1. PEMERIKSAAN
IMUNOLOGI
OLEH :
NUGROHO TRISTYANTO.S.Si., MM

2. Immunoassay
2
Sistem pemeriksaan yang
mempergunakan satu atau lebih
produk atau reagen imunologik
Prinsip dasar: ikatan antara molekul
imunoglobulin (Ab) dengan antigen
(Ag)
Hasil interaksi Ag – Ab (kompleks
imun) harus terlihat dan dapat diukur

3. Dasar
Reaksi Ag dengan Ab spesifik
Tujuan
Mendeteksi keberadaan Ag dalam serum
memakai Ab spesifik
Mendeteksi keberadaan Ab dalam serum
memakai Ag yang sesuai

4. 4
 Manfaat
1. Menentukan status
imunitas
2. Memperkirakan
prevalensi penyakit
3. Mengetahui adanya
invasi mikroorganisme,
jika isolasi kuman tidak
dapat dilakukan
4. Menunjang diagnosis
penyakit

5. Macam :
1. Uji kualitatif hasil + / -
2. Uji kuantitatif hasil kadar
Pengenceran tertinggi hasil
+
(uji semikuantitatif)
Contoh :
 pengenceran 1 dalam 8: 1 vol
serum +7 vol pengencer: titer 1/ 8
sampel diencerkan 8 X

6. Bahan pemeriksaan
6
Serum, plasma, urin
Plasma hanya untuk pemeriksaan
tertentu saja.
Puasa: untuk metode aglutinasi.
Serum harus dihindarkan dari
hemolisis, lipemik & kontaminasi
bakteri (pengiriman < 2 jam)
Disimpan dalam
Suhu 2 – 8o
C : 48 jam
-20o
C s/d - 70o
C: > 48 jam
Diberi label

7. Teknik Pemeriksaan Imunoserologi
7
1. Imunopresipitasi
2. Aglutinasi, flokulasi
3. Fiksasi komplemen
4. Radioimmunoassay (RIA)
5. Enzyme immunoassay
(EIA) atau
Enzyme linked
immunosorbent assay
(ELISA)
6. Immunofluorescent (IF)
7. Immunochromatographic
technique (ICT)
Non
Labelli
ng
Labellin
g

8. Interaksi Antigen-Antibodi
Interaksi primer:
Pengikatan Ag-Ab tingkat molekuler
Memerlukan indikator/label (isotop, enzim,
floresen)
Sesuai utk pengukuran Ag/Ab dgn kadar
yg rendah
Interaksi sekunder:
Reaksi Ag-Ab bisa secara langsung atau
dgn bantuan komplemen
Prinsip dasar : reaksi presipitasi/ aglutinasi
Bila partikel Ag terikat latex atau eritrosit
→ aglutinasi

9. Primary immune phenomena
Secondary immune phenomena
+
Ag Ab
Kompleks Imun

10. IMUNOASSAI
NON LABEL

11. 1. Imunopresipitasi
Interaksi sekunder → Ag-Ab komplek
tdk larut (presipitat)
Media : cair atau semisolid (gel)
Faktor yg mempengaruhi :
 Aviditas Ab → stabilitas komplek Ag-
Ab
 Suhu (optimal 0-37o
C)
 pH (netral = 6-7,5), pH < 6 ; >7,5 →
mudah disosiasi
 Molaritas (molaritas < 0,15 M) ;
>0,15 M → men-cegah presipitasi

12. Pembentukkan presipitat terjadi
apabila konsentrasi Ag dan Ab
seimbang (zona ekivalen = ZE)
Konsentrasi Ag berlebih →
Komplek Ag-Ab yg terbentuk larut
kembali disebut postzone effect
Konsentrasi Ab berlebih →
Komplek Ag-Ab yg terbentuk tetap
larut disebut prozone effect
ZE sempit → Ag bersifat mudah
larut
ZE lebar → Ag bersifat tdk mudah
larut, BM besar, & multikomponen
Ag
Imunopresipit
asi…

13. PRESIPITASIANTIGEN-ANTIBODI
Prozo
KONSENTRASI
ANTIGEN Postzone
Ekses
antibodi Seimbang
Ekses
antigen

14. 2. Aglutinasi
Umumnya : Ag bentuk partikel + Ab
spesifik → Aglutinasi
Reaksi 2 tahap :
1. Ab dgn salah satu antigen binding site
(Fab) bereaksi dgn Ag
2. Fab yg lainnya berikatan dgn Ag lain yg
sudah berikatan dgn Ab gumpalan
(lattice)
Aglutinasi lebih mudah terjadi pada IgM
o/k pentamer dibanding IgA dan IgG

15. +Taha
p I
Ag Ab K.I
Aglutina
si
Tahap
II

16. Contoh-contoh pemeriksaan
aglutinasi
1. Aglutinasi direk
2. Aglutinasi indirek (pasif)
3. Aglutinasi pasif terbalik
4. Hambatan aglutinasi

17. 3. Fiksasi komplemen
 Tahap :
1. Pengikatan sejumlah komplemen oleh
kompleks Ag – Ab
2. Penghancuran Eritrosit yg telah dilapisi
hemolisin oleh komplemen
 Interpretasi :
 tidak hemolisis
 hemolisis
 Contoh : Deteksi tripanosoma, virus
+
_

18. Tes Fiksasi
Komplemen
+
+
c
Ag
Ab
++
+
c
Ag
+
+
+
Fiksasi
komplemen
Eritrosit
Sistem hemolitik
Hemolisin tidak hemolisis?
Hemolisin
hemolisis
C - Komplemen
Eritrosit

19.  Imunoassai yang menggunakan indikator
utk melacak Ag atau Ab dengan
konsentrasi rendah
 Mampu melacak interaksi primer Ag-Ab
(initial binding)
 Sensitifitas analitik lebih tinggi dibanding
imunoassai non label
 Label yg digunakan :
 isotop : I125
, H3
, C14
 non isotop : enzim (ALP, HRP),
floresen (fluorescein, rhodamine),
kemiluminesen
 Selain uji kuantitatif, dpt digunakan pada
uji kualitatif (ANA tes, antitiroid Ab)
Imunoasai berlabel

20. Imunoassai Berlabel
Imunoassai berlabel homogen
Sinyal kadar analit diperoleh langsung dari
reaksi ikatan label dgn analit
Tidak memerlukan separasi Ag terikat dan
Ag bebas (B/F)
Imunoassai berlabel heterogen
Sinyal kadar analit diperoleh secara tdk
langsung
Memerlukan seperasi B/F
Lebih sensitif dibandingkan imunoassai
homogen

21. Imunoasai kompetitif
● Ab label dan analit direaksikan
sekaligus terhadap Ag
Imunoasai non kompetitif
● Ag analit yg diukur terikat antara Ab
phase solid & label Ab
● Lebih sensitif dibandingkan metode
kompetitif

22. Imunoasai Berlabel
1. Radioimunoassai (RIA/IRMA)
2. Imunofloresen (IF)
3. Enzyme Imunoassay
(EIA/ELISA)
4. Imunokromatografi (ICT)

23. 1. Radioimunoasai
● Immunoassay berlabel radioisotop 
membedakan Ag yang terikat Ab dengan
Ag bebas.
● Sensitif & spesifik untuk ttk kadar bahan
yang amat rendah dalam serum
● Yang diukur : - γ-ray → I125
- β particle → H3
Radiolabel pada imunoassai dibagi 2
kelompok:
a.Radioimmunoassay (RIA): radiolabelisasi
pada Ag
b.Immunoradiometric Assay (IRMA):
radiolabelisasi pada Ab

24. ● Kerugian:
 Bahaya efek radiasi bahan radioaktif
 Waktu paruh reagen singkat, γ dan β
counter mahal
● Keuntungan:
 Presisi baik and high sensitivity
 Isotope conjugation lebih mudah
 Signal detection tanpa optimalisasi
 Lebih stabil terhadap interferensi
environment (pH, suhu)

25. Prinsip dasar RIA
+
E
E
+
E
E
E
E E
E
Radiaton
counter
cuci
Ab pd fase
padat
Ag
berlab
el
Ag

26. 2. Imunofloresen assay (IFA)
 Merupakan teknik untuk deteksi Ag/Ab
pada cairan tubuh atau jaringan/sel
 Prinsip :
Molekul yg mampu menyerap energi
radiasi dan memancarkannya kembali
dlm btk cahaya (floresensi)
 Memerlukan alat fluorometer/mikroskop
 Menggunakan label:
• Fluorescein → warna hijau
• Rhodamin → warna merah

27. Imunofloresen assay

28. Enzyme immunoassay
Immunoassay dengan menggunakan
label enzim
Relatif murah, banyak tersedia,
reagen bertahan lama, mudah
diotomatisasi, peralatan yang relatif
murah
Enzim yang digunakan dipilih
berdasakan jumlah molekul substrat
yang dapat dirubah per satu molekul
enzim, mudah dan cepat mendeteksi
serta stabil.
Dibaca dengan alat :
Spektrofotometer ( λ = 492 m) →
microELISA reader
Fluorometer/Luminometer

29.  Kerugian:
 Reaksi enzim lebih kompleks dari pada
label isotop
 Masih dipengaruhi faktor environment
(plasma constituents)
 Keuntungan:
 Mudah dikerjakan
 Relatif murah, simultan dgn
pemeriksaan yg lain
 Bahaya radioaktif (-)

30. One-step sandwich EIA

31. Imunokromatografi
Imunokromatografi
 Lateral flow test
 Membacanya cukup dgn mata saja
 Tidak membutuhkan substrat
 Penggunaan colloidal gold waktu
inkubasi pendek (<15 menit)
Kerugian :
 Nitrocelulose membrane tdk stabil
pada suhu ↑
Keuntungan :
 Prosedur cepat (<15 menit) dan
praktis
 Nilai diagnostik baik
 Stabil untuk jangka panjang
 Relatif tidak mahal

32. Prinsip dasar ICT
A. Melacak Analit (Ag)
a. Reaksi langsung (Double Antibody
Sandwich)/Asai Imunometrik  untuk
melacak analit yang besar dan memiliki
> 1 epitop (LH,hCG dan HIV)
b. Reaksi kompetitif/Hambatan kompetitif
(competitive Inhibition)  untuk
melacak molekul kecil dengan epitop
tunggal
B. Melacak Ab  Indirect Assay