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Huanglongbing dos citros

        Marcos A. Machado
    Centro de Citricultura Sylvio Moreira
           Instituto Agronômico
             Cordeirópolis, SP
      marcos@centrodecitricultura.br
Huanglongbing dos citros: nomes

•    Taiwan: likubin (decline)
•    Índia: dieback
•    Filipinas: leaf mottle
•    Indonésia: vein phloem degeneration
•    África do Sul: greening ou yellow branch
•    China: huang (amarelo) long (dragão) bing
     (doença)
I Simpósio de Proteção de Plantas


               Huanglongbing dos citros: importância

    Flórida
    ASIÁTICO




                       Estado de
                       Minas Gerais,
                       em 2006

Estado do
Paraná, em
2007




                                              Cortesia: Fundecitrus
Huanglongbing dos citros: sintomas
Folhas
         Clorose difusa      Clorose generalizada




    Suberização da nervura     Mosqueamento
Huanglongbing dos citros: sintomas
Frutos
  Feixes amarelos     Redução de tamanho




 Sementes abordadas     Formato irregular
Huanglongbing dos citros:
                     sintomas
      Sintomas na Planta Inteira
       Morte ponteiros




                                       ´Dragão´
           Declínio geral   Desfolha                               ´Dragão´




Desfolha




                                            • Queda de frutos
                                                  Declínio geral
´Dragão Amarelo´




                   Foto: E.F.Carlos
Huanglongbing dos citros: sintomas
        Sintomas Foliares Semelhantes
  CVC
                          Gomose


                                    Pragas

            Zn-/Blight




                         Rubelose




                CTV
Huanglongbing dos citros: sintomas
  Sintomas Foliares Semelhantes




Clorose assimétrica   Clorose simétrica
(mosqueado)
Huanglongbing dos citros: danos

  •    Queda de folhas
  •    Queda de frutos
  •    Reduz produtividade
  •    Afeta a qualidade dos frutos
  •    Declínio geral da planta
  •    Morte
Huanglongbing dos citros: etiologia
•    Bactéria Gram-negativa
•    Restrita ao floema
•    Cultivada em 2009 (Phytopatology)
•    3 espécies:
     –  Candidatus Liberibacter africanus
     –  Ca. L. asiaticus
     –  Ca. L. americanus
Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico




 Nelson Wulff
Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico




 16S rDNA
Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico


                               Ca. L. asiaticus
Sonda Taqman




                                                      16S rDNA
                         Ca. L. americanus




                               f (PCR) = 2*c (até fase linear)
                               ∆Ct = CtA – CtB
                               Log (quantificação)
                               DesPad         CV%
                               Produto menor, mais eficiente
Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico
Huanglongbing dos citros:
      transmissão
Candidatus Liberibacter spp: hospedeiros experimentais
Transmissão da bactéria de citros para Catharantus roseus e tabaco (Nicotiana
      tabacum) por Cuscuta
Candidatus Liberibacter spp: hospedeiros experimentais


  Enriquecimento da bactéria : título




  Concentração de Liberibacter: 8X maior em vinca que citros
Candidatus Liberibacter spp.


           Aquisição e multiplicação da bactéria no vetor
                                               Dias de alimentação

                                        18S        20      7    0




             ∆Ct = 37 – 31 = 6 cycles = 26 = 64 x in 20 days

                    0   20
Candidatus Liberibacter spp.

  Distribuição da bactéria na planta


                                       A) Ramo dragão

  C) Cloroses
  assimétricas

                                                    B) Cloroses
                                                    assimétricas




                                                         E) Raízes


D) Ramos
sem sintomas                                            foto: E.F.Carlos
Candidatus Liberibacter spp.

Distribuição da bactéria na planta
Dragão amarelo      Clorose assimétrica    Sem sintoma
                                                                         Experimento:
 A                   BeC                    D
                                                                         -5 plantas
                                                                         -2 reações/amostra
                                                                         -reações duplex (18S
                                                                         +Ca.L.am.)



                                                   E.F.Carlos

  Sonda: 18S        Sonda: Ca. L. americanus



                               A
                               B            D
                               C


                                                                Folhas
                                                                assintomáticas
                                                                podem ser fonte da
                                                                bactéria

∆Ct = CtD – CtABC = 42 – 31 = 11 ciclos:        ABC > D             2*11 = 2048 x
Candidatus Liberibacter spp.


  Distribuição de espécies de Ca. Liberibacter em São Paulo
Huanglongbing dos citros: resistência varietal
 Hospedeiros




                                     Conclusões:
                                 ausência de resistência
Huanglongbing dos citros: epidemiologia

Distribuição no Estado de São Paulo




                                           Fundecitrus
Huanglongbing dos citros: epidemiologia

Progresso do HLB no Estado de São Paulo




                                           Fundecitrus
Epidemiologia (“efeitoSimpósio de Proteção de Plantas
                      I
                        vizinho”)
Huanglongbing dos citros: epidemiologia




                                              Fundecitrus
Huanglongbing dos citros: pesquisa

-    Diagnóstico: precoce e confiável
-    Patógeno: cultivo e genoma
-    Transmissão por sementes (?)
-    Prevalência de Ca. L. asiaticus
-    Vetor: biologia, ninfas x adultos na aquisição
-    Controle biológico x controle químico
-    Repelentes do vetor
-    Hospedeiro: plantas geneticamente modificadas
-    Epidemiologia
Huanglongbing dos citros: manejo



                                             Plantas resistentes
                                             •  Seleção massal
                                             •  Melhoramento
                                             •  Transgenia
Alteração do ambiente:
•  Nutrição
•  Adensamento
•  Irrigação
•  Porta-enxerto
                                                     Controle da bactéria
                                                     •  Antibióticos
                                                     •  Redução do inóculo




                         Controle do vetor
                         •  Biológico
                         •  Físico
                         •  Químico
Huanglongbing dos citros: manejo
     Redução da fonte de inóculo e da população do vetor
-  Mudas sadias
       -    Fazer amostragens das mudas antes de sair do viveiro (RT-qPCR)
-  Erradicação de plantas doentes
       -    Intensificar as vistorias e erradicação no outono/ inverno para que
            a vegetação da primavera não sirva como fonte de inóculo
-  Início de controle com baixa incidência
-  Inspeções mais frequentes e manejo diferencial de psilídeos em
   áreas com maior incidência de HLB (bordas, baixadas, pequenos
      talhões, plantios novos, vizinhos descuidados...)
       -  Coletar psilídeos de áreas problema e testar para Liberibacter
            -  Caso positivo: intensificar o controle do inseto
-     Procurar saber se há gradiente de intensidade da doença
      (função da predominância do vento, vizinho descuidado etc.)
Huanglongbing dos citros: manejo


-  Fazer vistorias em pomares velhos teoricamente com baixo
   nível de infecção
-  Aumentar o número de vistorias na parte alta da planta (para
   detectar infecções iniciais/ primárias)
-  Manter um rígido controle do psilídeo (outono, inverno) e
   durante brotação intensa (primavera)
-  Monitorar a presença de ninfas (quando presentes, utilizar
   produtos que as controlem)
-  Se mudas são disponíveis e se possível manejo de replantas –
   melhor replantar
-  Reformas com plantio adensado
Huanglongbing dos citros: legislação


-  Praga quarentenária A2
-  IN 10: diagnóstico de planta individual, inspeção, coleta,
   diagnóstico sob responsabilidade do Governo.
-  IN 32: diagnóstico de planta individual, inspeção, coleta
   e diagnóstico sob responsabilidade de produtor e do
   Governo
-  IN 53: diagnóstico por talhão, nota de corte (28 %),
   inspeção, coleta e diagnóstico sob responsabilidade de
   produtor. Governo tem ação de fiscalização.




  HLB é uma doença de manejo
Huanglongbing dos citros

O que o HLB já trouxe à citricultura?
Huanglongbing dos citros


O que a citricultura necessita para sobreviver
                     ao HLB?

  Ações rápidas de supressão da doença
(urgência de curtíssimo prazo)

    Eficiente pacote tecnológico de manejo
(curto a médio prazo)

  Variedades tolerantes ou resistentes (longo
prazo)
Huanglongbing dos citros:
      é possível prevenir?

 Monitorar o que?

  - Plantas com sintomas: a doença já está
  presente há pelo menos um a dois anos.
  - Matrizes e viveiros.
  - Psilídeos infectivos: a doença pode estar em
  fase inicial ou ainda não se estabeleceu.
 Como monitorar?

- Levantamento amostral e teste com           PCR
(Infra-estrutura local para diagnóstico).
Obrigado


marcos@centrodecitricultura.br

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Hlb manejo e desafios

  • 1. Huanglongbing dos citros Marcos A. Machado Centro de Citricultura Sylvio Moreira Instituto Agronômico Cordeirópolis, SP marcos@centrodecitricultura.br
  • 2. Huanglongbing dos citros: nomes •  Taiwan: likubin (decline) •  Índia: dieback •  Filipinas: leaf mottle •  Indonésia: vein phloem degeneration •  África do Sul: greening ou yellow branch •  China: huang (amarelo) long (dragão) bing (doença)
  • 3. I Simpósio de Proteção de Plantas Huanglongbing dos citros: importância Flórida ASIÁTICO Estado de Minas Gerais, em 2006 Estado do Paraná, em 2007 Cortesia: Fundecitrus
  • 4. Huanglongbing dos citros: sintomas Folhas Clorose difusa Clorose generalizada Suberização da nervura Mosqueamento
  • 5. Huanglongbing dos citros: sintomas Frutos Feixes amarelos Redução de tamanho Sementes abordadas Formato irregular
  • 6. Huanglongbing dos citros: sintomas Sintomas na Planta Inteira Morte ponteiros ´Dragão´ Declínio geral Desfolha ´Dragão´ Desfolha • Queda de frutos Declínio geral
  • 7. ´Dragão Amarelo´ Foto: E.F.Carlos
  • 8. Huanglongbing dos citros: sintomas Sintomas Foliares Semelhantes CVC Gomose Pragas Zn-/Blight Rubelose CTV
  • 9. Huanglongbing dos citros: sintomas Sintomas Foliares Semelhantes Clorose assimétrica Clorose simétrica (mosqueado)
  • 10. Huanglongbing dos citros: danos •  Queda de folhas •  Queda de frutos •  Reduz produtividade •  Afeta a qualidade dos frutos •  Declínio geral da planta •  Morte
  • 11. Huanglongbing dos citros: etiologia •  Bactéria Gram-negativa •  Restrita ao floema •  Cultivada em 2009 (Phytopatology) •  3 espécies: –  Candidatus Liberibacter africanus –  Ca. L. asiaticus –  Ca. L. americanus
  • 12. Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico Nelson Wulff
  • 13. Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico 16S rDNA
  • 14. Candidatus Liberibacter spp: diagnóstico Ca. L. asiaticus Sonda Taqman 16S rDNA Ca. L. americanus f (PCR) = 2*c (até fase linear) ∆Ct = CtA – CtB Log (quantificação) DesPad CV% Produto menor, mais eficiente
  • 17. Candidatus Liberibacter spp: hospedeiros experimentais Transmissão da bactéria de citros para Catharantus roseus e tabaco (Nicotiana tabacum) por Cuscuta
  • 18. Candidatus Liberibacter spp: hospedeiros experimentais Enriquecimento da bactéria : título Concentração de Liberibacter: 8X maior em vinca que citros
  • 19. Candidatus Liberibacter spp. Aquisição e multiplicação da bactéria no vetor Dias de alimentação 18S 20 7 0 ∆Ct = 37 – 31 = 6 cycles = 26 = 64 x in 20 days 0 20
  • 20. Candidatus Liberibacter spp. Distribuição da bactéria na planta A) Ramo dragão C) Cloroses assimétricas B) Cloroses assimétricas E) Raízes D) Ramos sem sintomas foto: E.F.Carlos
  • 21. Candidatus Liberibacter spp. Distribuição da bactéria na planta Dragão amarelo Clorose assimétrica Sem sintoma Experimento: A BeC D -5 plantas -2 reações/amostra -reações duplex (18S +Ca.L.am.) E.F.Carlos Sonda: 18S Sonda: Ca. L. americanus A B D C Folhas assintomáticas podem ser fonte da bactéria ∆Ct = CtD – CtABC = 42 – 31 = 11 ciclos: ABC > D 2*11 = 2048 x
  • 22. Candidatus Liberibacter spp. Distribuição de espécies de Ca. Liberibacter em São Paulo
  • 23. Huanglongbing dos citros: resistência varietal Hospedeiros Conclusões: ausência de resistência
  • 24. Huanglongbing dos citros: epidemiologia Distribuição no Estado de São Paulo Fundecitrus
  • 25. Huanglongbing dos citros: epidemiologia Progresso do HLB no Estado de São Paulo Fundecitrus
  • 26. Epidemiologia (“efeitoSimpósio de Proteção de Plantas I vizinho”) Huanglongbing dos citros: epidemiologia Fundecitrus
  • 27. Huanglongbing dos citros: pesquisa -  Diagnóstico: precoce e confiável -  Patógeno: cultivo e genoma -  Transmissão por sementes (?) -  Prevalência de Ca. L. asiaticus -  Vetor: biologia, ninfas x adultos na aquisição -  Controle biológico x controle químico -  Repelentes do vetor -  Hospedeiro: plantas geneticamente modificadas -  Epidemiologia
  • 28. Huanglongbing dos citros: manejo Plantas resistentes •  Seleção massal •  Melhoramento •  Transgenia Alteração do ambiente: •  Nutrição •  Adensamento •  Irrigação •  Porta-enxerto Controle da bactéria •  Antibióticos •  Redução do inóculo Controle do vetor •  Biológico •  Físico •  Químico
  • 29. Huanglongbing dos citros: manejo Redução da fonte de inóculo e da população do vetor -  Mudas sadias -  Fazer amostragens das mudas antes de sair do viveiro (RT-qPCR) -  Erradicação de plantas doentes -  Intensificar as vistorias e erradicação no outono/ inverno para que a vegetação da primavera não sirva como fonte de inóculo -  Início de controle com baixa incidência -  Inspeções mais frequentes e manejo diferencial de psilídeos em áreas com maior incidência de HLB (bordas, baixadas, pequenos talhões, plantios novos, vizinhos descuidados...) -  Coletar psilídeos de áreas problema e testar para Liberibacter -  Caso positivo: intensificar o controle do inseto -  Procurar saber se há gradiente de intensidade da doença (função da predominância do vento, vizinho descuidado etc.)
  • 30. Huanglongbing dos citros: manejo -  Fazer vistorias em pomares velhos teoricamente com baixo nível de infecção -  Aumentar o número de vistorias na parte alta da planta (para detectar infecções iniciais/ primárias) -  Manter um rígido controle do psilídeo (outono, inverno) e durante brotação intensa (primavera) -  Monitorar a presença de ninfas (quando presentes, utilizar produtos que as controlem) -  Se mudas são disponíveis e se possível manejo de replantas – melhor replantar -  Reformas com plantio adensado
  • 31. Huanglongbing dos citros: legislação -  Praga quarentenária A2 -  IN 10: diagnóstico de planta individual, inspeção, coleta, diagnóstico sob responsabilidade do Governo. -  IN 32: diagnóstico de planta individual, inspeção, coleta e diagnóstico sob responsabilidade de produtor e do Governo -  IN 53: diagnóstico por talhão, nota de corte (28 %), inspeção, coleta e diagnóstico sob responsabilidade de produtor. Governo tem ação de fiscalização. HLB é uma doença de manejo
  • 32. Huanglongbing dos citros O que o HLB já trouxe à citricultura?
  • 33. Huanglongbing dos citros O que a citricultura necessita para sobreviver ao HLB?   Ações rápidas de supressão da doença (urgência de curtíssimo prazo)   Eficiente pacote tecnológico de manejo (curto a médio prazo)   Variedades tolerantes ou resistentes (longo prazo)
  • 34. Huanglongbing dos citros: é possível prevenir? Monitorar o que? - Plantas com sintomas: a doença já está presente há pelo menos um a dois anos. - Matrizes e viveiros. - Psilídeos infectivos: a doença pode estar em fase inicial ou ainda não se estabeleceu. Como monitorar? - Levantamento amostral e teste com PCR (Infra-estrutura local para diagnóstico).