Результати циклів PGS-aCGH у пацієнтів з багаторазовими невдалими спробами ДРТ

1. Результати циклів ПГС-ПГГ у пацієнтів з
багаторазовими невдалими спробами ДРТ
Д. О. Микитенко
2014

2. • Метод селекції ембріонів, що не несуть хромосомної / генної
патології.
2
Преімплантаційні генетичні дослідження
Методи ПГД
Обмеженого хромосомного
скринінгу
Тотального хромосомного
скринінгу
•ПЛР-діагностика
•Секвенування
•Мас-спектрометрія/мінісеквенування
•FISH-аналіз
Array-CGH
SNP-arrays
Секвенування “нового”
покоління

3. 3
Що таке Порівняльна Геномна Гібридизація (aCGH)?
M Shinawi, S. W. Cheung. Drug Discovery Today. 13 (17/18). 2008
aCGH – технологія високороздільного повногеномного скринінгу, що дозволяє
діагностувати анеуплоідії та мікроструктурні хромосомні аномалії
(M Shinawi, S. W. Cheung. 2008 )

4. Дизайн дослідження
Клінічні показання
•Вік матері понад 35 р.
•Звичне невиношування вагітності
•Невдалі спроби ДРТ
•Високий рівень анеуплоїдії сперми (>5%)
•Підтверджений випадок анеуплоїдії плода
•Носійство хромосомних перебудов / генних дефектів
-Дослідження проводилось в рамках циклів ДРТ з інформованої згоди пацієнтів
-Досліджуваний матеріал – клітини трофектормальної оболонки ембріонів (5 доба)
-Ембріони якості не нижче “3ВВ” з хетчінгом, що розпочався
-Ембріони вітрифікувались на час дослідження та використовувались у подальшому
в кріоцклах
-Платформа дослідження - ВАС-aCGH 24sure (BlueGnome, UK)

5. Selection of single blastocysts for fresh transfer via standard morphology
assessment alone and with array CGH for good prognosis IVF patients:
results from a randomized pilot study
Molecular Cytogenetics 2012, 5 :24
Zhihong Yang et al.

6. Array CGH with Day 5 biopsy:
Results from centers with >20 cycles
total range
per
center
Maternal age: 37.0 36 – 38.6
# zygotes 6.4 5.2-8.3
cycles: 433 20-55
Implantation after PGD 61% 52-83%
Pregnancies / cycle 50% 26-73%
Pregnancies / transfer 67% 53-100%
Reprogenetics data to 9/2011

7. 7
Результативність aCGH-PGD
Вибірка– 16 неплідних пар (носії траслокацій)
Доімплантаційна діагностика: PGD-aCGH
Ємбріонів - 132
Результат отримано за 93,7% эмбріонів (121)
Еуплоїдних ембріонів – 22,3 % (27)
Цикл закінчило 15 пар
Частота вагітностей – 31,3% / пункцію
- 33,3% / перенос (5 пар)

8. Результативність aCGH-PGS
в групах пацієнтів несприятливого прогнозу
Результативність aCGH-PGD
у носіїв хромосомних перебудов
Сумарно за 2011-2013 рр
Досліджено 550 ембріонів.
132 ЕТ – 71 вагітність (53,8% / ЕТ)
с/а до 12 т.в. – 5 (7% від зареєстрованих
вагітностей)
На сьогодні: 42 пологів, 54 дітей.
Характеристика Відн. кількість, %
Збалансований хромосомний набір 51,9
Незбалансований хромосомний набір 48,1
З них випадки:
- Числові хромосомні аномалії 59,3
З яких: Трисомії 53,4
Моносомії 46,6
- Структурні хромосомні аномалії 16,8
- Множинні хромосомні аномалії 20,9

9. CGH Aneuploidy Screening in poor prognosis IVF
patients
IVF Hammersmith experience
• 85 embryos transferred in 53 cycles 57%
• Clinical pregnancy rate/cycle started 16/93 17%
• Clinical pregnancy rate/ET 16/53 30%
<37 years CPR/ET 5/14 36% >37
years CPR/ET 11/39 28%
• 1 ectopic, 2 miscarriages, 5 livebirths, 8 ongoing
pregnancies
14:07 9

10. 10
Розподіл ембріонів за статтю
Характеристика Стать P
Жіноча Чоловіча
Збалансований
хромосомний набір
121 112 0,03
Незбалансований
хромосомний набір
68 98
Розподіл ембріонів за часом біопсії
Характеристика День біопсії P
5 6/7
Збалансований
хромосомний набір
131 101 0,0005
Незбалансований
хромосомний набір
67 105

11. Порівняльна оцінка можливостей
FISH тa aCGH
Досліджені ембріони (aCGH)
Точність діагностики FISH (екстраполяція)
FISH 5 FISH 9 FISH 12
абс абс отн абс отн абс отн
Еуплоїдні 169 169
100,0
% 169 100,0% 169 100,0%
Анеуплоідні 176 55 31,3% 89 50,6% 101 57,4%
Загалом 345 224 64,9% 258 74,8% 270 78,3%

12. Аномалії преімплантаційних ембріонів
(розподіл за частотою залучення хромосом)
7.3
1.8
3.2
4.1
2.7
1.8
3.7
1.8
3.2
5.5
1.4
2.3
5.9
3.7
7.3
14.2
2.7
1.4
5.5
2.3
8.2
5 5
0
5
10
15
20
25
Преимплантационные эмбрионы
Хромосома
Частота вовлечения, %

13. Розподіл ембріонів на стадії бластоцисти у носіїв збалансованих транслокацій
29.7%
16.2%
16.2%
37.8%
Хромосомні аномалії, асоційовані з батьківською перебудовою
Хромосомні аномалії, асоційовані з транслокацією, з залученням других хромосом
Хромосомні аномалії, не пов'язані з батьківською перебудовою
Нормальний /збалансований хромосомний набір
Микитенко Д. А. Оценка явления межхромосомного
эффекта у эмбрионов пациентов с хромосомными
аномалиями методом полногеномного скрининга / Д.
А. Микитенко, Л. Я. Пилип, В. Д. Зукин, К. В. Лаврова
// Редкие (орфанные) заболевания и врожденные
пороки развития.Севременные возможности
диагностики, профилактики, лечения и реабилитации.
К 45-летию Медико-генетического центра. – Санкт-
Петербург, 2014. – С.340-347.

14. Розподіл кількості отриманих ембріонів та бластоцист в
залежності від віку пацієнтки
24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44
Вік паціє нт ки, р.
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Ефективністьбластуляції,%
0
2
4
6
8
10
12
14
16
18
20
Середнякількістьотриманихембріонів/Бластоцист
Середня кіль кіс т ь от рим аних ем бріонів
Середня кіль кіс т ь от рим аних блас т оцис т
Ефект ив ніс т ь блас т у ляції

15. Розподіл ембріонів (стадія бластоцисти) за кількістю
хромосомних аномалій в залежності від віку пацієнтки
62,5
75
59,1
75
75,5
61,8
69,8
61
48,3
52,9
57,5
51,2
40
40,6
52,6
34,8
50
28,6
37,5
5,6
8,3
24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44
Вік паціє нт ки, р.
0
20
40
60
80
100
Частка,%
62,5
75
59,1
75
75,5
61,8
69,8
61
48,3
52,9
57,5
51,2
40
40,6
52,6
34,8
50
28,6
37,5
5,6
8,3
3 т а біль ше х ром ос ом ні аном алії
2 х ром ос ом ні аном алії
1 х ром ос ом на аном алія
Еу плоїдні

16. Частка еуплоїдних ембріонів (від вихідної кількості),
доступних для переносу після проведення ПГГ-ПГС
24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44
Вік, роки
0
5
10
15
20
25
30
35
40
45
50
55
60
65
70
75
80
85
90
95
100
Доляембріонів,доступнанаперенос,%
N 𝑁 = 41.069 + 0.1952 ∗ вік − 21 − 0.101 ∗ вік − 21 2

17. Прогноз наявності еуплоїдних ембріонів для трансферу після проведення
ПГГ-ПГС в залежності від віку та кількості отриманих бластоцист
Досліджених
бластоцист
Вікова група, р.
<30 31-35 36-40 41-42 43-44
1-3
100 86 66 50 30
45 52 38 25 11
4-5
100 86 86 73 35
60 45 41 50 30
6-8
67 53 47 29 41
67 53 47 29 41
>8
100 100 100 100 100
48 61 45 56 66
Примітка: «жирний» кегль – частка пацієнтів з принаймні одним еуплоїдним ембріоном, %;
«курсив» - частка еуплоїдних ембріонів, %.
Микитенко Д. О. Прогноз отримання еуплоїдних ембріонів у програмах ДРТ із застосуванням ПГС / Д. О. Микитенко, К. В. Лаврова,
Ю. В. Маслій, В. Д. Зукін // Здоровье женщины. Научно-практический журнал – 2014. - № 4 (90). – С. 164-167.

18. Заключення
1. В групах пацієнтів з множинними невдалими
спробами ДРТ та носів транслокацій найбільш
оптимальним вбачається використання методів
повногеномного скринінгу з метою проведення
преімплантаційних досліджень
2. Проведення ПГС/ПГД методами повногеномного
скринінгу є одним з методів підвищення
ефективності програм ДРТ
3. Встановлені закономірності можуть бути
використані при проведенні консультування
подружніх пар перед включенням до програм ДРТ.

19. Не так легко бути
хорошим
ембріоном…
19
Але ще важче
знайти його…..
Подяка співробітникам Клініки репродуктивної медицини «Надія»
• Лаврова Катерина, к.б.н., лабораторія молекулярної діагностики
• Мазур Павло, лабораторія ембріології
• Нагорний Віктор, лабораторія ембріології