O documento discute os requisitos nutricionais e condições de crescimento de bactérias. Ele explica que bactérias precisam de fontes de carbono, nitrogênio, energia, água e íons para crescimento. Também descreve diferentes tipos de meios de cultura, temperaturas e condições ideais para o cultivo de bactérias.
2. Requerimento nutricional
• As bactérias necessitam de uma FONTE DE
CARBONO E NITROGENIO, FONTE DE
ENERGIA, ÁGUA e vários ions para seu
crescimento
2
CULTURA = ISOLAMENTO DE
GERMES
DIAGNÓSTIC
O DAS
DOENÇAS
3. Fontes de Nutrientes
3
Carbono: CO2, carboidratos,
aminoácidos, etc.
Nitrogênio: N2, NH3 (amonia),
NO3(Nitrato), aminoácidos, etc.
Enxofre: SO4(sulfato),
cisteína(proteína), vitaminas, etc.
4. Fontes de Nutrientes
4
FÓSFORO: PO4 e nucleotídeos.
Minerais: Fe, Ca, Mg, Mn, Zn, K,
Na, Cl, etc.
Fatores de crescimento:
vitaminas, aminoácidos,
nucleosídeos. (citosina, adenina,
guanina, timina ou uracila)
5. CONDIÇÕES DE CULTIVO
• TEMPERATURA
• D.B.O (Demanda Bioquímica de
Oxigênio)
• TEMPO DE INCUBAÇÃO
• PRESSÃO OSMÓTICA
• UMIDADE
• pH
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6. TEMPERATURA DE INCUBAÇÃO
•Psicrófilos = 12 a 17ºC
•Mesófilos = 30 a 40 ºC
•Termófilos = 57 a 87ºC
6
Arqueobacter = 250 – 350ºCArqueobacter = 250 – 350ºC
Psicrotrófico = deteriorizaçãoPsicrotrófico = deteriorização
dos alimentosdos alimentos
7. D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
• FACULTATIVAS: Staphylococcus sp.
• ANAERÓBIOS: Clostridium tetani
• AERÓBIOS: M. tuberculose
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CAMPINOFÍLICOS = Cresce em
CO2
9. D.B.O – Demanda Bioquímica de O2
• MICROAERÓFILAS: Campylobacter jejuni,
Neisseria meningitide
• AEROTOLERANTES: Enterococcus, faecalis
9
CAMPNOFÍLICOS = Cresce em CO2
10. PRESSÃO OSMÓTICA
MEIO
• ISOTÔNICO
• HIPOTÔNICO
• HIPERTÔNICO
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Bactérias halofílicas obrigatórias ( 30 % )Bactérias halofílicas obrigatórias ( 30 % )
Bactérias halofílicas facultativas ( 2% )Bactérias halofílicas facultativas ( 2% )
Ágar Chapman-Stone
para S. aureus
Ambientes com alta concentração de sais
11. TEMPO DE INCUBAÇÃO
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Tempo de Geração=Tempo de Geração= Tempo necessário paraTempo necessário para
uma célula se dividir (dobro)]uma célula se dividir (dobro)]
Geralmente 1 a 3Geralmente 1 a 3
HH
((E. coliE. coli 20 min.)20 min.)
RepresentaçãoRepresentação
logarítma ( Yx)logarítma ( Yx)TG
12. CRESCIMENTO E REPRODUÇÃO
• Crescimento Microbiano: É o aumento do
número de indivíduo e não o aumento de
tamanho de uma determinada célula.
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REPRODUÇÃOREPRODUÇÃO: É: É
a perpetuação dasa perpetuação das
espécies deespécies de
bactérias pelobactérias pelo
processo de divisãoprocesso de divisão
binária, Cisciparidadebinária, Cisciparidade
14. 14
No de bactérias/ml
Tempo
Fase de latência
Fase de crescimento
Exponencial (fase log)
CURVA TÍPICA CRESCIMENTO BACTERIANOCURVA TÍPICA CRESCIMENTO BACTERIANO
Fase estacionária
Fase de decréscimo do
número de bactérias (fase
lag)
17. MEIOS DE CULTURA
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São misturas de nutrientesSão misturas de nutrientes
necessários ao crescimentonecessários ao crescimento
microbiano que deve conter amicrobiano que deve conter a
fonte de energia e de todos osfonte de energia e de todos os
elementos imprescindíveis àelementos imprescindíveis à
vida das células.vida das células.
18. MEIOS DE CULTURA
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A formulação deve levar emA formulação deve levar em
conta o tipo nutritivo ao qualconta o tipo nutritivo ao qual
o microorganismo pertence,o microorganismo pertence,
considerando – se a fonte deconsiderando – se a fonte de
energia, o substrato doadorenergia, o substrato doador
de elétrons e a fonte dede elétrons e a fonte de
carbono.carbono.
19. FATORES DE CRESCIMENTO
• Também é imprescindível acrescentar
ao meio vitaminas, cofatores e
aminoácidos quando estes compostos
não são sintetizados pelo
microorganismo que se deseja
cultivar.
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20. Tipos de Meios de Cultura
Meio Quimicamente Definido
Meio AR-103
Meio Complexo. Ex. ágar sangue
Meio Seletivo Ex. ágar Chapman
Stone, ágar EMB
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21. Tipos de Meios de Cultura
Meio Diferencial. Ex. ágar SS
Meio de Enriquecimento. Caldo Verde
Brilhante
Meio de Transporte. Ex. Meio de
Stuart
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22. MEIOS DE TRANSPORTE
• MEIO DE STUART
• CARY BLAIN = Transporte para fezes
• ROSA DUDET = Transporte para
Micoplasma
• MEIO DE LIGNIER
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23. COPROCULTURA
• ÁGAR E.M.B (Eosina Blue Metioleno)
• ÁGAR MAC CONKEY
• ÁGAR SS ( Salmonella-Shigella)
• CALDO TETRATIONATO
• SKIRROW = CAMPYLOBACTER
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24. UROCULTURA
• ÁGAR CLED (Contagem de colônias)
• ÁGAR MAC CONKEY
• BROLACIN
• ÁGAR SANGUE
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25. CULTURA DE SECREÇÕES
• ÁGAR SANGUE
• ÁGAR CHOCOLATE
• ÁGAR THAYER MARTIN (GONOCOCOS)
• CALDO BHI
• CALDO TIOGLICOLATO (anaeróbios)
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26. CULTURA PARA ANAEROBIOS
• CALDO TIOGLICOLATO
• Agar Sangue para Anaeróbios (ASA)
• ASA + álcool feniletila,
• ASA + kanamicina + vancomicina
• Agar cicloserina-cefoxitina—frutose,
Caldo tioglicolato enriquecido
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27. CULTURA PARA TUBERCULOSE
• Descontaminação prévia (Petrof,
Lauril sulfato de sódio)
• Meio de Lowenstein-Jensen: ovo
coagulado
• Middlebrook 7H10 - Meio à base de
ágar
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34. ÁGAR SANGUE
• O sangue é adicionado a temperatura
de 40ºC no ágar base ou ágar Mueller-
Hinton. As hemácias são preservadas
íntegras
Meio de enriquecimento
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35. ÁGAR CHOCOLATE
• O SANGUE QUANDO AQUECIDO A 56ºC
LIBERA DIVERSAS SUBSTÂNCIAS QUE
FUNCIONAM COMO FATORES DE
CRESCIMENTO
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Cultura para Neisserias
36. ÁGAR SS (Salmonella & Shigella)
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AS COLÔNIAS
NEGRAS
INDICAM A
PRODUÇÃO DE
H2S PELAS
SALMONELLAS
38. 38
1- Morfologia das colônias;
2-Forma, Coloração de Gram,
Arranjo, Motilidade, Catalase;
3-Modo de fermentação da glicose
(carboidratos) e perfil bioquímico;
4-Fatores de crescimento;
5-Disponibilidade de oxigênio;
CARACTERÍSTICAS FENOTÍPICAS
39. 39
6-Testes de produção de gás;
7-Tolerância ao sal, pH e bile;
8-Crescimento em determinadas
temperaturas (máxima e mínima);
9-Condições do ácido láctico
produzido;
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10-Tipos de bacteriófagos;
11-Hidrólise da Arginina;
12-Formação de Acetoina
(Acetilmetilcarbinol);
13-Fermentação butilenoglicólica;
14-Tipo de hemólise;
15-Produção de polissacarídeos
extracelulares;
41. 41
16-Tipagem sorológica;
17-Presença de enzimas e
antígenos na superfície celular;
18-Perfil eletroforético de
proteínas;
19-Atividade antimicrobiana;
20-Lipídeos e constituintes da
parede celular
44. Características das Colonias
• 1.Qto ao BRILHO: TRANSPARENTE,
TRANSLUCIDA OU OPACA
• 2.Qto a COR: INCOLOR OU PIGMENTADA
• 3.Qto ao ASPECTO:VISCOSA, ÚMIDA,
FILAMENTOSA, ETC,
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63. SEMEADURA
• Princípio: Uma população microbiana,
sob condições naturais, contém muitas
espécies diferentes. Os
microbiologistas devem ser capazes de
isolar, enumerar, e identificar os
microrganismos em uma amostra, para
então classificá-los e caracterizá-los.
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65. Técnica de Esgotamento
• A mais utilizada para isolamento de
germes em meio sólido (ágar sangue,
ágar EMB, etc ), onde se utiliza uma
alça de platina, previamente flambada
e esfriada
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66. Técnica de Esgotamento
• Com a alça de platina, tocar
suavemente na amostra.
• Passar a alça sobre o meio de cultura
em movimento de zigue-zague sem
sobrepor as linha e sem recarregar a
Alça.
• Incubar as placas a 37ºC por 24 a 48
horas
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70. Espalhamento “Pour Plate”
• Consiste em fazer uma prévia diluição
da amostra e colocar em uma placa de
Petri vazia e depois derramar o meio
sobre a amostra e agitar para
homogenizar a amostra diluída com o
meio de cultura.
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Cultura de urina = Contagem de
colônias (UFC/ml)
71. Espalhamento “Pour Plate”
Fazer diluição seriada da amostra, ex. 1/10,
1/100 e 1/1000.
Colocar 1 ml de cada diluição em uma placa de
Petri estéril
Fundir 10 ml de meio sólido e refriar a 65ºC
Derramar sobre a amostra na placa e aplicar
movimentos suaves na placa para misturar a
amostra com o meio;
Esperar o meio solidificar novamente e incubar
as placas a 37ºC por 24 a 48 hora
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72. Espalhamento Pos Plate
• Consiste em colocar a amostra (diluida
ou não) sobre o meio com auxilio da
alça de platina calibrada e espalhar por
toda placa.
• Pode-se também colocar um volume
conhecido (10ul) com pipeta automática
e espalhar com alça de Drigalsky.
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74. Recomendações Para Semeadura
• Todo processo deve ser feito em ambiente limpo
e desinfectado, próximo de uma chama “azul” de
um bico de Bunsen, ou então dentro de uma
câmara de fluxo laminar;
• Alça de platina utilizada para semear, deve ser
flambada antes e depois da semeadura;
• As placas semeadas devem ser incubadas com
tampa invertida para não haver transpiração do
meio sobre a tampa
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