1. EXTRACCIÓN DE ADN ANIMAL
OBXECTIVOS.-
1. Empregar unha técnica sinxela para a extracción do ADN dun tecido animal
2. Confirmar, a partires da observación do aspecto que presenta, a estructura fibrilar do ADN e que se
atopa replegado no interior do núcleo celular
MATERIAIS.-
Figadiño de polo SDS
Probeta Pipeta
Vara de vidro Area
Alcol de 96 Portaobjeto
Morteiro Trociño de tea para filtrar
Cloruro sódico 2 M Colorante básico
Vasos de precipitado
PROCEDEMENTO.-
1. Triturar medio figadiño de polo nun morteiro. Engadir area para que ao triturar se poidan
romper as membranas de e queden os núcleos soltos.
2. Engadir ao triturado 50 centímetros cúbicos de auga. Remover ata facer unha especie de
papa.
3. Filtrar varias veces sobre unha tea para separar os restos de tecidos que quedasen por
romper.
4. Medir o volume do filtrado cunha probeta.
5. Engadir ao filtrado un volume igual de cloruro sódico 2 M. Con isto conseguimos producir o
estalido dos núcleos para que queden libres as fibras de cromatina.
6. A continuación engádese 1 centímetro cúbico de SDS. (Nota: Se non se dispón deste produto pode
substituírse por un deterxente de vaixelas, tipo Mistol ou similar. A acción deste deterxente é a de
formar un complexo coas proteínas e separalas do ADN. Así nos quedará o ADN libre das proteínas
que ten asociadas.
7. Engadir mediante unha pipeta 50 ml de alcohol de 96. Hai que facelo de forma que o alcol
esvare polas paredes do vaso e se formen dúas capas. Na interfase, precipita o ADN.
8. Introducir unha vara de vidro e ir removendo na mesma dirección. Sobre a vara vanse
adherindo unhas fibras brancas, visibles a simple vista, que son o resultado da agrupación de
moitas fibras de ADN.
9. Esta práctica pode completarse cunha tinguidura específica de ADN.
Temos que tomar unha mostra das fibras que se van depositando sobre a vara de vidro e
depositalas sobre un portaobjeto.
10. Tinguir durante uns minutos cun colorante básico (hematoxilina, p. e.) e observar ao microscopio.