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AgradecimientosAl MC Martin López Valenzuela, por el apoyo para la realización de este trabajo,por su tiempo y esfuerzo.A ...
ÍndiceI. Introducción…………………………………………………………….…..4II. Antecedentes………………………………………………………….…..5III. Objetivo……………………………………………...
IntroducciónLa mastitis es una inflamación de la glándula mamaria y sus tejidos secretores, quereduce la producción del vo...
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ObjetivoEl objetivo del presente trabajo fue identificar los agentes patógenos que producenmastitis subclínica en diferent...
Material y MétodosEl presente trabajo se realizo en el rancho El Torito ubicado en el poblado losbecos, rancho La Herradur...
Resultados y DiscusiónLos resultados fueron los siguientes:De 20 muestras recolectadas para cultivo, solo 9 (45%) presenta...
Cuadro 2. Prueba de cuagulasaNo.       Coagulasa (+)            Coagulasa (-)1                                      2    ...
Cuadro 4. Resistencia a antibióticos                           1      2      3      4      5      6      7      8      9Am...
ConclusionesCon la realización de este trabajo se llega a la conclusión de que la principal causade mastitis en México y e...
Bibliografía1. Andresen, S. H. 2001. Mastitis prevencion y control. Rev inv vet peru    2001;12 (2):55-65.2. Báez GJJ. 200...
14. Olivas, S.F.T., 2010. Principales agentes patologicos causantes de matitis    bovina en culiacan, sinaloa. Facultad d ...
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Identificación de agentes patógenos que producen mastitis subclínica y resistencia a antimicrobianos.

  1. 1. Universidad Autónoma de Sinaloa Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia Módulo de Producción de LecheIdentificación de agentes patógenos que producen mastitis subclínica y resistencia a antimicrobianos. Autores: Gamboa González Mauricio Alfonso González Navarrete Cecilia de Jesús Millán Sarabia Martha Daniela Vivanco Osuna Verónica Berenice Asesores: MVZ EPAB. Carlos Osuna Ezquer Dr. Miguel Alberto Luque Agundez Culiacán Sinaloa, 09 de Diciembre de 2011 1
  2. 2. AgradecimientosAl MC Martin López Valenzuela, por el apoyo para la realización de este trabajo,por su tiempo y esfuerzo.A la QFB Beatriz y a la MVZ Fabiola por su apoyo y tiempo y por compartir susconocimientos.A nuestros compañeros: Daniela Itzel Franco Salinas, Luis Miguel GonzálezLuquín y Francisco Javier Mendivil García, por su apoyo incondicional y sobre todopor su colaboración para la toma de muestras.A los médicos responsables de cada uno de los establos lecheros, por susatenciones, ayuda y el permiso para realizar la investigación en sus respectivoslugares de trabajo.A nuestros docentes por su apoyo y por sus concejos para hacernos más fácil lainvestigación.A nuestros padres, por el apoyo, tanto moral como económico, por alentarnoscuando nos sentíamos cansados.Gracias a todos ellos, ya que sin su apoyo y colaboración no hubiese sido posiblerealizar esta investigación. 2
  3. 3. ÍndiceI. Introducción…………………………………………………………….…..4II. Antecedentes………………………………………………………….…..5III. Objetivo………………………………………………………….……….10IV. Materiales y métodos……….………………..…..…..….….....………11V. Resultados y discusión…………………………………………….……12VI. Conclusiones…………………………………………………………….15VII. Bibliografía………………………………………………….…………..16 3
  4. 4. IntroducciónLa mastitis es una inflamación de la glándula mamaria y sus tejidos secretores, quereduce la producción del volumen de leche, alterando su composición, incluso su sabor,además de elevar su carga bacteriana normal es un problema poblacional multifactorialimposible de erradicar; por consiguiente, su control depende de la aplicación de unsistema integral de medidas cuyos objetivos son: reducir la tasa de nuevas infecciones yreducir el tiempo de infección de cada caso de mastitis. En general, las mastitis causanentre un 40 a 50% de disminución en los márgenes económicos netos por vaca, con lamayor parte de estas pérdidas debidas entre 5 a 7% por disminución en la cantidad deleche por lactancia. Las estimaciones de las pérdidas causadas por un menor rendimientofluctúan entre 100 a 500 kg/vaca por lactancia. Cuando las mastitis clínicas ocurren, losgastos adicionales se presentan por: eliminación de leche anormal, las compras demedicinas y los honorarios por la atención veterinaria. Cada caso de mastitis clínica hasido estimado como produciendo gastos comprendidos entre 100 a 200 USD por vaca enuna lactancia. El objetivo del presente trabajo fue identificar los agentes patógenos queproducen mastitis subclínica en diferentes establos lecheros de Culiacán, Sinaloa, México,determinar su prevalencia y su resistencia a antimicrobianos. 4
  5. 5. AntecedentesEs una requisitoria de las poblaciones de distintos países, que los alimentos, incluidos laleche y los productos lácteos, sean seguros para la salud, nutritivos y de sabor fresco yagradable. Por este motivo, los programas preventivos de mastitis y de calidad de lecheque se llevan a cabo en las lecherías deben tener como objetivo la producción de lechede óptima calidad en su composición, provenir de vacas sanas y bien alimentadas, con lamáxima calidad higiénica posible, y sin la presencia de sustancias adulterantes de ningúntipo. La calidad de leche que llega a la planta de industrialización no puede ser mejoradaen la misma, aun considerando el proceso de pasteurización, por lo tanto, esdeterminante para el futuro proceso de la leche en la industria, la calidad con la que seproduce en las lecherías (Chaves, 2010).La mastitis es una inflamación de la glándula mamaria y sus tejidos secretores, quereduce la producción del volumen de leche, alterando su composición, incluso su sabor,además de elevar su carga bacteriana normal (Gasque, 2008).Se caracteriza por la entrada de células somáticas, principalmente neutrófilospolimorfonucleares (PMN), en la glándula mamaria y por un aumento en el contenido deproteasa en la leche (Kerr y Wellnitz, 2003). (Métodos de detección)**La mastitis bovina continua siendo una de las enfermedades que causa mayor impactoeconómico en las ganaderías orientadas a la producción de leche por ser una de lasenfermedades más significativas desde el punto de vista de la producción de leche ysalud pública (Rodríguez, 2006).La mastitis es un problema poblacional multifactorial imposible de erradicar; porconsiguiente, su control depende de la aplicación de un sistema integral de medidascuyos objetivos son: reducir la tasa de nuevas infecciones y reducir el tiempo de infecciónde cada caso de mastitis (Andresen, 2001).En general, las mastitis causan entre un 40 a 50% de disminución en los márgeneseconómicos netos por vaca, con la mayor parte de estas pérdidas debidas entre 5 a 7%por disminución en la cantidad de leche por lactancia. Las estimaciones de las pérdidascausadas por un menor rendimiento fluctúan entre 100 a 500 kg/vaca por lactancia.Cuando las mastitis clínicas ocurren, los gastos adicionales se presentan por: eliminaciónde leche anormal, las compras de medicinas y los honorarios por la atención veterinaria.Cada caso de mastitis clínica ha sido estimado como produciendo gastos comprendidosentre 100 a 200 USD por vaca en una lactancia (Concha, 2008).La Mastitis bovina es un complejo singular de enfermedades, que causa una grancantidad de perdidas a nivel mundial y en especial en las regiones con una producciónlechera intensiva. La causa más común para un sacrificio temprano de las vacas lecherasson los problemas de salud de la glándula mamaria, además de problemas de Fertilidad.El 26.5% de las vacas lecheras sacrificadas en el continente americano es debido atrastornos ocasionados por la mastitis (Wolter y col., 2000).La mastitis bovina es muy persistente en el ganado lechero (Wellenberg y col., 2002),usualmente es tratada o prevenida con antibióticos intramamarios; representando una 5
  6. 6. carga económica muy alta a los productores de leche en todo el mundo. Las pérdidasmundiales, anuales debido a la mastitis, se han estimado en 35 billones de dólaresamericanos (Wellenberg y col., 2002; O´Flaherty y col., 2005). Revision bibliografica***Esta enfermedad, económicamente, es la más importante en la industria lechera de losEstados Unidos, ya que afecta a la mitad de las vacas infectadas con algún tipo demastitis. Se considera que esta enfermedad representa el 70% de los gastos totales paralos ganaderos lecheros, resultando en una pérdida de billones de dólares cada año(Bradley y Green, 2001; dos Santos et al., 2002).***La constitución anatómica de la ubre, la expone constantemente a lesiones y agentespatológicos de diversos orígenes (Báez, 2002). El propósito de la respuesta inflamatoriaes destruir o neutralizar al agente causal y preparar la forma de sanar y retornar a sufunción normal (Philpot y Nickerson, 2000; Báez, 2002).*** La Federación Internacional deLechería (1999), define a la mastitis bovina como una enfermedad inflamatoria de laglándula mamaria, que tiene por objetivo la eliminación del agente patógeno y larestauración de la funcionalidad del órgano.Todos los métodos comerciales para producir leche tienden a proveer condicionesfavorables para la diseminación de microorganismos contagiosos de vaca a vaca en elmomento del ordeño; y la diseminación de organismos ambientales durante el intervaloentre ordeños. La mayoría de los factores involucrados en la diseminación demicroorganismos causantes de mastitis están bajo el control directo de los dueños delhato y sus empleados (Philpot, 2001).Los patógenos contagiosos viven y se multiplican en la glándula mamaria y la piel delpezón, se transmiten de animal a animal principalmente durante el ordeño e incluyen aStaphylococcus aureus, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium bovis y a especies deMycoplasma. Los patógenos ambientales son aquellos cuyo reservorio primario es ellugar donde viven las vacas. Estos organismos constituyen un grupo heterogéneo degéneros y especies bacterianas, siendo los más frecuentemente aislados losestreptococos y las bacterias coliformes. Los estreptococos ambientales (EA) causantesde mastitis bovina incluyen Streptococcus uberis, Streptococcus dysgalactiae,Streptococcus equinus (anteriormente caracterizado como Streptococcus bovis),Streptococcus equi, Streptococcus parauberis y Streptococcus canis. Dentro de estos, S.uberis y S. dysgalactiae son los más prevalentes, causando infección intramamaria (IIM)cuando se dan condiciones favorables. Streptococcus dysgalactiae puede comportarsetanto como un patógeno ambiental como contagioso (Rodríguez,. 2000).Se han identificado más de 130 especies, subespecies y serovares de bacteriascausantes de la enfermedad; sin embargo, más del 75% de los casos se deben amicroorganismos GRAM Positivos, particularmente especies de los génerosStaphylococcus y Streptococcus. La enfermedad tiene dos formas básicas depresentación: clínica y subclínica que, por lo general, no son más que fases del procesoinflamatorio. En la forma clínica se presentan evidentes signos de inflamación comotumefacción, rubor, dolor, cambios notables en la secreción y eventualmente, signossistémicos como fiebre, pérdida del apetito y depresión. La forma subclínica se caracterizapor la existencia de inflamación sin los signos macroscópicos que permiten reconocerla, 6
  7. 7. por lo que generalmente pasa desapercibida, a pesar de ser 20 a 50 veces más frecuenteque la forma clínica (Scaramelli, 2003).Osteras et al. (2006), afirman que la distribución de los patógenos que producen mastitispueden ser diferentes entre los dos tipos arriba descritos, puesto que en los casos clínicosla etiología puede ser por bacterias que están presentes solamente por un corto periodode tiempo, naturalmente desencadenando claros signos clínicos, ej. Eschericha coli. Porel contrario, las mastitis subclínicas pueden ser causadas por patógenos que puedenestar presentes por largos periodos de tiempo y solamente produciendo leves signos en laubre, ej. Staphylococcus aureus. Pero considerando básicamente la etiología, las mastitiscontagiosas son producidas por microorganismos cuyo habitat principal es el canal delpezón o la piel externa del mismo, de forma que los contagios se producenfundamentalmente durante el ordeño, así en este caso destacando bacterias comoStaphylococus aureus , Streptococcus agalactiae.Numerosos estudios a nivel mundial colocan a Staphylococcus aureus como el principalagente causal de mastitis bovina, por ejemplo en chile fue el agente bacteriano aisladocon mayor frecuencia (Montes y col., 1989; Reyes y col., 2002). En colombia se determinoal mismo agente como el principal agente involucrado en este problema con unaprevalencia del 37.45% (Londoño, 2006). En México se ha encontro como principalcausante al mismo agente con un 78.57% en un estudio realizado por Luque y Gaxiola(1993), mientras que en 2006 un estudia realizado por Bedolla y col (2006) se encontróuna prevalencia del 73%. En 2010 un estudio realizado por Olivas en diferentes establoslechero del municipio de Culiacan, se determino una prevalencia del 33.33% paraStaphylococcus aureus, un 24.07% para Candida albicans, un 22.22% para Streptococcusspp, un 12.96% para Staphylococcus spp., y un 1.85% para Corynebacterium spp.,Klebsiella spp., Escherichia coli y Pseuomona aeruginosa.Staphylococcus aureus constituye la principal causa de mastitis infecciosa en vacas,borregas y cabras, causando fuertes perdidas económicas a nivel mundial. Lasinfecciones tienen a ser subclinicas y crónicas con episodios periódicos de mastitis clínica,pudiendo causar también mastitis gangrenosa (Philpot y Nikerson, 1993).Se utiliza una gran variedad de pruebas que ayudan al diagnostico de la mastitissubclínica mismas que han quedado restringidas casi enteramente a la determinación dela cantidad de DNA, y por lo tanto del número aproximado de leucocitos en la muestra(Blanco, 2001).Prueba de California para mastitis.La prueba de California para mastitis es la utilizada con más frecuencia habiendo probadosu eficacia sobre todo en manos de operadores hábiles. Refleja la cantidad de célulassomáticas (leucocitos y células epiteliales) de la leche. La combinación del DNA nuclearde las células en la leche con un detergente (Alquil-Aril-Sulfonato más Púrpura deBromocresol) en un recipiente de la paleta especial produce un gel, los resultados se leencomo Negativos, Traza, 1+, 2+ y 3+ según la cantidad de gel. 7
  8. 8. Prueba de Wisconsin para mastitisLa prueba de Wisconsin para mastitis es la segunda técnica más utilizada para eldiagnóstico de la mastitis subclínica; requiere de una gradilla con 12 tubos de plástico fijoscon capacidad de 15 ml y graduación de 1 a 6 ml; presentan un orificio aereador colocadolateralmente con un diámetro de 3.15 mm. Los tapones de hule llevan un orificio centralde 1.10 mm. El reactivo utilizado es el mismo que el de la prueba de California paramastitis diluido en proporción de 1:1 usando agua destilada. En esta prueba se mezclanen cada tubo 3 ml de leche con 3 ml de reactivo, posteriormente se agitan durante 10segundos y se deja reposar la mezcla por 15 segundos, luego se vierte 15 segundos y seprocede a realizar la lectura.Cuenta directa de las células somáticas en la lecheUno de los procedimientos mas empleados por su utilidad y sencillez para el estudio de laleche, es la determinación directa o indirecta del número de células somáticas.Conductividad eléctrica en lecheLa evaluación de la conductividad eléctrica como un método para la detección de mastitisse basa en el aumento en la cantidad de sodio y cloro presentes en la leche cuando existeuna alteración de la glándula mamaria, provocándose entonces un aumento en laconductividad de la misma.Cloro en leche.En la leche la relación lactosa: cloro, es influenciada por: a) estado lactacional y b)presentación de mastitis.En casos de mastitis el contenido de cloro en la leche tiende a incrementarse enproporción a la lactosa, lo que ocasiona en la leche un sabor ligeramente salado.Determinación de pH en leche.El pH identificado en el calostro es de 6.4, en tanto que en la leche es de 6.5-6.8, cantidadque a media lactación es de 6.6-6.7, y al final de 6.8 o mayor.Se ha considerado que en la leche proveniente de glándulas mamaria afectada pormastitis, el pH es alcalino, lo que se atribuye a la disminución de la lactosa e incrementode sales que pasan de la sangre a la leche.N-acetyl-beta-d-glucosaminidasa (nagasa).Recientemente se ha empezado a popularizar una prueba en la leche de vacas conmastitis llamada NAGASA, esta es una enzima que ha demostrado altas correlacionesentre su presencia y el numero de células somáticas en la leche. Esta correlación no varioentre los diferentes agentes etiológicos, tampoco tuvo influencia el numero de recaídas demastitis de las vacas.Análisis bacteriológico de la leche.La colección de muestras de leche en forma aséptica para los exámenes bacteriológicospuede proveer un diagnóstico válido y correcto para el tratamiento y pronóstico de lamastitis bovina. 8
  9. 9. Un diagnóstico bacteriológico deberá realizarse en un laboratorio especializado. Lasmuestras de leche deberán ser recolectadas en tubos estériles y dentro de las primeras24 horas, cultivarse en un caldo nutritivo de bacterias asociadas a mastitis o agar nutritivoen cajas conteniendo el medio de cultivo. 9
  10. 10. ObjetivoEl objetivo del presente trabajo fue identificar los agentes patógenos que producenmastitis subclínica en diferentes establos lecheros de Culiacán, Sinaloa, México,determinar su prevalencia y su resistencia a antimicrobianos. 10
  11. 11. Material y MétodosEl presente trabajo se realizo en el rancho El Torito ubicado en el poblado losbecos, rancho La Herradura ubicado en el poblado la laguna colorada, rancho RSubicado en el limón de los ramos y rancho Los Peñascos ubicado en el Salado.Se realizaron visitas los días lunes y martes para hacer la toma de muestras.Para la muestra de leche se uso gel desinfectante, torundas y vasos estériles,para tomar la muestra primero se desinfectaron las manos con el gel y un poco dealgodón, se limpio y desinfecto el pezón de la vaca con la torunda, se tiraron losprimeros chorros de leche y se colecto la leche en los vasos estériles, cuidando deno contaminar la muestra.Las muestras fueron puestas en refrigeración y posteriormente se trasladaron allaboratorio de microbiología de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia,donde inmediatamente se realizaron los cultivos en los diferentes medios; agarsangre, EMB, saborou y sal y manitol. Se encendió el mechero, se esterilizo el asabacteriológica, se tomo una muestra de leche y se colocaron de una a dos gotasde leche en cada uno de los medios, se extendió la muestra haciendo estrias en elagar y terminado el procedimiento se esterilizo el asa y los cultivos fueron puestosen la incubadora a 37.5°C por 24 horas.Pasadas las 24 horas se realizó la lectura de los cultivos, los positivos fueronobservados al microscopio para identificar el microorganismo, los que dieronpositivos a Staphilococcus se les realizo la prueba de la coagulasa para identificarsi eran Staphilcoccus aureus o staphilococcus spp.Posteriormente se realizo el antibiograma a todos los cultivos positivos, utilizandouna muestra del cultivo y realizando otro cultivo en un medio liquido, que fue soya,se puso en la incubadora durante 1 hora y posteriormente se realizo un cultivo yse coloco el disco con 12 antibióticos, se colocaron nuevamente en la incubadoraa 37.5°C durante 24 horas y se realizo la lectura de los mismos. 11
  12. 12. Resultados y DiscusiónLos resultados fueron los siguientes:De 20 muestras recolectadas para cultivo, solo 9 (45%) presentaron crecimiento(Cuadro 1). De las muestras observadas al microscopio todas fueron positivas aStaphylococcus, se realizo la prueba de la coagulasa a las 9 muestras positivas,de las cuales 6 (66.66%) fueron coagulasa positiva, determinando asi que sonStaphylococcus aureus y 3 (33.33%) son Staphylococcus spp. (Cuadro 2 y 3). Enel antibiograma realizado a las 9 muestras positivas se determino la resistencia osensibilidad a 12 diferentes antibióticos, encontrando solo resistencia en 3(33.33%) de las muestras (Cuadro 3).Cuadro 1. Cultivos Cultivos bacterianos Positivo 45% Negativo 55% 12
  13. 13. Cuadro 2. Prueba de cuagulasaNo. Coagulasa (+) Coagulasa (-)1 2 3 4 5 6 7 8 9 Cuadro 3. Resultados de la prueba de la cuagulasa 70.00% 60.00% 50.00% 40.00% Staphylococcus 30.00% aureus, 66.66% 20.00% Staphylococcus 10.00% spp., 33.33% 0.00% Staphylococcus aureus Staphylococcus spp. 13
  14. 14. Cuadro 4. Resistencia a antibióticos 1 2 3 4 5 6 7 8 9Amikacina (AK) S S S S S S S S SAmpicilina (AM) R S S S S S S S RCefalotina (CF) S S S S S S S S SCeftriaxona (CRO) R S S S S S S S SCloranfenicol (CL) R S S S S S S S SDicloxacilina (DC) R R S S S S S S REnoxacina (ENX) S S S S S S S S SEritromicina (E) R S S S S S S S SGentamicina (GE) R S S S S S S S SNetilmicina (NET) S S S S S S S S SPenicilina(PE) R S S S S S S S RTrimetroprim- R S S S S S S S Ssulfatometoxasol(SXT)Los resultados encontrados respecto a la prevalencia del agente coinciden con lodicho por Mones y col., en 1989, Reyes y col., en 2002, Luque y Gaxiola en 1993,Bedolla y col., en 2006, ellos encontraron como agente principal a Staphylococcus aureus,al igual que en el presente trabajo. 14
  15. 15. ConclusionesCon la realización de este trabajo se llega a la conclusión de que la principal causade mastitis en México y en el mundo es la falta de higiene y el mal manejo almomento de la ordeña, lo que ocasiona grandes pérdidas económicas en laindustria lechera debido a que esta enfermedad provoca una notable disminuciónen la producción de leche, y en casos mas graves el cuarto afectado llega aperderse por completo. También se concluye que el principal agente causante demastitis subclínica es el microorganismo gram positivo: Staphylococcus aureus;género del cual existe muy poca resistencia a los antibióticos, teniendo un granporcentaje de sensibilidad a ellos. 15
  16. 16. Bibliografía1. Andresen, S. H. 2001. Mastitis prevencion y control. Rev inv vet peru 2001;12 (2):55-65.2. Báez GJJ. 2002. Estudio epidemiológico de mastitis subclínica bovina en el sector II de Téjaro, Michoacán. (Tesis de licenciatura). Universidad Michoacana de San Nicolás de Hidalgo, Facultad de medicina Veterinaria y Zootecnia. Morelia, Michoacán, México. Pp 27-28.3. Bedolla, C. C. R. Mejía, A. J. G, Pérez C. O Valdivia H. Castañeda V. W. Wolter. 2006. Prevalencia de mastitis en el ganado lechero de tejaro municipio de tarimbaro Michoacán. Facultad de medicina veterinaria y zootecnia de la universidad de Michoacán de san Nicolás de Hidalgo CUCBA- U de G. instituto estatal de hessen Alemania.4. Bladley, A. J y Green, M J. 2001. Adaptacion of escherichia coli to the bovine mammary Gland. J clin microbiol. 35 (5) 1845-9.5. Blanco, O.M.A. 2001. Diagnostico de la mastitis subclinica bovina. Departamento de reproducción animal de rumiantes, facultad de medicina veterinaria y zootecnia. Universidad autónoma de México.6. Chavez, C. J. 2000. Sistemas de produccion de leche en argentina y cuba. facultad de ciencias veterinarias de la UBA. Lactodiagnostico del sur Olivas Burnos Aires, A argentina7. Concha, B.C. 2008. Mastitis bovina nuevos aspectos de diagnostico tratamiento y control. Universidad de chile.8. Dos santos, J. N Netto dos santos, K.R,. Gentiline, E ., Sorderi, D., de Freire Bastos, M. C. 2002. Phenotypic and genetic characterization of bacteriocin producing strains of staphylococcus aureus involved in bovine mastitis. Veterinary microbiology. 85:133-144.9. Kerr DE, y Wellnitz O. 2003. Mammary Expression of News Genes to Combat Mastitis. J Anim. Sci. 81 (suppl.3): 38-47.10. Londoño, G. D. C. 2006. Prevalencia de los principales microorganismos causantes de mastitis en vacas lecheras del centro del valle del cauca an los años 2003 a 2006. Tesis.11. Luque, A. M. A. y C. S. M. Gaxiola. 1993. Prevalencia, etiologia y sensibilidad antimicrobiana de mastitis subclinica en culiacan, sinaloa. Escuela de medicina veterinaria y zootecnia de la Universidad Autonoma de Sinaloa. Congreso AMPA memorias. Chihuahua, Chiahuahua.12. Montes, S. H., A. L. Zurita, R. M. Rivas, y B. L. Moraga. 1989. Mastitis clinica. Flora microbiana aislada de vacas provenientes de algunas lecherias del area metropolitana, Departamento de Medicina Preventiva Animal. Facultad de Ciencias Veterinarias y Pecuarias, Universida de Chile. Vol. 11 n°1. Pp. 1-10.13. O’Flaherty, S., Ross, R. P., Flynn, J., Meaney, W. J., Fitzgerald, G. F. y Coffey, A. 2005. Isolation and characterization of two anti-staphylococcal bacteriophages specific for pathogenic Staphylococcus aureus associated with bovine infections. Letters in Applied Microbiology. 41: 482–486. 16
  17. 17. 14. Olivas, S.F.T., 2010. Principales agentes patologicos causantes de matitis bovina en culiacan, sinaloa. Facultad d e medicina veterinaria y zootecnia. Unuversidad autonoma de sinaloa.15. Osteras, O. 2006. Mastitis epidemiology practical approaches and applications. XXIV World Buiatrics Congress. Nice, France. 14pp.16. Philpot WN. 2001. Importancia de la cuenta de células somáticas y los factores que la afectan. III Congreso Nacional de Control de Mastitis y Calidad de la Leche. Junio de 2001. León, Gto. México. 26 pp.17. Philpot, N.W.,S. C. Nickerson. 1993. Mastitis: el contrataque. Una estrategia para combatir la mastitis. Babson Bros. Co.18. Philpot, W. N. y Nickerson, S. N. 2000. Importancia económica de la mastitis. Ganando la lucha contra la mastitis. Westfalia-Surge. Estados Unidos de América. : 1-13, 44-53.19. Reyes, M. P., P. F. valenzuela, y O. V. saavedra. 2002. Desarrollo de metodo para determinacion microbiologica de mastitis subclinica en lecherias de la provincia de talca. Memoria de Licenciaturas. Universidad de talca(chile).20. Rodríguez, M. G.2006. Comportamiento de la mastitis bovina y su impacto económico en algunos hatos de la sabana de Bogotá Colombia. Revista de medicina veterinaria julio-diciembre numero 012 universidad de salle Bogotá Colombia p.35.55.21. Rodríguez, M. Y. L. 2000. Determinación de mastitis bovina en catacamas y santa maría del real. Olancho honduras. Escuela nacional de agricultura honduras.22. Scaramelli, A. y Z, González 2003. Epizootiología y diagnostico de mastitis bovina. Laboratorio de mastitis cátedra de microbiología Facultad de Ciencias Veterinarias, universidad central de Venezuela, Maracay Venezuela departamento de salud publica, decanato de Ciencias Veterinarias Universidad centro Occidental Lisandro Alvarado.23. Wellenberg, G. J., van der Poel, W. H. M. y Van Oirschot, J. T. 2002. Viral infections and bovine mastitis: a review. Veterinary Microbiology, Article 2361, pp. 2-21.24. Wolter, W. V.H Castañeda. B Kloppert. M Zschoeck. 2000. La Mastitis bovina. Istituto estatal de investigaciones hesse. Universidad de guadalajara. 17
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