1. Citomegalovirus (CMV) Infezione primaria Infezione nei soggetti immunodepressi Infezione congenita

3. Il genoma del CMV è di 240 Kb diviso in 2 regioni U L e U S fiancheggiate da: sequenze terminali ripetute o internamente invertite 0,8kb TR L TR S 2 Kb IR L IR S U L 175Kb 11Kb Il genoma presenta 200 ORF 134 nella regione UL 36 nella regione US

4. Inclusioni citomegaliche in cellule infette

8. La prevalenza negli adulti varia a seconda dello stato socio-economico della popolazione

12. Metodologie Diagnostiche -Ricerca Anticorpi: IgG-IgM -Ricerca virale diretta: PCR – IF -Ricerca virale indiretta: Coltura , Istologia Diagnostica sierologica avanzata : Western blot IgM, Avidity IgG

13. Citomegalovirus Infezione nei soggetti immunodepressi: trapiantati e HIV positivi

15. Slide Fasi delle infezioni opportunistiche nei riceventi HSCT Haemopoetic stem cell transplantation

16. Sequenza delle infezioni dopo trapianto d’ organo Fishman, J. A. et al. N Engl J Med 1998;338:1741-1751

17. Infezione latente Infezione attiva Effetti diretti Effetti indiretti Sindrome virale Invasione di organi Nefrite-epatite ecc immunosoppressione Infezioni opportunistiche Effetti sul trapianto Rigetto acuto o cronico Altri effetti

23. pp65 su PMN Ab anti p65 Coniugati con Perossidasi Ab anti p65 marcati con Fluorescina > Sensibilità

25. Relazione temporale tra comparsa dei sintomi e test diagnostici Storch: Diagnostic Virology, 2000

26. Effetto paradosso della ricerca della pp65 in corso di terapia Il monitoraggio della terapia mediante ricerca della p65 ha fatto erroneamente ipotizzare la comparsa di farmacoresistenza

27. CMV DNA: Real time PCR La Real Time PCR ha un ampio range diagnostico, una elevata sensibilità. False positività praticamente assenti

28. CMV DNA (Real Time PCR) e pp65 Mengelle C et al J Medical Virology 69:225–231 (2003) Gruppo 1: negativi Gruppo 2: <50/200 000 Gruppo 3: > 50/200 000

29. Quale compartimento ? La ricerca del CMV DNA sul sangue intero aumenta la sensibilità della metodologia Cut off più alto

30. Citomegalovirus Infezione congenita e perinatale

33. Congenital CMV and Pregnancy

34. Congenital CMV and Pregnancy

35. Infezioni congenite sintomatologia asintomatici 10-15% 90% 5%CID 5% quadro atipico 10% segni tardivi sordità,ritardo mentale Cytomegalic inclusion disease (CID) Petecchie 80% Ittero-epatosplenomegalia 70% Corioretinite 12% Ritardo gestazionale 40% Morte 30%

36. Cytomegalic inclusion disease (CID)

38. Diagnosi di infezione da CMV in gravidanza IgM Le gravide IgM positive devono essere considerate a rischio I test diagnostici disponibili hanno circa il 30% di discordanza

40. A confirmatory test for CMV-IgM New immunoblot 1) Contains both structural and nonstructural proteins 2) Agrees with consensus of different ELISAs 3) Is easy to standardize 4) Is easy to interpret rp150 rp52 rp130 CKS rp38 Purified native viral proteins Recombinant proteins Vp28 Vp65 Vp82 Vp150 

41. Antibody affinity: the strength of a single antigen–antibody bond Antibody avidity: the strength with which a multivalent antibody binds a multivalent antigen high-affinity – high attraction low-affinity – low attraction Good fit Poor fit

42. Weeks after beginning of symptoms Avidity index (%) 70 0 60 50 40 30 20 10 0 5 10 15 20 25 30 35 Congenital CMV infections Low IgG avidity is linked to primary infection

43. Transmission of CMV through the placenta barrier and infection of the fetus Infected mother viraemia infection of placenta trophoblasts Infection of fetal endothelial cells Viral replication in target organs (kidney) Fetal viruria Virus in amniotic fluid Infection of the oropharynx Fetal viraemia

44. T. Lazzarotto et al. / Journal of Clinical Virology 41 (2008) 192–197 Rapporto tra CMV DNA nel LA ed esito della gravidanza

45. CMV in gravidanza Schema diagnostico

47. Le infezioni congenite da CMV si distinguono da quelle neonatali o perinatali se si dimostra l’assenza o meno di eliminazione virale ( PCR o coltura) nelle prime due settimane di vita Infezioni intrauterine,perinatali,neonatali: diagnosi

48. Citomegalovirus (CMV) Infezione primaria