Xac dinh ham luong protein trong sua

Phương pháp xác ñịnh hàm
Th c hành phân tích th c ph m
Trư ng đ i h c công nghi p TP.H Chí Minh
Khoa công ngh hóa h c
LOGO
lượng protein trong sữa
GVHD: Th.s Tr n Nguy n An Sa
SVTH: Nguy n Th Ng c Hân 10078541
Trương Công Hoàng 10051801

Nội dung
M t s đ nh nghĩa
M c đích xác đ nh
Các phương pháp xác đ nh
GVHD Trần Nguyễn An Sa
7/24/2017
Các phương pháp xác đ nh
2

1. Một số ñịnh nghĩa
Đ nh lư ng protein thô b ng cách xác đ nh lư ng nitrogen toàn
ph n và k t qu nhân v i 6,25.
Nitơ t ng s : T t c các d ng nitơ có trong cơ th hay trong
các mô.
7/24/2017
các mô.
Nitơ t ng s = Nitơ protein + Nitơ phi protein.
Nitơ protein: Nitơ có trong thành ph n amino acid c a protein.
3

1. Một số ñịnh nghĩa
Nitơ phi protein: nitơ không có trong thành ph n protein.
Đ m t ng s = Nitơ t ng s x h s chuy n đ i
7/24/2017 4

2. Mục ñích xác ñịnh
D a trên cơ s đ nh lư ng nitrogen đ đ nh lư ng và đánh giá đ
tinh s ch c a ch ph m protein.
7/24/2017 5

3. Các phương pháp xác ñịnh
BB
CCAAKjeldahl
Lowry
Bradford
7/24/2017
PhươngPhương pháppháp
EE
CC
DD
AA Bradford
H ng ngo i Quang ph
UV
6

BB
AA
Nguyên t c – PTPƯ
Tóm t t quy trình
Phương
pháp
Kjeldahl
3. Các phương pháp xác ñịnh
7/24/2017
DD
CC
Tóm t t quy trình
Công th c tính
Lưu ý
7

3.1 Phương pháp Kjeldahl
Nguyên tắc – PTPƯ
Protein trong s a k t t a b ng acid TCA. L c t a
Vô cơ hóa m u : b ng H2SO4 đ c nhi t đ cao và có
ch t xúc tác:
H2SO4 H2O + SO2 +1/2O2
2NH3 + H2SO4 (NH4)2SO4
Chưng c t đ m: đu i NH3 ra kh i dung d ch b ng NaOH và
h p thu b ng dung d ch H3BO3 bão hòa:
(NH4)2SO4 + 2NaOH Na2SO4 + 2NH3 + H2O
NH3 + H3BO3 NH4H2BO3
7/24/2017
8

Nguyên tắc – PTPƯ
Chu n đ dung d ch b ng HCl v i h n h p ch th metyl đ
và bromocresol xanh. Đi m d ng: xanh chàm tía nh t
H2BO3
─ + H+ H3BO3
Ho c cho NH3 sinh ra h p thu vào m t lư ng chính xác
H2SO4 dư và chu n lư ng dư H2SO4 b ng NaOH v i ch
th Tashiro:
NH3+ H2O + H2SO4 (NH4)2SO4 + H2O + H2SO4 dư
H+ + OH─ H2O
Đi m d ng : tím h ng xanh lá m7/24/2017
9

Các chỉ thị có thể sử dụng: có pT = 5- 5,5
Tashiro (0,15g MR + 0,05g methylenxanh)/100ml ethanol,
pT= 5,4
MR: pT = 5, vàng – đMR: pT = 5, vàng – đ
Bromocresol xanh : KĐM = 3,8 – 5,4 ; vàng – xanh bi n
7/24/2017
10

Tóm t t quy trình
Chu n l i HCl 0,1N b ng Na2B4O7 0,1N
Pha dung d ch Na2B4O7.10H2O : cân 3,814g đ nh m c
200ml.T lư ng cân tính l i n ng đ Na2B4O7200ml.T lư ng cân tính l i n ng đ Na2B4O7
Pha HCl : hút 1,7ml HCl đ c đ nh m c 200ml
7/24/2017
11

Tóm t t quy trình
Chu n l i HCl 0,1N b ng Na2B4O7 0,1N
10ml Na2B4O7
erlenerlen
Chu n b ng
HCl v a pha
2 gi t MR
D ng: vàng
đ
Ghi VHCl
7/24/2017
12

Tóm t t quy trình
Giai đo n k t t a protein
7/24/2017 GVHD Tr n Nguy n An Sa13

Giai đo n vô vơ hóa m u
7/24/2017 GVHD Tr n Nguy n An Sa
14

Giai đo n chưng c t

Giai đo n chu n đ

Công th c tính
H p thu b ng H3BO3
Hàm lư ng protein: %protein = %Nx6,38
7/24/2017
17

Công th c tính
H p thu b ng H2SO4
Hàm lư ng protein: %protein = %Nx6,38
7/24/2017
18

Lưu ý:
Th n tr ng đ i v i TCA CCl3COOH, đ c,tính h y ho i, d
ch y, cháy , tránh ánh sáng và m. Nên đeo kính b o v và
găng tay.
NaOH, H SO đ c gây b ng.NaOH, H2SO4 đ c gây b ng.
Xúc tác CuSO4 cũng như K2SO4 nâng nhi t đ vô cơ hóa
m u.
Dung d ch chu n HCl 0.1N đư c chu n l i b ng Na2B4O7.
Ki m tra đáy c a bình kjeldahl trư c khi cho m u và thu c
th .
7/24/2017
19

Nguyên t c
Đo màu c a s n ph m kh c a PMo -phosphowolframate
(thu c th Folin – Ciocalteau) v i ph c h p Cu – protein.
Ph c màu xanh t o thành có th đo bư c sóng 675 nm.
3.2 Phương pháp lowry
Ph c màu xanh t o thành có th đo bư c sóng 675 nm.
Cư ng đ màu c a h n h p ph n ng t l thu n v i n ng đ
protein.
D a vào đ th chu n protein (albumin) ta có th tính đư c hàm lư ng
Protein trong m u nghiên c u.

3.2 Phương pháp lowry
Ph m vi ng d ng
• Xác đ nh đư c nhi u lo i protein khác nhau.
• Đ nh y cao, cho phép phát hi n đư c protein trong dung d ch
n ng đ 1g/ml.
• Cư ng đ màu tùy thu c nhi u vào lo i protein.• Cư ng đ màu tùy thu c nhi u vào lo i protein.
• Cho k t qu chính xác khi xác đ nh protein đã đư c tinh s ch.

3.3 Phương pháp Bradford
Phương pháp Bradford
Nguyên t c: trích ly protein t m u b ng dung môi trích ly,
d a trên s thay đ i bư c sóng h p thu c c đ i c a
thu c nhu m Coomassie Brilliant Blue khi t o ph c h p v ithu c nhu m Coomassie Brilliant Blue khi t o ph c h p v i
protein. Khi chưa k t h p v i protein λmax = 465nm; khi k t
h p v i protein λmax = 595nm. Đo đ h p thu => hàm
lư ng protein.
7/24/2017
22

7/24/2017
23

Cách ti n hành: xây d ng m t đư ng chu n v i dung
d ch protein chu n đã bi t trư c n ng đ . Dung d ch
protein chu n thư ng là bovine serum albumin (BSA).protein chu n thư ng là bovine serum albumin (BSA).
Sau khi cho dung d ch protein vào dung d ch thu c
nhu m, màu s xu t hi n sau 2 phút và b n t i 1 gi . Ti n
hành đo m t đ quang h n h p dung d ch b ng máy quang
ph k .
7/24/2017
24

8
7/24/2017
25

Dung d ch thu c th Bradford: dung d ch thu c th có
thành ph n trong 1l như sau:
Coomassie Brilliant Blue: 0,05g
Methanol: 50 ml
Phosphoric acid 85%:100 ml
7/24/2017
26

Tính k t qu :
V đư ng tuy n tính gi a n ng đ protein (µg/ml) v i m t
đ quang A595
D a vào phương trình đư ng tuy n tính gi a n ng đ
protein (µg/ml) v i m t đ quang A595 trên ta tính đư c
hàm lư ng protein P trong m u phân tích X.
7/24/2017
27

3.4 Phương pháp quang phổ UV
Các protein h p th tia c c tím c c đ i λ =280nm
do các acid amin thơm như tryptophan, tyrosine và
phenylalanine.
Nguyên t c
N u lo i protein không có h s t t thì tính n ng đ protein như sau:
N ng đ protein (mg/ml) = 1,55. A280 – 0,77. A260
Đ h p thu 280nm thay đ i tùy thu c vào lo i protein
nhưng h s t t đo đư c cho m i protein cho phép tính
n ng đ c a protein tinh s ch.

3.4 Phương pháp quang phổ UV
Không cóKhông dùng đư c cho các dung d ch có
n ng đ protein nh hơn 0.1mg/ml ho c
s ch,
n ng đ protein nh hơn 0.1mg/ml ho c
khi có m t nhi u ch t khác mà h p th
cùng m t vùng UV ho c protein trong
dung d ch huy n phù. A280/A260 th p hơn
0,6 nghĩa là dung d ch protein chưa
s ch, b l n các ch t khác.

3.1 Phương pháp hấp thu hồng ngoại
Thi t b đo h ng ngo i đ xác đ nh hàm lư ng ch t béo,
protein và lactoza c a s a, trên cơ s đo h p th b c x vùng
h ng ngo i gi a các bư c sóng đ i di n cho t ng thành ph n
c n phân tích.
Áp d ng đ i v i s a ngoài nông tr i, s a đã ch bi n v i đi u
ki n là thi t b ph i đư c hi u chu n.
7/24/2017
30

Nguyên t c:
Đo lư ng b c x đư c h p th b i nhóm amit th hai c a
các liên k t peptit bư c sóng 6,5 µm đ xác đ nh hàm
lư ng protein.
Đánh giá hàm lư ng c a protein đư c b ng cách đ i chi u
v i lư ng ánh sáng h ng ngo i h p th do nư c cùng
bư c sóng ho c do s a bư c sóng khác mà đó ch
h p th nh h p ch t đang đo.
7/24/2017
31

Y u t nh hư ng đ n đ chính xác phép đo:
Đ tuy n tính
Hi u qu làm s ch cuvet
Đ ng hóa m u
Hơi nư c bên trong d ng c đo
Thành ph n s a
S bi n đ i v nitơ phi protein (NPN)
S bi n đ i v axit nitric
S phân gi i lipit
7/24/2017
32

Xac dinh ham luong protein trong sua

Recomendados

Recomendados

Más contenido relacionado

La actualidad más candente

La actualidad más candente (20)

Similar a Xac dinh ham luong protein trong sua

Similar a Xac dinh ham luong protein trong sua (20)

Más de Nguyen Thanh Tu Collection

Más de Nguyen Thanh Tu Collection (20)

Último

Último (20)

Xac dinh ham luong protein trong sua