Gende control enfermedades abejas
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La Dra. Gende presentó sobre sustancias naturales para el control de enfermedades de las abejas como la loque americana, la varroosis y la nosemosis. Analizó aceites esenciales y extractos vegetales y sus efectos antibacterianos y acaricidas. Los resultados mostraron que sustancias como el aceite de laurel tienen actividad contra Paenibacillus larvae. También evaluó el uso de propóleos y su baja toxicidad para las abejas.
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- 4. Loque americana Nosemosis Quimioterapia Antibióticos Varroosis Acaricidas de síntesis Formulaciones comerciales disponibles o recetas caseras Alternativa natural Sustancias naturales
- 5. Sustancias naturales Aceite esencial Cortar y pesar hojas de laurel Hidrodestilación Análisis e identificación de compuestos activos
- 7. Loque americana Agente causal Género: Paenibacillus Especie: P. larvae (Genersch et al., 2006) Bacteria con la capacidad de formar esporas
- 8. Actividad antimicrobiana de sustancias naturales 300 350 400 450 CIM 500 550 600 650 EB Método de dilución seriada en caldo MYT (12,5 a 2000 ppm)
- 9. Valores de CIM y EB expresados en µg/ml para cada aceite frente a diferentes aislamientos de P. larvae. Aceites esenciales con composición mayoritaria en compuestos con núcleo bencénico. Aislamientos de Paenibacillus larvae Antimicrobiano P.l Cb P.l SdP P.l LP P.l V P.l Tp P.l Cy P.l Vv P.l MdP Anis CIM 300 300 300 300 300 300 300 300 Menor EB 600 600 600-700 600 600 500-600 600 600 CIM Canela 1 CIM 50-100 25-50 50 25 50 50 25-50 50 EB 150-200 100-150 150 150 150-200 150 150-200 150 Canela 2 CIM 350 300-350 300 350 300 300 350 300-350 EB 700 600-700 600 700 700 600-700 700 600-700 Canela 3 CIM 200 250 300 300 350 300-350 200-300 200-250 EB 450 500 500-600 600 600-700 600-700 400-600 400-500 Clavo 1 CIM 250-300 250-300 200-300 250 300 200-250 250-300 300 EB 600 700 600 600 600 500-600 600 700 Clavo 2 CIM 300 300 300 300 350 300-350 300 350 EB 600 600 600 600 600-700 600-700 600 700 Hinojo CIM 250 250 250 250 250 250 250 250 EB 500 500 450-500 500 500 500-600 600 Orégano CIM 400 400 400 350-400 400 350 400 400 EB 700 700-800 800 800 700 700-800 800 800 Tomillo 1 CIM 150 150-200 150 200 200 150 150-200 200 EB 350 350-400 350 400 350-400 300 400 400 Tomillo S[1] CIM 50-100 50-100 <50 50-100 <50 <50 50 50-100 EB 250 200 100 200 100 100 100-150 100-200 Tomillo 2 CIM 300 300 300-350 350 300 300 350 300-350 EB 800 800-900 800-1000 900 800-1000 800 900 900-1000 Tomillo C CIM 300 200-300 300 300 200 200 300 300 EB 1000 800-1000 1000 800 600 800 900 900-100 Tomillo 3 CIM 200-300 200 300 200 150-200 250-300 200 200-300 EB 600 400-500 600 450 300 600 400-450 600
- 10. Bioautografía
- 11. Bioautografía
- 12. Evaluación del método de administración
- 13. Resultados de ensayos de campo Inoculación artificial 100 control aceite esencial antibiótico 83,91±13,39 a 80 % de larvas enfermas 60 40 31,49 ±5,84 b 20 Inóculo inicial alto 19,06 ±6,43 b 0 10 15 20 25 30 35 días desde infección experimental
- 15. Análisis con propóleos in vitro Método de difusión en agar Placas con agar MYPGP + Suspensión de P. larvae en superficie del medio 20 µl del extracto Las placas se incubaron 48 hs a 35±0,5 ºC
- 16. MONITOREO 200000 12000 150000 10000 Pudo observarse: 8000 una relación entre el grado de enfermedad Nº UFC/abeja 100000 UFC/abeja 6000 diagnosticado a campo 50000 4000 y el número de UFC/abeja 2000 en las colonias. 0 0 -2000 0 1 2 3 0 1 grado de enfermedad grado de enfermedad Apiario tratado con antibiótico: Grado 0: Colmenas sin - Enmascaramiento de los signos de LA sintomatología clínica con altos - Aumento en los niveles de esporas por conteos, estado subclínico de la abeja en los apiarios. patología.
- 17. SARDEGNA Si se pudo establecer un umbral 2009-2010 3000 esporas/abeja 15000 10000 UFC/bee 5000 0 apiary number
- 18. Análisis con propóleos 30 25 La dosis letal 50 del 20 72hs propóleos en abejas es % Mortalidad 15 48hs mayor a 50.000 ppm, lo que 24hs 10 indica que resulta muy poco 5 tóxico. 0 50000 25000 12500 6250 3125 control Concentración de propóleos Colmenas tratadas con propóleos por asperjado: 14 esporas/abeja Colmenas tratadas con propóleos en jarabe: 33 esporas/ abeja Colmenas control (no tratadas): 180 esporas/ abeja
- 19. Películas biodegradables Películas proteicas con distintos porcentajes de aceite acorde a las CIM determinadas previamente. 5 mm
- 20. Varroosis Evaluar la bioactividad de sustancias naturales sobre Varroa destructor y Apis mellifera
- 21. Varroa destructor Evaluar la bioactividad de extractos vegetales sobre Varroa destructor y Apis mellifera Asperjado
- 22. Varroa destructor Evaluar la bioactividad de extractos de propóleos sobre Varroa destructor y Apis mellifera Método de aplicación tópica
- 23. Varroa destructor Atracción - Repelencia Exposición ante el estímulo olfativo (propóleos)
- 24. Ensayo en minicolmenas experimentales
- 25. Varroa destructor Mini-Colmenas Control Tratadas 17,44% ± 9,39 vs 32,85% ± 12,1 Causas de baja eficacia: Insuficiencia de sólo tres tratamientos, Baja concentración de las dosis aplicadas Bajo número de dosis Posible variabilidad introducida por el método utilizado para el conteo de ácaros caídos, ya que las minicolmenas no presentaban pisos técnicos especializados
- 26. Nosema ceranae
- 27. Nosema ceranae Infección Individual Tratamiento Cuantificación de esporos
- 28. Nosema ceranae A. absinthium A. absinthium L. nobilis A. sativum I. paraguariensis L. nobilis A. sativum Extractos de origen botánico
- 31. Manejo integrado de plagas Monitoreo Prevención Control
- 32. MUCHAS GRACIAS !!! Dra. Gende, Liesel B. Facultad de Ciencias Exactas y Naturales (UNMDP) CONICET lgende@mdp.edu.ar
Notas del editor
- Los aceites esenciales son las fracciones líquidas volátiles, que contienen las sustancias responsables del aroma de las plantas, destilables por arrastre con vapor de agua o hidrodestilación. Están ampliamente distribuidos en el mundo vegetal; especialmente en algunas flias como Lauráceas, Rutáceas, Mirtáceas, Umbelíferas , Verbenáceas, Labiadas entre otras. Se han testeado alrededor de 150 A.E. y sus componentes, mostrando un efecto acaricida muy diverso. El efecto sobre V. destructor puede ser tanto atractante/repelente y/o Tóxico.
- El aceite esencial fue diluido en etanol 96º hasta obtener las concentraciones deseadas colocándose 2 ml de cada solución en el fondo de una cápsula de Petri (150 x 20 mm). Se utilizaron concentraciones entre 2,5 y 20 µl de aceite esencial por cápsula. Se dejó evaporar totalmente el solvente y se agregaron 5 ácaros hembra adultas y 5 abejas obreras jóvenes en cada cápsula. Se realizaron controles con alcohol y 5 repeticiones por tratamiento. Las abejas se alimentaron mediante dispositivos con candy y agua. Las abejas y los ácaros fueron mantenidos a 29 ºC y 65% de HR y se cuantificó su mortalidad después de 24, 48 y 72hs de tratamiento. Se utilizó el método probit para estimar las CL50, tanto para ácaros como para abejas y se calcularon los índices de selectividad.
- Para el ensayo, se utilizaron cápsulas de Petri (90 x 15 mm) provistas con un papel de filtro absorbente en el fondo y una entretapa de malla metálica. En cada cápsula se colocaron 5 ácaros hembra y 5 abejas obreras adultas. Una vez que los ácaros se hallaban sobre el cuerpo de las abejas, se aplicaron a través de la malla metálica 1 ml de solución de extractos al 0,5; 1; 2; 4; 7 y 10 % (p/v) usando un pulverizador manual. Un dispositivo con candy y agua fue colocado dentro de la cápsula de Petri modificada, a modo de alimento para las abejas (Figura 4.3). Cápsulas tratadas con solución alcohólica al 55% se incluyeron como control. Se mantuvieron 5 replicas por tratamiento. Todas las unidades experimentales se incubaron en estufa a 29 ± 0.5ºC y 70% HR. Las abejas y ácaros muertos se contabilizaron a las 24 y 48h después del inicio de los tratamientos. Todas las abejas, vivas o muertas durante el tratamiento, fueron inspeccionadas individualmente por la presencia de ácaros.
- Los extractos blandos previamente obtenidos fueron resuspendidos en etanol 55% en orden de reducir el efecto del etanol sobre los organismos experimentales. Las soluciones fueron elaboradas considerando el contenido de humedad del extracto blando. Las concentraciones usadas fueron 1,25; 2,5; 5; 7,5 y 10% (p/v). Las aplicaciones tópicas se realizaron mediante una adaptación de la metodología utilizada por Garedew y col. (2002). Por cada tratamiento, 6 ácaros fueron ubicados sobre un papel de filtro de 3 x 3 cm en una cápsula de Petri, sobre los cuales se aplicaron 200 μl de una concentración dada (Figura 3.9). Cada tratamiento fue detenido después transcurrido el tiempo de contacto permitido, removiendo los ácaros con el papel de filtro de la cápsula. Luego, los parásitos fueron transferidos a una cápsula de Petri limpia (90 x 15 mm). Con el propósito de observar el efecto del tiempo de contacto con la solución de propóleos sobre la actividad de V. destructor , se expuso a los ácaros en contacto con la solución durante 15, 30, 45, 60, 75 y 90 s. Así, los ácaros permanecieron en contacto con cada concentración de tratamiento durante 6 tiempos de contacto crecientes diferentes. Estos tiempos de exposición fueron utilizados al evaluar la toxicidad de una de las muestras de propóleos testeadas, con el objetivo de determinar el tiempo mínimo de contacto requerido para que los ácaros respondan de forma diferencial. Los ácaros expuestos a los extractos obtenidos de las demás muestras permanecieron en contacto con la solución únicamente durante 30s. Se realizaron 5 réplicas por cada unidad experimental. Controles fueron realizados tratando a los ácaros con solución de etanol al 55% durante los diferentes tiempos de tratamiento. Todos los ensayos se llevaron a cabo a temperatura ambiente (22 °C) y los ácaros tratados se incubaron a 28 ± 0.5°C y 60% H.R. La actividad de los ácaros se observó bajo lupa de disección a los 10 min, 30 min, 60 min y cada 1 hora por las siguientes 7 horas después del inicio de cada tratamiento. Cada ácaro individual fue clasificado como móvil o inactivo; fue considerado inactivo cuando no mostró movimiento de las patas o alguna parte del cuerpo al ser estimulado. Si un ácaro permaneció inactivo por 8 horas después del inicio de los tratamientos, fue considerado muerto.
- Dispositivo 1: el dispositivo consistió de cápsulas de Petri de 9 cm de diámetro diseñadas de modo de quedar divididas en cuatro zonas como muestra la Figura 3.7. En extremos opuestos de la cápsula se colocó una pupa de abeja en estadio ojos púrpura, una de ella se embebió con 8 µl de solución alcohólica de propóleos al 10% y la otra, sólo con la solución alcohólica madre (al 55%). Al iniciar el ensayo, un único ácaro hembra adulto se colocó sobre la zona central del dispositivo. Se mantuvieron 20 dispositivos, cada uno provisto de una pupa con propóleos y otra sin propóleos en cada extremo y, 20 tratamientos con las pupas sin propóleos en ambos extremos, a modo de control. El test prosperó durante 90 minutos a temperatura ambiente y en oscuridad. Luego de transcurrido este tiempo, se registró la posición de cada ácaro de acuerdo a las zonas de división de los dispositivos. De acuerdo a Kraus y col (1994), los efectos de orientación más pronunciados pueden ser observados durante este período de tiempo. Dispositivo 2: El otro dispositivo se diseñó dividiendo la cápsula de Petri de 9 cm de diámetro también en 4 zonas, pero sólo se colocó, en uno de los extremos, un disco de papel de filtro absorbente de 1 cm de diámetro embebido con la solución de propóleos (20 µl), y se la dejó evaporar, como se muestra en la figura 3.8. Al inicio del ensayo, un único ácaro se dispuso en la zona central del dispositivo. Se mantuvieron 20 dispositivos provistos de un disco de papel con solución de propóleos en un extremo; y otros 20 dispositivos con un disco de papel embebido en solución alcohólica a modo de control. El test prosperó durante 90 minutos a temperatura ambiente y en oscuridad. Luego de transcurrido este tiempo, se registró la posición del ácaro de acuerdo a las zonas de división de cada dispositivo individual.
- Las minicolmenas de experimentación (25 x 45 x 15 cm) Veinte días previos al inicio de los tratamientos, las minicolmenas fueron infestadas artificialmente con el ácaro V. destructor . Se adicionaron 30 ácaros por minicolmena. El colmenar experimental se dividió en dos grupos de 6 minicolmenas cada uno. El primer grupo recibió tres tratamientos, a intervalos de 7 días, con solución azucarada alcohólica de propóleos al 10 %. Las soluciones fueron elaboradas homogeneizando el extracto alcohólico de propóleos en jarabe de azúcar 2:1 (2 partes de azúcar y 1 de agua), de modo que la concentración final sea de 10% de propóleos en solución alcohólica de 55%. Las soluciones se asperjaron en igual cantidad por cada cara de cuadro con abejas (2 ml) presentes en las colmenas. El volumen asperjado fue calculado de acuerdo a la metodología utilizada para el asperjado de soluciones de ácido oxálico sobre cuadros con abejas (Imdorf y col. 2003). El segundo grupo recibió tratamiento control asperjando la misma cantidad por cuadro con abejas pero sólo de solución azucarada alcoholada. Se contabilizaron semanalmente los ácaros caídos durante los tratamientos y, una semana luego de concluido el ensayo completo, se realizó un tratamiento con un acaricida de síntesis de elevada eficacia conocida (Cumavar®). El ensayo culminó un mes después con el conteo de los ácaros caídos por la acción del cumafós. La eficacia de los tratamientos se calculó como el cociente entre el número de ácaros caídos durante tres aplicaciones sucesivas sobre el total (caídos durante los tratamientos + caídos por el tratamiento con cumafós).
- El nivel de infestación en las colonias del grupo control difirió del grupo de colonias tratadas (F[1,9] = 5,486; p = 0,044). El promedio de ácaros presentes en el grupo control fue de 45 ± 22,25 mientras que el grupo tratadas presentó un valor promedio de 84,8 ± 33,95 ácaros por colonia de abejas. Ambos valores resultados significativamente diferentes entre sí. La eficacia de los tratamientos resultó significativamente diferente con respecto al control (F[1,9] = 5,676; p = 0,041). La eficacia media en el grupo control fue de 17,44% ± 9,39 y en el grupo tratadas de 32,85% ± 12,1 (Tabla 6.6). Los resultados indican una mortalidad diferencial de los ácaros parasitando colonias de abejas expuestos a tres tratamientos sucesivos con soluciones de propóleos. Al inicio de los tratamientos, las minicolmenas presentaron un promedio de 5,71 cuadros con abejas. Después de los tratamientos, las colonias del grupo tratadas mostraron una leve reducción de la población de abejas. Después de la primera semana de tratamiento con la solución de propóleos aplicada en forma asperjada, se observó la desaparición de dos reinas (colmenas 8 y 9), mientras que una tercera colonia (colmena 10) perdió su reina después del segundo tratamiento. Otra de las observaciones realizadas fue la abundante presencia de ácaros caídos por los tratamientos con piezas corporales faltantes o alguna de ellas roídas por las abejas (Figura 6.5). Esto indica la presencia del comportamiento de grooming en las abejas tratadas con soluciones de propóleos. Otro punto a tener en cuenta es que 3 de las 5 colmenas tratadas por asperjado con extractos de propóleos en solución azucarada perdieron sus reinas, debido talvez a la perturbación de los olores naturales de la colonia con el agregado de jarabe y propóleos. Las minicolmenas contienen colonias con un número limitado de abejas obreras que, de acuerdo a la estimación de la población de abejas de Burgett y Burikam (1985), sería de no más de 3.000 abejas obreras. Es probable que, debido a este escaso número poblacional, la colonia entera sufra cualquier tipo de perturbación de un modo mucho más agudo que una colonia de tamaño normal que presenta entre 30.000 a 60.000 abejas.