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OBJETIVOS
 Facilitar     el crecimiento y el aislamiento de las bacterias
                  presentes en una muestra clínica.

   Determinar    qué bacterias entre las que se desarrollan
    tienen más probabilidades de ser las causantes de la
     infección y cuales son sus posibles contaminantes o
                        colonizadores.

     Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de
    importancia clínica para permitir su identificación y su
                       caracterización.

 CULTIVO PURO
 CULTIVO MIXTO
 CULTIVO CONTAMINADO
DEFINICIÓN
 Sustrato sólido, líquido o semisólido que contiene
todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y
desarrollo de los gérmenes.


 Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo,
azufre y varios minerales.
 pH
Luz
Temperatura
 Esterilidad absoluta (salvo excepciones)
 Recipientes adecuados
Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in
vivo a un ambiente in vitro va a depender de:
   Disponibilidad de nutrientes esenciales

  Condiciones ambientales adecuadas

      pH

      Temperatura

      Oxígeno y CO2

      Presión

      Luz
SÓLIDOS

    LÍQUIDOS




               SEMISÓLIDOS




 Clasificación de los medios
de cultivo según consistencia
semisólido
Caldo nutritivo


Caldos de enriquecimiento


Caldos revitalizadores
Enriquecimiento

    Nutritivo




                Selectivo y
                diferencial




Clasificación de los medios
de cultivo según utilización
MEDIOS NUTRITIVOS


Contienen nutrientes que
favorecen el desarrollo de la
mayoría de los
microorganismos sin
requerimientos especiales de
cultivo.




        No promueven el
        crecimiento de ningún
        agente en particular
MEDIOS DE ENRIQUECIMIENTO
MEDIOS SELECTIVOS



  Contienen uno o más agentes que inhiben el
  crecimiento de los microorganismos que no se
  quieren estudiar




   Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares,
   alcoholes, ácidos y antibióticos
MEDIOS DIFERENCIALES




Contienen un factor o factores que permite que las
   colonias de una especie o un tipo bacteriano
 exhiban ciertas características metabólicas o de
cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de
   otras bacterias que crecen en el mismo agar
MEDIOS ESPECIALES


    MEDIOS
    CROMÓGENOS

    MEDIOS DE
    TRANSPORTE

    MEDIOS DE
    CONSERVACIÓN
Sustancias cromogénicas:
       - Son productos químicos de síntesis que son
incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces
que son hidrolizados por enzimas microbianas específicas.
       - Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se
libera el compuesto cromogénico, que adquiere un color
intenso.
      - Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se
pone en evidencia la actividad enzimática de la B-
glucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias
formándose colonias de diferentes colonias según la especie.
       - Identificación presuntiva, haciendo innecesaria la
realización de pruebas bioquímicas.
Medios para bacterias no exigentes
      - agar
      - extracto de carne
      - peptona
      - NACL
      - leche descremada (congelar cepas)



               NORMATIVA ISP, entregar
CONTROL DE CALIDAD


 El Control de Calidad en la preparación y evaluación de
los medios de cultivo es considerado como una esencial
y buena práctica de laboratorio, necesaria para mantener
el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica.

Proceso continuo que se extiende desde las materias
primas ; a través del productor hasta el producto final
utilizado en los diferentes departamentos de análisis y
diagnóstico microbiológico.
▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
(Productividad)
          ▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados.
             (Selectividad)
             Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas)
            Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen)
            Sea estéril .... etc.

 El Jefe inmediato responsable del área
      * Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebas
realizadas por el responsable del departamento de control de calidad
      * Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados
CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDAD
DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS.

Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:
 La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés
 La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser
  cuantitativa
 Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas)
 Rajadura del plato o envase
 Variaciones en el volumen del medio
 Hemólisis
 Cristales en el medio
 Presencia de burbujas
 Presencia de coágulos
 Cambio de color normal
 Contaminación
 Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos
 Esterilidad
PRUEBAS FUNCIONAMIENTO
 Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea
recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones
(ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo al
medio de cultivo a analizar.
 El control del funcionamiento consistirá en
comprobar:
     capacidad del medio de recuperar un bajo
    número de los microorganismos más sensibles
    para los que ha sido preparado.
     capacidad de inhibir un alto número de los
    microorganismos que deben ser inhibidos en
    caso de los medios selectivos y
    diferenciar los microorganismos para los que ha
    sido diseñado en caso de los medios diferenciales.
RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE
                     CULTIVO
                  DESHIDRATADO
• Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivo
indicado en la etiqueta del envase

• Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por el
cliente

• Utilizar agua destilada de calidad

• Determinar el pH del M de C

• Esterilización del medio de cultivo

• Procedimiento escrito

• Control de esterilidad del Medio de Cultivo
AGAR INFUSION DE CARNE
MEDIO DE LOWENSTEIN JENSEN
AGAR SANGRE
ERRORES EN LA PREPARACIÓN

    Apelmazamiento del producto deshidratado
 DEFECTO
   El envase no fue cerrado correctamente después de su
    uso.
  El envase permaneció abierto por largo rato.
  Apelmazamiento del
  El producto sobrepasó la fecha de vencimiento.
  Producto deshidratado

    El valor de pH no coincide con el indicado

  • No fue empleada agua destilada
  • El medio fue sobrecalentado durante su preparación
 • El Phde pH no coincide
  El valor no fue determinado correctamente
 • El el indicado
  Con medio estaba vencido.
Aparición de turbiedad o precipitados:

 El medio preparado perdió agua por evaporación

 El medio se calentó en exceso

 El medio no se calentó lo suficiente.

 No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada.

El color del medio no coincide con el indicado:

 El medio fue sobrecalentado durante su preparación.

 El pH no fue ajustado correctamente.

 El recipiente empleado estaba sucio.

 Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron
El gel se obtiene más blando que lo característico para el
medio:

 No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparación
del medio.
 No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió agua
en exceso.


El crecimiento de los microorganismos es
pobre:

 El medio fue sobrecalentado
 El valor del pH no fue ajustado correctamente.
 La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura.
 El medio no fue mezclado correctamente.
El crecimiento de los microorganismos es atípico:


 Quedaron  residuos de sustancias inhibidoras del
crecimiento no deseables, en los recipientes donde se
preparó o distribuyó el medio.


 El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.

 El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.
ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE
QUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN
  SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS
    FACTORES NECESARIOS EN LA
PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS
MEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR
      AISLAR E IDENTIFICAR CON
 EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES
            MICROBIANOS.
Microbiología, Prescott´s
Microbiología, Prescott´s
Los métodos de siembra se utilizan
para inocular por distintos métodos
sobre un medio de cultivo apropiado
una     muestra     que     contenga
bacterias con el fin de reproducirlas
para aumentar el número de
individuos de la población y formar
colonias en el caso de medios
sólidos.
I. Siembra con rastrillo


II. Siembra con asa de cultivo
- Diseminación en superficie
- Agotamiento en superficie
- Tubos en superficie
- Tubos en profundidad o picada


III. Siembra con tórula
Figura 12: Siembra con rastrillo
Manual de microbiología 2011, U. Mayor
Figura 13: Siembra de diseminación en
superficie
Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 14: Siembra semi-cuantitativa de
agotamiento en superficie.
Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 15: Siembra de tubo en superficie.



Manual de microbiología 2011, U Mayor
Figura 16: Siembra de tubo profundidad.




Manual de microbiología 2011, U Mayor
 Pared celular bacteria gram
 positiva y gram negativa
      Gram positiva   Gram negativa
Gram negativa




                de Braun
Gram positiva
1 minuto      1 minuto




Decolorar                30
con alcohol- 15segund    segundo
acetona      os          s
DIRECTOS

Primera aproximación
al posible diagnóstico
Técnicas rápidas y
baratas
Diagnósticos rápidos
y certeros
EXAMEN AL FRESCO
  MATERIA GENITAL

Secreción      Semen,      Orina de
vaginal y/o   secreción     primer
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Medios de cultivo, métodos de siembra

  • 1.
  • 3.  Facilitar el crecimiento y el aislamiento de las bacterias presentes en una muestra clínica.  Determinar qué bacterias entre las que se desarrollan tienen más probabilidades de ser las causantes de la infección y cuales son sus posibles contaminantes o colonizadores.  Obtener un desarrollo suficiente de las bacterias de importancia clínica para permitir su identificación y su caracterización.  CULTIVO PURO  CULTIVO MIXTO  CULTIVO CONTAMINADO
  • 4. DEFINICIÓN  Sustrato sólido, líquido o semisólido que contiene todos los nutrientes necesarios para el crecimiento y desarrollo de los gérmenes.  Fuentes de energía, carbono, nitrógeno, fósforo, azufre y varios minerales.  pH Luz Temperatura  Esterilidad absoluta (salvo excepciones)  Recipientes adecuados
  • 5. Es importante destacar que la transición exitosa de un microorganismo in vivo a un ambiente in vitro va a depender de: Disponibilidad de nutrientes esenciales Condiciones ambientales adecuadas pH Temperatura Oxígeno y CO2 Presión Luz
  • 6. SÓLIDOS LÍQUIDOS SEMISÓLIDOS Clasificación de los medios de cultivo según consistencia
  • 7.
  • 8.
  • 9.
  • 11. Caldo nutritivo Caldos de enriquecimiento Caldos revitalizadores
  • 12. Enriquecimiento Nutritivo Selectivo y diferencial Clasificación de los medios de cultivo según utilización
  • 13. MEDIOS NUTRITIVOS Contienen nutrientes que favorecen el desarrollo de la mayoría de los microorganismos sin requerimientos especiales de cultivo. No promueven el crecimiento de ningún agente en particular
  • 15. MEDIOS SELECTIVOS Contienen uno o más agentes que inhiben el crecimiento de los microorganismos que no se quieren estudiar Agentes inhibidores: colorantes, sales biliares, alcoholes, ácidos y antibióticos
  • 16. MEDIOS DIFERENCIALES Contienen un factor o factores que permite que las colonias de una especie o un tipo bacteriano exhiban ciertas características metabólicas o de cultivo que puedan utilizarse para diferenciarlas de otras bacterias que crecen en el mismo agar
  • 17. MEDIOS ESPECIALES MEDIOS CROMÓGENOS MEDIOS DE TRANSPORTE MEDIOS DE CONSERVACIÓN
  • 18.
  • 19. Sustancias cromogénicas: - Son productos químicos de síntesis que son incoloros cuando se unen a sustratos naturales por enlaces que son hidrolizados por enzimas microbianas específicas. - Cuando la enzima microbiana hidroliza el enlace, se libera el compuesto cromogénico, que adquiere un color intenso. - Ejemplo: Cromo agar (agentes uropatógenos), se pone en evidencia la actividad enzimática de la B- glucoronidasa o B- galactosidasa de las bacterias formándose colonias de diferentes colonias según la especie. - Identificación presuntiva, haciendo innecesaria la realización de pruebas bioquímicas.
  • 20. Medios para bacterias no exigentes - agar - extracto de carne - peptona - NACL - leche descremada (congelar cepas) NORMATIVA ISP, entregar
  • 21. CONTROL DE CALIDAD  El Control de Calidad en la preparación y evaluación de los medios de cultivo es considerado como una esencial y buena práctica de laboratorio, necesaria para mantener el nivel y la ejecución de cualquier técnica microbiológica. Proceso continuo que se extiende desde las materias primas ; a través del productor hasta el producto final utilizado en los diferentes departamentos de análisis y diagnóstico microbiológico.
  • 22. ▪ Recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés (Productividad) ▪ Inhibición o suspensión de los microorganismos no deseados. (Selectividad) Propiedades bioquímicas (diferenciales y diagnósticas) Propiedades físicas (por ejemplo, pH, Volumen) Sea estéril .... etc.  El Jefe inmediato responsable del área * Deberá analizar mensualmente los resultados de las pruebas realizadas por el responsable del departamento de control de calidad * Evaluará el cumplimiento de objetivos a través de los resultados
  • 23. CRITERIOS DE EVALUACIÓN DE LA CALIDAD DE LOS MEDIOS DE CULTIVOS PREPARADOS. Se evalúa utilizando criterios objetivos del medio respecto a:  La recuperación o supervivencia de los microorganismos de interés  La inhibición o supresión de los microorganismos no deseados tiene que ser cuantitativa  Los atributos ( por ejemplo: Propiedades físicas y bioquímicas)  Rajadura del plato o envase  Variaciones en el volumen del medio  Hemólisis  Cristales en el medio  Presencia de burbujas  Presencia de coágulos  Cambio de color normal  Contaminación  Falla en la inhibición de microorganismos saprofitos  Esterilidad
  • 24. PRUEBAS FUNCIONAMIENTO  Para evaluar cada lote de medio de cultivo que sea recibido en el laboratorio, se emplean cepas patrones (ATCC) de varios géneros y especies de acuerdo al medio de cultivo a analizar.  El control del funcionamiento consistirá en comprobar:  capacidad del medio de recuperar un bajo número de los microorganismos más sensibles para los que ha sido preparado.  capacidad de inhibir un alto número de los microorganismos que deben ser inhibidos en caso de los medios selectivos y diferenciar los microorganismos para los que ha sido diseñado en caso de los medios diferenciales.
  • 25. RECONSTRUCCIÓN DEL MEDIO DE CULTIVO DESHIDRATADO • Cumplir con las instrucciones de preparación del medio de cultivo indicado en la etiqueta del envase • Cumplir con los procedimientos técnicos de fórmulas enviadas por el cliente • Utilizar agua destilada de calidad • Determinar el pH del M de C • Esterilización del medio de cultivo • Procedimiento escrito • Control de esterilidad del Medio de Cultivo
  • 29. ERRORES EN LA PREPARACIÓN Apelmazamiento del producto deshidratado  DEFECTO  El envase no fue cerrado correctamente después de su uso.   El envase permaneció abierto por largo rato. Apelmazamiento del   El producto sobrepasó la fecha de vencimiento. Producto deshidratado El valor de pH no coincide con el indicado • No fue empleada agua destilada • El medio fue sobrecalentado durante su preparación  • El Phde pH no coincide El valor no fue determinado correctamente  • El el indicado Con medio estaba vencido.
  • 30. Aparición de turbiedad o precipitados:  El medio preparado perdió agua por evaporación  El medio se calentó en exceso  El medio no se calentó lo suficiente.  No fue empleada la cantidad del medio o suplemento recomendada. El color del medio no coincide con el indicado:  El medio fue sobrecalentado durante su preparación.  El pH no fue ajustado correctamente.  El recipiente empleado estaba sucio.  Los azúcares contenidos en el medio se caramelizaron
  • 31. El gel se obtiene más blando que lo característico para el medio:  No fue garantizada la disolución total del agar durante la preparación del medio.  No fue empleada la cantidad del medio recomendada o se añadió agua en exceso. El crecimiento de los microorganismos es pobre:  El medio fue sobrecalentado  El valor del pH no fue ajustado correctamente.  La adición de suplementos al medio se efectuó a excesiva temperatura.  El medio no fue mezclado correctamente.
  • 32. El crecimiento de los microorganismos es atípico:  Quedaron residuos de sustancias inhibidoras del crecimiento no deseables, en los recipientes donde se preparó o distribuyó el medio.  El medio de cultivo fue preparado de manera incorrecta.  El producto sobrepasa la fecha de vencimiento.
  • 33. ES, POR LO TANTO, MUY IMPORTANTE QUE EL TECNÓLOGO MÉDICO SEA QUIEN SUPERVISE Y CONTROLE TODOS LOS FACTORES NECESARIOS EN LA PREPARACIÓN Y CONSERVACIÓN DE LOS MEDIOS DE CULTIVO, PARA ASÍ LOGRAR AISLAR E IDENTIFICAR CON EXCELENCIA LOS DISTINTOS AGENTES MICROBIANOS.
  • 34.
  • 35.
  • 36.
  • 37.
  • 38.
  • 41. Los métodos de siembra se utilizan para inocular por distintos métodos sobre un medio de cultivo apropiado una muestra que contenga bacterias con el fin de reproducirlas para aumentar el número de individuos de la población y formar colonias en el caso de medios sólidos.
  • 42.
  • 43.
  • 44.
  • 45.
  • 46. I. Siembra con rastrillo II. Siembra con asa de cultivo - Diseminación en superficie - Agotamiento en superficie - Tubos en superficie - Tubos en profundidad o picada III. Siembra con tórula
  • 47. Figura 12: Siembra con rastrillo Manual de microbiología 2011, U. Mayor
  • 48. Figura 13: Siembra de diseminación en superficie Manual de microbiología 2011, U Mayor
  • 49. Figura 14: Siembra semi-cuantitativa de agotamiento en superficie. Manual de microbiología 2011, U Mayor
  • 50. Figura 15: Siembra de tubo en superficie. Manual de microbiología 2011, U Mayor
  • 51. Figura 16: Siembra de tubo profundidad. Manual de microbiología 2011, U Mayor
  • 52.
  • 53.  Pared celular bacteria gram positiva y gram negativa Gram positiva Gram negativa
  • 54. Gram negativa de Braun
  • 56.
  • 57. 1 minuto 1 minuto Decolorar 30 con alcohol- 15segund segundo acetona os s
  • 58. DIRECTOS Primera aproximación al posible diagnóstico Técnicas rápidas y baratas Diagnósticos rápidos y certeros
  • 59. EXAMEN AL FRESCO MATERIA GENITAL Secreción Semen, Orina de vaginal y/o secreción primer uretral prostática chorro