tejido con sustancias químicas que no solo retardan las alteraciones hísticas posteriores a la muerte, sino que conservan la configuración normal del tejido.
  • 8. Fijador:Fijador: Sustancia que detiene en forma rápida los procesos de autólisis y que, al mismo tiempo, conserva los tejidos, en lo posible, en el estado en que se encontraban en la vida.  FIJACIÓNFIJACIÓN
  • 9.  Desecación:Desecación: Extendidos, líquidos de punciones.Extendidos, líquidos de punciones.  Calor seco:Calor seco: Bacteriología.Bacteriología.  Calor húmedo:Calor húmedo: Microquímica, Zoología.Microquímica, Zoología.  Frío:Frío: No es una verdadera fijación. Detiene losNo es una verdadera fijación. Detiene los procesos de autólisis y necrosis, pero cuando dejaprocesos de autólisis y necrosis, pero cuando deja de actuar los mismos se reanudan.de actuar los mismos se reanudan. TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES Físicos:  FIJACIÓNFIJACIÓN
  • 10.  Aldehídos (no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .(no precipitan proteínas y no contrae estructuras) .  MercurialesMercuriales (precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).  AlcoholesAlcoholes (precipitan proteínas)(precipitan proteínas)..  Agentes oxidantesAgentes oxidantes (precipitan proteínas(precipitan proteínas y tóxico por sus vapores).y tóxico por sus vapores).  PicratosPicratos (precipitan proteínas).(precipitan proteínas). Químicos: TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES  FIJACIÓNFIJACIÓN
  • 11.  AldehídosAldehídos (formaldehido/glutaraldehido): Son los más(formaldehido/glutaraldehido): Son los más utilizados. Los tejidos son fijados por unionesutilizados. Los tejidos son fijados por uniones cruzadas en las proteínas, al reaccionar con loscruzadas en las proteínas, al reaccionar con los grupos amino.grupos amino. La Formalina (formaldehido al 40%), se utilizaLa Formalina (formaldehido al 40%), se utiliza normalmente al 10%, en una solución bufferada.normalmente al 10%, en una solución bufferada. TIPOS DE FIJADORESTIPOS DE FIJADORES Químicos:  FIJACIÓNFIJACIÓN
  • 13. Un defecto de fijación noUn defecto de fijación no puede ser subsanado.puede ser subsanado. Es inútil hacer un estudioEs inútil hacer un estudio histológico de un materialhistológico de un material mal fijado.mal fijado. No debe olvidarse que:No debe olvidarse que:  FIJACIÓNFIJACIÓN
  • 14.  DESHIDRATACIÓNDESHIDRATACIÓN Se obtiene por medio de un reactivo anhidroSe obtiene por medio de un reactivo anhidro pero ávido de agua:pero ávido de agua: Alcohol Etílico.Alcohol Etílico. Alcohol Isopropílico.Alcohol Isopropílico. Alcohol Butílico.Alcohol Butílico. AcetonaAcetona
  • 15.  ACLARADOACLARADO Se debe embeber la pieza con una sustanciaSe debe embeber la pieza con una sustancia miscible con el alcohol y la parafina:miscible con el alcohol y la parafina: Xileno.Xileno. Tolueno.Tolueno. Benceno.Benceno.
  • 16.  INCLUSIÓNINCLUSIÓN LaLa parafinaparafina penetra en los vasos, en los espaciospenetra en los vasos, en los espacios intercelulares y también en el interior de las célulasintercelulares y también en el interior de las células embebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtenciónembebiendo el tejido y haciendo más fácil la obtención de cortes con el micrótomo.de cortes con el micrótomo.
  • 19. Obtención del bloque de parafina de formaObtención del bloque de parafina de forma regular, para ser cortado con el micrótomo.regular, para ser cortado con el micrótomo. CONFECCIÓN DEL TACO
  • 21.  CORTECORTE Micrótomo Rotativo.Micrótomo Rotativo. Micrótomo de Deslizamiento.Micrótomo de Deslizamiento. Micrótomo de Congelación.Micrótomo de Congelación. Crióstato.Crióstato.
  • 27.  EXTENSIÓNEXTENSIÓN  Utilizar portaobjetos limpios y preparados con el adhesivo adecuado.  Se realiza en agua tibia (38oC).  Precaución: el preparado debe quedar bien extendido y sin pliegues.  Rotular.
  • 28.  Luego de escurrir el exceso de agua llevar a estufa (60 °C) no más de dos horas.  EXTENSIÓNEXTENSIÓN
  • 29.  TINCIÓN DE LOS CORTES Los colorantes pueden agruparse en tres clases principales:  Colorantes que diferencian los componentes básicos y ácidos de la célula (hematoxilina y eosina).  Colorantes especializados que distinguen los componentes fibrosos de la matriz extracelular.  Sales metálicas que se precipitan en los tejidos y forman depósitos de metales en ellos.
  • 30. Colorantes empleados con mayor frecuencia en histología:
  • 31.  TINCIÓN DE LOS CORTES La reacción de los grupos aniónicos con un colorante básico se denomina BASOFILIA (que tiene afinidad por lo básico) La reacción de los grupos catiónicos con un colorante ácido se denomina EOSINOFILIA (que tiene afinidad por lo ácido)