Sanoplant antagonismo de trichoderma vs r. solanacearum
1. Actividad antagónica de bacterias
biocontroladoras y filtrados de
Trichoderma spp. contra Ralstonia
solanacearum en plátano
Germán Ceballos I.A. CIAT
Elizabeth Álvarez, Ph.D CIAT
Germán Llano, M.Sc. CIAT
XXIX Congreso ASCOLFI
Medellín, junio 2009
2. INTRODUCCIÓN
El Moko, enfermedad vascular causada por Ralstonia solanacearum,
afecta seriamente la producción de plátano en Colombia, generando
pérdidas del 100% en áreas afectadas.
Shen et al. (2004) demostraron que una cepa de Trichoderma koningii
tuvo actividad antagónica contra R. solanacearum debido a sus
metabolitos termostáticos de efecto antibiótico.
Asmaja (2005) reportó actividad antibacterial de filtrados libres de células
de Trichoderma viride contra R. solanacearum in vitro, encontrando
diferencias entre cepas.
Bacterias antagonistas colonizan el suelo, producen sustancias
metabólicas que tienen efecto sobre patógenos y estimulan desarrollo
radical.
3. OBJETIVO
Seleccionar una cepa de Trichoderma spp. con
efecto antagónico a Ralstonia solanacearum in vitro e
invernadero.
Mejoramiento de la sanidad y
competitividad del cultivo de plátano,
mediante el desarrollo de nuevas
estrategias de manejo del suelo y la
nutrición.
FNFH
4. Materiales y métodos
Localización
Laboratorio e invernadero
Patología de yuca
Centro Internacional de Agricultura Tropical CIAT
Diseño experimental
Bloques completos al azar (BCA)
Análisis estadístico
Statistix 8.0
5. In vitro
Cepas de Trichoderma spp. cultivadas en medio PD durante 18 días
• 41-TSM-1, 19-TSM-3A, 47-PDA-3A y CIAT-14PDA-4 (T. viride)
• Agroguard® (cepa comercial de T. harzianum), LST.
• Trichoplant® (mezcla de cepas de T. harzianum, T. viride, T. koningii
y T. lignorum), Sanoplant.
Ralstonia solanacearum (Rs cepas 7 y 78, aisladas de raquis de
plátano).
Se empleó el filtrado (al 40%) libre de estructuras por cada cepa de
Trichoderma spp. mezclado con PDA estéril.
Siembra de dilución de Rs (1x10-4, partiendo de suspensión de 0,2 de
absorbancia).
6. Invernadero
Plantas de Dominico Hartón de 2 meses de edad:
Inoculación de antagonistas:
Con 50 mL de suspensiones 1,0x106 conidias/mL
de Trichoderma harzianum (Agroguard®) y T. viride
Ecoterra® (Azotobacter chroococcum, Pseudomonas
aeureofaciens, Bacillus licheniformis, B. megaterium y B. subtilis)
(2,0x108 UFC/g) LST.
Inoculación de Rs al suelo:
Mediante herida radical y con 30 mL/planta de
una suspensión bacteriana de 0,1 de absorbancia
(600nm), equivalente a 1x105 UFC/mL
7. Variables analizadas
In vitro
• Conteo diario del numero de UFC de Rs
En plantas
• Severidad por Rs (mediante
escala 0 a 6)
• Contenido foliar de nutrientes
• Materia seca (en proceso)
Grados de severidad de Ralstonia solanacearum
en plantas de plátano (Mesa y Triviño, 2007)
9. In vitro
Testigo R. solanacearum 41-TSM-1 T. viride Trichoplant ®
8000
Tratamientos efectivos
7000 Testigo aboluto
6000 19 TSM 3A 41-TSM-1
UFC Rs 7 /mL
47 PDA 3A T. viride
5000
41 TSM 1 Trichoplant ®
4000
Agroguard®
3000 Esterilizados por
T. viride
filtración o autoclavado
2000 Trichoplant®
1000 Agroguard® autoclavado En las mismas
41 TSM 1 autoclavado concentraciones
0
1 2 3 4 5 6 7 8 Trichoplant® autoclavado
Días de evaluación
Día 5 a 8 (p< 0,0001)
Cepas 41-TSM-1, T. viride y Trichoplant® inhibieron completamente el crecimiento
de la bacteria, comparados con el testigo que presentó 6.820 UFC/mL
10. Cepas 47-PDA-3A y 19-TSM-3A
no presentan ningún efecto de
inhibición de R. solanacearum,
ya que igualaron y superaron al
testigo (2.920 UFC/mL).
Testigo R. solanacearum 47-PDA-3A
10000
9000
8000 Testigo
7000
19 TSM 3A Tratamientos efectivos
UFC Rs 78 /mL
47 PDA 3A
6000
41 TSM 1
5000
Agroguard®
T. viride
4000
T. viride 41-TSM-1
3000 Trichoplant® Agroguard ®
2000 Agroguard® autoclavado
1000
Trichoplant ®
41 TSM 1 autoclavado
0 Trichoplant® autoclavado
1 2 3 4 5 6 7 8
Días de evaluación
Día 5 a 8 (p< 0,0001)
11. Invernadero
Haz vascular necrosado
4,0
3,5
Severidad R. solanacearum (escala o-6)
3,0
Agro® +Rs7
2,5 Agro® +Rs78
Ecot® +Rs7
2,0 Ecot® +Rs78
T.viride +Rs7
1,5 T.viride +Rs78
Rs 7
1,0
Rs 78
Testigo
0,5
0,0
13 16 19 22 25 28 31 34 37 40 43
Días después de inoculación LSD 5% día 43: 2,09
La actividad antagónica de T. viride y Ecoterra® se corroboró al encontrar
menores niveles de severidad por Rs en plantas (0,6 y 1,9, respectivamente),
comparados con los testigos de Rs (2,1 y 2,9).
12. Contenido foliar de nutrientes
P K Ca
70 a
ab
abc
60 abc
Contenido foliar (g / kg)
bcd bcd
50 cd
40
a
ab ab
30
abc abc
bc
20 c a
abc abc abc abc
bc
10 c
0
Agrog® Rs7 Agrog® Rs78 Ecot® Rs7 Ecot® Rs78 T. viride Rs7 T. viride Rs 78 Testigo
Tratamientos
Agroguard® : K
Patogenicidad de cepa Rs 78,
T. viride: K, P
se nota en la nutrición
Ecoterra® : Ca
13. Fe Mn
4000
a
3500
ab
Contenido foliar (mg / Kg)
3000
2500
abc abc abc
2000 bc
bc
1500
1000
a ab
500 abc
bc c abc bc
0
Agrog® Agrog® Ecot® Ecot® T. viride T. viride Testigo
Rs7 Rs78 Rs7 Rs78 Rs7 Rs 78
Tratamientos
Ecoterra® no se presentaron diferencias para P
Mostró mayores contenidos de Mn y estimuló el
desarrollo radical.
14. Conclusiones
Se comprobó la efectividad y termoestabilidad de los filtrados de las cepas 41-
TSM-1, T. virirde, y el producto Trichoplant®, ya que inhibieron completamente
las dos cepas de R. solanacearum, conservando dichas propiedades, aún
después de ser sometidos a esterilización por autoclavado.
En plantas se encontró efectividad de T. viride y Ecoterra® para reducir el
desarrollo de la enfermedad ocasionada por R. solanacearum.
La cepa que demostró actividad antagónica a R. solanacearum tanto in vitro
como en invernadero, fue Trichoderma viride
T. harzianum (Agroguard®) y T. viride mostraron altos contenidos foliares de K
Ecoterra® favoreció la absorción de Ca y Mn. También incentivó desarrollo
radical.
Hace falta continuar investigando sobre los posibles antibióticos producidos
por Trichoderma spp.
