Recomendados
Más contenido relacionado
La actualidad más candente
La actualidad más candente (20)
Destacado
Destacado (20)
Similar a تركيب وصبغ الخلية
Similar a تركيب وصبغ الخلية (19)
Más de Univ. of Tripoli
Más de Univ. of Tripoli (20)
Último
Último (10)
تركيب وصبغ الخلية
- 1. األحياء الدقيقة تركيب وصبغ الخلية البكتيرية د يوسف الشريك
- 2. تركيب الخلية البكتيرية Bacterial cell structure •الخلية البكتيرية متناهية في الصغر ولكن بتقدد وتودور اهزةد مثد الميكروسدكوبا الضددوةية واكلكترونيددة والسلورسددنتية والوددري البيوكيمياةيددة فقددد جمكددن دراسددة جز اةةددا المختلسة •تتركب خلية البكتيرية من الوبقة السوحية والبروتوبالس ، وتشم الوبقدة السدوحية السالزال والبللي والوبقة الل زة (الكبسو ) وزدار الخلية •جما البروتوبالس فإنه يقد بدداخ الزددار الخلدوت ويتكدون مدن الغشداو السديتوبال مي والسددديتوبال والمددداد النوويدددة والمدددواد المخ ندددة والريبوسدددوما والسزدددوا وكددد لك الزراثي الداخلية في البكتيريا المتزرثمة .
- 3. • والمحتوت الماةي للخلية يصـ إلى 07-58% من و نةدا بينمدا تتراوح المدواد الصدلبة مدن 51-03% مدن و ن الخليدة وتد داد ه ه النسدبة ب يداد المدواد المخ ندة فدي الخليدة مثد البدولي بيتدا هيدروكسددددي بيددددوترا والبددددولي سددددكريا والبددددولي فوسددددسا والكبري . • وتتكون الماد الصلبة في الخلية جساسا ً مدن البدروتين 05% ، زـدار خلدـوت 01-02% ، ،%4-3 DNA ، %20-10 RNA اللبيدا 01% • جما العناصر العشر الكبرى الداخلة في تركيب الخلية فإن نسبتةا المةوية في المتوسدو 05% كربدون ، 02% جكسدزين ، 41% نيتدددروزين ، 8% ايددددروزين ، 3% فوسدددسور ، 1% لكددد مدددن الكبريددددددد والكالسددددددديو والبوتاسددددددديو ، 5.0% لكددددددد مدددددددن الماغنسيو والحديد .
- 4. جوكً : الوبقة السوحية Bacterial surface 1. السالزال Flagella هي جعضاو الحركة في الكثير من البكتريا ، وهدي عبدار عدن جسدواو خيويدة وويلددة مكونددة مددن بددروتين مددن نددوال خددا يسددمي فالزلددين *، Flagellin وتنشددا السالزددال مددن زس د ناعددـدت منغددرا فددي الزدددار الخلددوت والغشدداو السيتوبال مي وتمر في الزدار ليمتد السـوو الخيوي وويـالً خـارج الخلية. Flagellin* is a globular protein that arranges itself in a hollow cylinder to form the filament in bacterial flagellum It has a mass of about 30,000 to 60,000 .daltons Flagellin is the principal substituent of bacterial flagellum, and is present in large amounts on nearly .all
- 6. • صبغ جسواو البكتيرية • من جه جهداف صبغ اهسواو ما يلي:- 1. مشاهد اهسواو. 2. ترتيب اهسواو ومونعةا. 3. تستعم اهسواو للتعرف على جنواال البكتيريا. 4. ومن جه جساسيا صبغ جسواو البكتيرية التالية:- 5. تعتبر اهسواو رفيعة زدا، وسريعة الكسر، ك يمكن صبغةا بالصباغا العادية. 6. تحتاج اهسواو إلى تقنية وصبغة معينة، لت يد من نورها. 7. يمكن مالحظة حركة البكتيريا، عن وريقة القور المعلقة، جو عن وريي صبغ اهسواو،.
- 7. وريقة العم : • يزب جخ الحيوة والعناية الساةقة؛ لمن فقد اهسواو ، بتنظيف • الشراةح زيداً، م تداو البيةة البكتيرية بعناية كبير . تؤخ نوعة من وسو بيةة اآلزار الصلبة ، حيث تنمو البكتيريا، • م عد لما الم رعة باليد. توض نوعة اآلزار برفي على الشريحة بحيث تكون موازةة • للنمو، ترف تلك القوعة وتعاد إلى الوبي. تترك البكتيريا الملتصقة بالشريحة. • تزسف بالةواو، دون استعما الحرار . • تغمر الشريحة بحامض التانيك Tannic acidالمثب لمد • عشر دناةي. تغس الصبغة برفي بالماو المقور. •
- 8. تغمر الشريحة بصبغة كاربولسوكسين ،Carbolfuchsin • لمد خمسة دناةي. تغس برفي بالماو المقور. • تترك اللوخة تزف بالةواو ً • تسح الشريحة تح المزةر وتسز المالحظا •
- 11. 2. البيلي Pili •وتسمي جيضا ً السمبريا ، Fimbriaeوهي عبار عن واةد خيوية تنشا جيضا ً من الغشداو السيتوبال مي ، وهي جنصر في الوو من السالزال وليا لةا عالنة بالحركة . •وهي مكونة من بروتين خا يسمي . Pilin •ويوزد نوعين من تلك ال واةد . •النوال العادت وهو يساعد البكتريا المتوسلة على اكلتصاي بسوح النبدا جو زلدد الحيدوان العاة . • كما تساعد البكتريا الةواةيدة علدى تكدوين غشداو علدى جسدوح اهوسداو السداةلة . والندوال الزنسدي ويسدمي F –Piliويلعدب دوراً فدي التد اوج الزنسدي فدي البكتريدا conjugation بانتقدا المدداد النوويدة – مدن خددال التزويددف الدداخلي لةد ه ال واةدد – مدن خليددة البكتريددا الم كر إلى المؤنثة . Electron Micrograph of Electron Micrograph Escherichia coli with a of Escherichia coli Conjugation Pilus with Pili
- 12. •3. الوبقة الل زة جو العلبة Slime layer or capsule •تحدداو الخليددة البكتيريددة بوبقددة هالميددة ل زددة يختلددف سددمكةا بددإختالف النددوال فقددد تكددون غشداو رنيقدا ً فدي بعددض اهندواال وندد تكددون غشداو سدميكا ً فدي جنددواال جخدرت وتسدمي علبددة Capsuleا ا كان تركيبةا متماسك •وند يص سمكةا إلى جكثر من ضعف الخلية وتحيو العلبة بالخليدة المنسدرد جو بالسلسدلة من الخاليا إ ا كان التزم في سالس . •وإ ا كددان تركيبةددا مسكددك فتسددمى هددال جو وبقددة ل زددة Slimeوإ ا كددان تركيبةددا صددلب تسمى الغمد Sheth •وك تصبغ علبة البكتريدا فدي التحضديرا المصدبوغة بدالوري العاديدة حيدث تظةدر الخليدة محاوة بمنوقة غير مصبوغة هي الغالف ل لك يستعم لصبغ العلبة وري خاصة وتتركب ماد العلبة في معظ الحاك من مواد كربوهيدراتية معقدد عديدد السدكريا وفدي بعدض اهنواال تدخ اهحماض اهمينية في تركيبةا. تظةر الخلية محاوة بمنوقة غير مصبوغة هي الغالف
- 13. • جهمية العلبة مدددن جمثلدددة الميكروبدددا التدددى تكدددون العلبدددة • Leuconostocو mesenteroides ميكروب Streptococcus pneumonia وجهميددددة العلبددددة للخليددددة جنةددددا تحميةددددا مددددن • الظددروف البيةيددة السدديةة خصوصددا ً الزسدداف وتلصي الخاليا بعضةا ببعض ووزود الغالف لده تداثير واضدح علدى مظةدر • .•Leuconostoc mesenteroides الم ارال البكتيرية ، 1. (Leuconostoc mesenteroides is a coccus وللعلبددة جهميددة كبيددر فددي حالددة الميكروبددا • 2. participating in the fermentation المرضية حيث تدرتبو القددر المرضدية لةد ه .of sauerkraut الميكروبددا بوزددود العلبددة ويرز د لددك إلددى ,3. If it invaded older sugar factories جن العلبة تحمي الميكدروب مدن هزدو كدرا it caused problems by producing الددددد البيضدددداو واهزسددددا المضدددداد بزسدددد exocellular polysaccharides in العاةددد وبددد لك يسدددتمر فدددي تكددداثره وإحدددداث sugar المرض كما تسيد في التميي بين اهنواال وبعضةا . •
- 14. Streptococcus pneumonia • Various diseases are caused by bacteria’s that can be • prevented easily. Strep pneumoniae is a bacterium that causes numerous .1 infections in the body affecting the major body organs such as the heart. Causes swelling of the lining surrounding the heart posing a .2 great danger to the infected person. It also causes inflammation of the lungs from the inside .3 Streptococcus pneumonia
- 15. • صبغ الكبسوك Capsule Stain • يمكن استخدا الصبغ السالب، لتوضيح الكبسولة ( عندما يكون بيضاويا ً جو داةريا ً) حو الخلية البكتيرية، وال ت يلتصي بسوحةا، مكونا ً وبقة ل زة، وتعوي وبقة مخاوية في حالة كون الكبسولة غير منتظمة الشك . • من جه جساسيا لصبغ الكبسوك البكتيرية ما يلي:- البكتيرية، هنةا تتكون من عديد من الصعب صبغ الكبسوك 1. السكريا ، وعديد البيبتيدا . معظ الكبسوك ك ت وب في الماو، وك تحم شحنا كةرباةية، 2. وبسبب ل لك فإن ه ه الصبغا البسيوة ك ترتبو معةا. جغلبية وري الصبغ التي تستعم في الكشف عن الكبسولة؛ تصبغ 3. البكتيريا والوسو المحيو بةا، وك تصبغ الكبسولة. ك تعام اللوخة بالحرار لتثبيتةا، هن الحرار تسبب فقدان 4. الكبسولة.
- 16. • وريقة العم : 1. تنظف الشريحة بموةر وتزسف بالةواو، ث تمسك ، من جحد واياها. ،K. pneumoniae 2. تؤخ عينة من بيةة بكتيرية بواسو عقد النان ، وتض على سوح الشريحة لتزةي اللوخة. 3. تترك اللوخة لتزف بالةواو، بدون استعما الحرار . 4. تغمر اللوخة بصبغة crystal violetلمد 5 – 01 دناةي. النحاا 4،CuSO 5. تغس اللوخة بلوف بمحلو كبريتا للتخل من الصبغة crystal violetال اةد . 6. تزسف محتويا الشريحة. 7. تسح الشريحة تح المزةر، وتالحظ الخاليا لونةا بنسسزي، محاوة بةالة رناو باهتة اللون، جو عديمة اللون، ويكون لون الخلسية( اهرضية) بنسسزي ل لك جيضا ً (جنظرالشك التالي)
- 18. صبغ اهبواغ( السبورا ) الداخلية • يستخد الصبغ السبورا ، لتحديد موان اهبواغ، داخ خلية • البكتيرية، ومن جكثر اهنواال المكونة لألبواغ الداخلية هي بكتيريا كلوستيريديو ، والباسيليا، لألسباب التالية:- اهبواغ الداخلية غير نشوة، ومقاومة للظروف غير مناسبة • للبكتيريا، سواو من الحرار جو الكيماويا ، جو جت ظروف بيةة جخرى. اهبواغ ليس وسيلة للتكاثر، وتبقى البكتيريا في حالة سكون، • والما استمر الظروف غير مواتية. تستخد اهبواغ في عملية تصنيف البكتيريا. • اهبواغ غير منس لمعظ الصبغا . • تستعم الحرار لتثبي الصباغا . •
- 19. شك (35) كحظ DNAمحاو بغالف البوغ. ويظةر البوغ داخ الخلية الخضرية وسوف تسقد الخلية ز و الخضرت منةا م مرور الون
- 20. • وريقة العم 1. تنظف شريحتان زازيتان. 2. زة لوخه من بيةتين بكتيريتين، لباسيليا سابتيلا، عمر جحدها 81 – 42 ساعة، واهخرى 27ساعة، 3. تزسف بالةواو، وتثب بالحرار . 4. توض نوعة صغير من وري الترشيح على اللوخة، نب إضافة صبغة جخضر مالكاي ، لمن التبخر الكام للصبغة، وزسافةا نب تسربةا إلى اهبواغ، وعليه في زمي اهحوا ، يساعد التسخين على تمدد غشاو اهبواغ ، ويسمح بدخو الصبغة إلى الداخ ، وتبقى الصبغة داخ البوغ بالتبريد.
- 21. تغمر اللوخة بصبغة جخضر مالكاي .MALACHITE GREEN • تسخن على البخار لمد 5 دناةي ، ويضاف م يد من الصبغة، • كلما جحتاج اهمر ل لك. ترمى الورنة في مكان مناسب ، وتغس اللوخة بالماو المقور • زيداً. تضاف صبغة السسرانين لمد نصف دنيقة. • تغس الشريحة بالماو المقور وتزسف. • تسح الشراةح تح المزةر( جنظر الشك التالي). •
- 23. • تقارن النتاةج م شراةح الزاه ، ويالحظ موان اهبواغ في الخاليا المختلسة شك (55) . شك (45) وريقة صبغ السبورا ، ومثا على موان المختلسة للسبورا كما هو موضحه في الداةر جسس الشك .
- 24. • Some G+ bacteria form resistant structures called SPORES under adverse conditions. • Spores are the most RESISTANT life form known. • They are able to survive boiling in water at 100oC for long periods. • Spores are resistant to UV-light, to drying and many harmful chemicals. • We know spores can live for 100s of yr. and recently spores several million yr. old have been revived from insects trapped in amber
- 26. •4. زدار الخليـــة : Cell Wall للبكتيريا الحقيقية زدار خلوت عبار عن غشاو صلب Rigid 1. ويتددراوح سددمكه مددا بددين 01-02 نددانوميتر ويمثدد حددوالي 02% مددن 2. الو ن الزاف للخلية . ونابلية الزدار الخلوت للصبغ بالوري العادية نليلة وب لك فإنه ك يشداهد 3. إك باسددتعما وددري صددبغ خاصددة تددتلخ فددي معاملددة الخاليددا بحمددض التانيددك الد ت باتحدداده مد المددواد المكونددة للزدددار ي يددد مددن سددمكه ومددن نابليته للصبغ والزدار الخلوت في البكتريا الحقيقة صلب نادر على تحم اكختالف في 4. الضغو اهسمو ت بين محتوت الخلية والوسو ال ت يعيش فيه . وندددو الزددددار الخلدددوت ترزددد جساسدددا ً لوزدددود تركيدددب معقدددد مدددرتبو مددد 5. مركبدددا جخدددرت يسدددمي Peptidoglycanوهدددو مركدددب مدددن عددددد مدددن وحددددددا متعددددددد معقدددددد Heteropolymerبعضدددددةا كربوهيدراتيدددددة والبعض اآلخر جحماض جمينية .
- 27. 6. والكربوهيدددرا الداخلددة فددي تركيبدده عبددار عددن مددركبين همددا السكر اهميندي N-acetyl glucose amineواآلخدر هدو -N acetyl muramic acidموزودين في تتداب تبدادلي مرتبودة ببعضةا بروابو بيتا 1-4 زليكوسيدية . 7. ويزدددب جن نالحدددظ جن المركدددب الثددداني ك يوزدددد فدددي التركيدددب الزدددارت للخاليددا اهرنددي جت جندده يوزددد فقددو فددي تركيددب الزدددار الخلوت للدـ Procaryotic cellومدن حيدث اهحمداض اهمينيدة الداخلة في تركيب الزدار فةدو يحتدوت علدى اهند علدى الدثالث جحماض اهمينيدة alanine, glutamic, diaminopimellic والحامض اهميني diaminopimelic 8. ك يوزددددد اجبدددددا فددددي تركيددددب البددددروتين ممددددا يميدددد الكاةنددددا Procaryotesعدن غيرهدا مدن الكاةندا وهدي صدسة تقسديميه هامة .
- 28. جهمية زدار الخليـــــة : يحسددظ الزدددار للخليددة البكتيريددة شددكلةا المميدد كمددا جندده نظددرا 1. لصددالبته يحمددي الخليددة مددن الظددروف الخارزيددة ومددن اكنتسددا اكسمو ى عندما تنمو فى المحالي الغ اةية المنخسضة التركي . يتحك في نوال الز يةا التدي تمدر خدال ثقوبده تبعدا ً لحزومةدا 2. ولكددددن لدددديا لدددده خاصددددية النسا يددددة اكختياريددددة مثدددد الغشدددداو السيتوبال مي. مسةو مباشر عن إيزابية جو سلبية الصبغ بزرا وهي صدسة • تقسددديميه هامدددة جخدددرت حيدددث ك يسدددتوي الكحدددو إ الدددة معقدددد الزنسدديان – اليددود فددي الخاليددا الموزبددة فتظ د محتسظددة بلونةددا البنسسزي بينمددا ي ي د الكحددو المعقددد مددن الخاليددا السددالبة وبالتددالي تاخ د • اللون اهحمر عند صبغةا بالصسرانين جو السوكسين
- 29. • ومما يؤكد مسةولية الزدار عن نتيزة الصبغ بزرا فإن الخاليدا الموزبددة تسقددد اللددون البنسسددزي عنددد معاملتةددا بواسددوة إن د ي ( Lysozymeه ا اكن ي يحل الزدار الخلوت للبكتريا) . 3. كما ند تحتوت وبقا الخلية السوحية فدي بعدض البكتريدا علدى حددددامض المايكوليددددك ( Mycolicحمددددض دهنددددي بدددده 09 ر كربون) وهو المسةو عن الصبغ الصامد لألحماض . 4. يزدددر بالدد كر جن البكتيريددا التابعددة هنسددا ,Spirochaetes Myxobacterialesلددديا لةدددا زددددار خلدددوت صدددلب وتسدددمى .Archeabacteria
- 31. • صبغ البكتريا بصبغة زرا • اكتشف ه ه الوريقة هانا زرا في 4881، عندما كحظ جن البكتيريا تسقد لون الصبغة، عند التخل من ال اةد منةا. وتستعم ه ه الوريقة في تشخي وتصنيف البكتيريا، • وتقسيمةا إلى مزموعتين، سالبة ، وموزبة لصبغة الزرا . ويرز السري بين الصستين الموزبة والسالبة، لمكونا الزدار الخلوت البكتيرت. • وتعتمد ه ه الوريقة على جربعة خووا هي:- استخدا الصبغة الرةيسية ( ،)Crystal violetلصبغ زمي البكتيريا 1. باللون البنسسزي. يستخد اهيودين ،Iodineل ياد الروابو اهيونية بين الصبغة الرةيسية 2. والبكتيريا. يستخد الكحو اهثيلي، جو اهسيتون كماد م يلة للصبغة من بعض 3. البكتيريا، بينما تحتسظ البعض منةا بلونةا. تستخد ماد السسرانين ،Safraninفي صبغ البكتيريا التي فقد صبغتةا 4. بالكحو جو اهسيتون، باللون اهحمر.
- 32. • تسددمى البكتيريددا التددي فقددد لددون الصددبغة الرةيسددية بكتيريددا سدددالبة لصدددبغة الزدددرا ، جمدددا التدددي احتسظددد بلدددون الصدددبغة الرةيسية تعرف باس بكتيريا الموزبة لصبغة الزرا . • نظرية آلية صبغة الزرا : تعتمد ه ه النظرية على النقاو التالية:- • 1. تختلف البكتيريا لتقبلةا الصبغة الرةيسية والصبغة الثانوية. 2. زدار الخلية الموزبة لصبغة الزرا ؛ جكثر سمكا من زدار خلية البكتيريا السالبة لصبغة الزرا ، من حيث التركيب الكيمياةي.
- 33. • يحتوت زدار البكتيريا الموزبة لصبغة الزرا ،على وبقة ً سميكة من بيبتدوزلوكان ، جكثر سماكة من زدار البكتيريا السالبة لصبغة الزرا جنظر الشك (74).
- 34. • وبناو على النظرية، يمكن تسسير آلية الصبغة السالبة جو الموزبة لصبغة الزرا كالتالي:- • يحتوت زدار البكتيريا الموزبة لصبغة الزرا ، على وبقة سميكة من بيبتيدوزلوكان ( متعدد السكريا مرتبوة م البيبتيدا )، التي يسبب لةا الكحو إ الة وانكماش زدارها، بحيث يخسض من معد فقد الصبغة الرةيسية، ومن ث تصبغ باللون اهساسي البنسسزي. • يحتوت الغشاو الخارزي، لزدار بكتيريا السالبة لصبغة الزرا ، على وبقا محتوية على البروتين، ومتعدد السكريا ودهون مرتبوة بعديد السكريا ، ووبقة غير سميكة من بيبتيدوزلوكان، محاوة بغشاو خارزي، ومن ت يقو الكحو بإ الة، جو إ ابة الدهون، مما ي يد من فقد الصبغة اهساسية ، ويتلون زدارها بلون الصبغة الثانوية (اهحمر).
- 35. • وريقة العم • يزب تحضير اللوخة البكتيرية من بيةة حديثة عمرها جن من 42 ساعة. – تنظف ثالث شراةح تنظيسا زيداً. – يرس داةر على السوح السسلي، على ك شريحة من الشراةح الثالثة ،م كتابة جسماو البيةا على ك منةا. – تحضر لوخة لك من البيةا ، بالوريقة التي سبي شرحةا. • وريقة الصبغ وهي كاآلتي:- 1. تغمر اللوخة بصبغة ،Crystal violetوتتركةا لمد نصف دنيقة. 2. تغس الشريحة بعناية بالماو المقور، لمد 2 ثانية، بوريقة غير المباشر فوي اللوخة ( عد تسليو الماو مباشر على اللوخة).
- 36. بدون تزسيف الشريحة، تغمر اللوخة بمحلو اليود لمد 3. دنيقة. بدون غسي الشريحة، يضاف 59% كحو إثيلي إلى 4. الشريحة، ويترك لينساب على اللوخة، لمد ما بين 01- 02 ثانية، إلى حين تونف خروج كميا كبير من الصبغة اهساسية (غالبا بعد بض ثوان)، وتعتمد مد إ الة الكحو على العوام كثير ، جهمةا سمك اللوخة، والخبر العملية في تحضير اللوخة وصبغةا. تغس الشريحة مباشر بالماو المقور، لمد دنيقتين. 5. تضاف الصبغة الثانوية السسرانين، وتترك لمد 02 ثانية. 6. تغس الصبغة ال اةد بالماو المقور، لمد 2 ثانية، وتزسف 7. بوري نشاف. تترك لتزف. 8.
- 37. • تسح الشريحة بالمزةر تح العدسا المختلسة، وتسز المالحظا (الشك 84).
- 38. • حركة البكتيريا في جوساو النمو شبه صلبة • تستخد اهوساو النمو شبه صلبة، المحتوية على كميا نليلة من ماد اآلزار ويحقن الوسو النمو بالبكتيريا المراد اختبار حركتةا، داخ الوسو النمو، بواسوة إبر حقن(بدون عقد في نةايتةا شك 75) في جنابيب النمو ، وتحضن اهنابيب لمد منية معينة، وتؤخ المالحظا مباشر بمزرد المالحظة التغيرا التي حصل في الوسو الغ اةي . شك (75) إبر الحقن كحظ جنه ك توزد في نةايته حلقة داةرية
- 39. • تسمح التركي ا القليلة من اآلزار في الوسو الغ اةي، بتحرك البكتيريا بحركة محدود من خال منوقة الوعن، وتحدد الحركة نتيزة حدوث تسرال النمو في منوقة جمالح الوعن، ويمكن إضافة صبغة معينــــة مث تترا يوليو ) ، Tetrazolium salt (TTCلمالحظة تسرال النمو بلون اهحمر الساتح (فزلي اللون). يزب حقن اإلبر بوريقة مستقيمة، وتسحب بنسا • الوريقة، للحصو على نتاةج زيد (جنظر شك التالي).
- 41. • اختبار ندر البكتيريا على الحركة • Motility Determination تستخد وريقة اختبار ندر البكتيريا على الحركة، للتعرف على • بكتيريا مزةولة النوال ( الزنا)، حيث يزرى لةا اختبار على لك، ويت مالحظة مدى حركتةا خال الحق المزةرت، وهناك نوعان من الحركة وهما: – حركة حقيقة فعلية ( الحركة من مكان إلى آخر). – حركة كا بة على شك اهت ا ا جو ارتزاج (حركة برا ونية). توزد عد وري يمكن بةا معرفة ندر البكتيريا على الحركة وهي • كاآلتي:- Wet-Mount الوريقة الروبة • Hanging Drop وريقة النقوة المعلقة • Culture Method الوريقة الم رعية • لقد سبي شرح وريقة الروبة جو المبتلة ووريقة النقوة المعلقة •
- 42. • تسمح التركي ا القليلة من اآلزار في الوسو الغ اةي، بتحرك البكتيريا بحركة محدود من خال منوقة الوعن، • وتحدد الحركة نتيزة حدوث تسرال النمو في منوقة الوعن، ويمكن إضافة صبغة معينــــة مث جمالح تترا يوليو ) ، Tetrazolium salt (TTCلمالحظة تسرال النمو بلون اهحمر الساتح (فزلي اللون). • يزب حقن اإلبر بوريقة مستقيمة، وتسحب بنسا الوريقة، للحصو على نتاةج زيد (شك 85).
- 43. البكتيريا Isolation Techniques • تقنية ع • وريقة الع بتخويو اهوباي Streak Plate Method of Isolation • الةدف من ع البكتيريا بتخويو اهوباي:- • تستخد ه ه الوريقة للحصو على مستعمرا نقية، من بيةة محتوية على عديد من اهنواال اهخرى، و لك لألسباب التالية:- 1. تعتبر ه ه الوريقة واسعة اكنتشار 2. تستخد لخسض جعداد وكثافة اهحياو الدنيقة في البيةة، ومن ث سةولة ع لةا من اهنواال غير المرغوبة. 3. تعتبر ك مستعمر مع ولة مستعمر نقية ( من المعروف نظريا بان ك مستعمر تبدج بخلية من نوال واحد فقو).
- 44. • وريقة العم : • وريقة التخويو المتعامد: 1. تصب بيةة اآلزار المغ ت في جوباي بيترت، عند درزة 54 ، ºوتترك لتبرد وتتصلب. 2. تغمر عقد النان المعدني المعق ، في بيةة بكترية مختلوة ، جو من معلي الماد المراد الع منةا. 3. تخوو مساحة صغير على سوح اآلزار، عند حافة وبي بيترت، بلما السوح بعقد النان المزسسة، بدون ضغو حتى ك يخرج سوح اآلزار ( المساحة1). 4. تعق حلقة النان وتترك لتبرد لمد 5 ثواني.
- 45. يحرك الوبي م فتح الغواو ال زازي لوبي بيترت ، 5. جخرى ، ويرس على وتعاد عملية التخويو مر سوح اآلزار خووو على شك حرف Sبواسوة النان على المساحة 2 بعرض الوب يعق النان مباشر ويترك ليبرد. 6. يخوو سوح اآلزار تخويوا ( 6 – 7 خووو)، بحيث 7. تكون عمودية يعق النان ويترك ليبرد. 8. تكرر عملية التخويو في اكتزاه 3 و4. (شك 95). 9.
- 47. • وريقة التخويو المتشع Radiant Streak Method 1. تعق حلقة النان ، وتبرد لمد 5 ثواني. 2. ترس بواسوة النان 7 –8 خووو كما موضح في شك (06).
- 48. يعق النان مر جخرى ويترك ليبرد. 3. يخوو سوح اآلزار، بحث تكون الخووو متقاوعة 4. م الخووو التي سبي تخويوةا في السابي. يعق النان مر جخرى، ويترك ليبرد. 5. توض اهوباي مقلوبة في الحضانة عند درزة 6. 73، ºلمد 42 – 84 ساعة.
- 49. الشراةح تح المزةر فح • • الةدف من فح الشراةح تح المزةر: - • للكشف عن الميكروبا التي ك ترت بالعين المزرد لضآلة حزمةا: 1. تعتبر خلية البكتيريا من نوال وحيد الخلية prokaryoticبحيث جنةا جصغر من نوال متعدد الخاليا .Eukaryotic 2. للكشف عن الخاليا البكتيرية تح المزةر الضوةي بالوري التالية.- • وريقة Wet mount • صبغ اللوخة البكتيرية، وتعتبر ه ه الوريقة جكثر استعماك، للكشف عن البكتيرية تح المزةر، ومن عيوبةا يمكن جنةا تبين البكتيريا الحية والميتة، ومن جه ممي اتةا يمكن التسريي بةا بين جشكا البكتيريا عصوية جو كروية وتنظيماتةا (شك )وغيرها، ويمكن بة ه الوريقة التسريي بين البكتيريا الموزبة، جو السالبة لصبغة الزرا 3. للكشف على خاليا البكتيرية تح المزةر يستعم عدسة مكبر م ي خا بالكشف .Oil immersion
- 50. النواة غير الحقيقية • pro·kar·y·ote • [proh-kar-ee-oht, -ee-uh t] Show IPA • nounany cellular organism that has no nuclea r membrane, no organelles inthe cytoplasm e xcept ribosomes, and has its genetic material in theform of single continuous strands formi ng coils or loops, characteristicof all organism s in the kingdom Monera, as the bacteria and blue-green algae.
- 51. النواة الحقيقية • Eukaryote • An organism whose cells contain a nucleus surrounded by me mbrane and whose DNA is bound together by proteins (histo nes)into chromosomes • The cells of eukaryotes also contain anendoplasmic reticulum a nd numerous specialized organelles not present in prokaryotes, especially mitochondria, Golgi bodies, and lysosomes. • The organelles are enclosed in a threepart membrane(called a unit membrane) consisting of a lipid layer sandwichedbetween two protein layers. • All organisms except for bacteria andarchaea are eukaryotes. C ompare prokaryote.
- 52. هناك وريقتان لتزةي الكشف عن البكتيرية الحية وهما:- • وريقة الروبة جو المبتلة .Wet mount 1. وريقة النقوة المعلقة Hanging drop 2. • وريقة الروبة جو المبتلة Wet mountتوبي ه ه الوريقة لدراسة شك وترتيب الخاليا البكتيرية، واختبار ندر البكتيريا على الحركة، ومن ها الوري التالية:- 1. ينق التبن في 006 م من الماو، لمد جسبوال نب إزراو التزربة، م التخل من السقاني الةواةية. 2. يعم إوار مرب في منتصف الشريحة النظيسة، من الةال النسوي ، بحيث تكون جبعاده، نسا جبعاد الشريحة ال زازية الرنيقة. 3. توض نور واحد ، من محلو نق التبن، في منتصف الشريحة ال زازية الرنيقة.
- 53. تقلب الشريحة ال زازية، التي تحتوت على اإلوار ، ويلصي 4. اهخير بغواو الشريحة ال زازية الرنيي، المحتوية على نور ماو التبن بح ر. تقلب الشريحة بحيث يصبح غواو الشريحة ال زازية إلى 5. جعلى. توض الشريحة تح المزةر، لدراستةا، م تقلي كمية 6. الضوو السانو ،على العدسة العينية. تحديد اهحياو الدنيقة، في العينة بعدسة نوتةا (01 ، ) Xث 7. بعدسة نوتةا (04 ، ) Xم تعدي نو اإلضاو ، عند ك تغيير العدسة . يالحظ وزود جنواال مختلسة، من اهحياو الدنيقة، في عينة 8. التبن، مث : وزود بكتيريا عصوية، جو كروية وغيرها، كما هو موضح في زدو (2 ) و ( 3 ) وشك (34 ).
- 57. • وريقة النقوة المعلقة كختبار ندر البكتيريا على الحركة • هدف ومبادئ ه ه الوريقة مث الوريقة الروبة، ومن جه ممي اتةا التالية:- 1. مرانبة حركة البكتيريا في نقوة معلقة داخ تزويف زازي مغلي 2. نادراً ما يحدث زساف للشريحة. 3. بقاو الخاليا في حالة نشوة لمد جوو من الوريقة الروبة. وريقة العم 1. تنظف الشريحة ا التزويف تنظيسا ً زيداً Depression Slideم غواةةا بالماو الساخن والصابون إل الة المواد الدهنية العالقة بةا.
- 58. 2. توض جربعة نقو من الماو جو السا لين جو الةال النسوي على ك اوية من غواو الشريحة بواسوة نان البيةة. 3. توض نور من البيةة البكترية في وسو غواو الشريحة ال زازية الرنيقة.
- 59. 4. توض الشريحة على غواو الشريحة ال زازية الرنيقة ، بحيث يكون التزويف مقابال للقور في وسو التزويف، بحيث يكون الغواو ملتصقا م الشريحة. 5. تقلب الشريحة بسرعة م الحساظ على وزود نقوة البيةة البكتيرية في منتصف التزويف.
- 60. النقوة المعلقة تح المزةر، مستعمال العدسة 6. تسح الصغير القو ، ث يخسض المكثف نليال، ويقس الحزاب ز ةيا ً لتقلي اإلضاو للتمكن من رؤية العينة بوضوح. 7. تعد حافة الشريحة لوض حافة النقوة في وسو مزا المزةرت.
- 61. 8. تغير العدسة الصغير إلى كبير القو ، ث إلى ال يتية، بعد وض نقوة ي السيدر، على غواو الشريحة. 9. تسح حافة العينة، م تحريك الضابو الدنيي ببوو، م تعدي اإلضاو ، بواسوة المكثف، حتى ترى البكتيريا بشك واضح. 01.كحظ حركة البكتيريا، عند حافة النقوة المعلقة. 11.تدون المالحظا برس شك البكتيرية، ووريقة تزمي الخاليا البكتيرية ونوعية حركتةا.
- 62. وريقة صبغ البسيوة Simple Stain • وريقة تحضير اللوخة البكتيرية • الةدف من تحضير اللوخة:- 1. هو تحضير غشاو رنيي متزانا من البكتيريا النامية على شريحة زازية، ث إضافة صباغا معينة لصبغةا والكشف عليةا تح المزةر. 2. ومن المعروف بان البكتيريا عديمة اللون، ولتحديد نوعية خالياها، يزب إزراو عملية صبغةا باحد الوريقة التالية:- 3. تحضير اللوخة البكتيرية. 4. إضافة بعض اهصباغ إلى اللوخة لتحديد نوعيتةا من ناحية سالبة جو موزبة لصبغة الزرا .
- 63. وريقة تحضير اللوخة البكتيرية تنظف الشريحة ال زازية زيدا ، بالماو والصابون، .1 وتزسف. تمسك الشريحة من إحدى ورفيةا؛ وترس داةر نورها .2 5.1 س ، على الوزه اهسس من الشريحة. توض نور من الماو على وزه الشريحة المرسو .3 عليةا الداةر بداخلةا، لغرض عم لوخه بكتيرية. تعق عقد الحلقية( اللوبي) ، في نةاية اإلبر النانلة .4 ،على لةب موند بن ن،حتى درزة اكحمرار،وتبرد لمد 01 ثواني. تؤخ كشوة من البيةة البكتيرية، بعقد اإلبر المعقمة. .5 خلو الكشوة بالماو، داخ الداةر على سوح. .6
- 64. بعد لك عق العقد المعدنية، مر جخرى. .7 تعم لوخه بكتيرية من البيةة الساةلة، على شريحة .8 جخرى، بحيث يكون حزمةا العقد المعدنية مرتين إلى ثالثة مرا ( وفي ك مر يزب تعقي العقد وسلكةا)، وتنق إلى داخ الداةر ، م تو يعةا فيةا تو يعا زيدا. تعق الحلقة مر جخرى. .9 تترك اللوخة لتزف، عند درزة حرار الغرفة، دون نسخ .01 جو إمرار الةواو عليةا.
- 65. 11.تثب اللوخة بإمرار الشريحة على اللةب مرتين جو ثالثة مرا . شك (44) وريقة تحضير اللوخة البكتيرية على شريحة زازية من بيئة سائلة وبيئة صلبة
- 66. • صبغ اللوخة البكتيرية : • تعتبر الصباغا Dyesالتي تصبغ البكتيريا مواد كيمياةية، جما جن تكون حامضية مث :- 1. Fuchsin Acidو Eosinالتي تتساع م المكونا القاعدية في الخلية مث :- سيتوبال ، 2. جو ناعدية مث سسرانين جو البلورا البنسسزية Crystal violetالتي تتساع م مكونا الخلية الحامضية. • يت تحضير اللوخة كما هو موضح في الشك (44 )
- 67. .1 )، جو تمسك بملقاو معدني.54وض الشريحة على حام الصبغ (شك شك (54) كيسية إضافة الصبغة إلى اللوخة البكتيرية تغمر اللوخة با ري المثيلين، لمد 03 – 06 ثانية .2 تغس الشريحة بالماو المقور، بعناية إل الة الصبغة ال اةد ، .3 بواسوة جنبوب ننينة الماو المقور. تزسف اللوخة برفي، بوري ما للرووبة، وتترك لتزف. .4
- 68. فح اللوخة تح المزةر • اللوخة المصبوغة، • تسح تح المزةر بواسوة عدسة Xنوتةا 01 ، وبعدها تسح بالعدسة ال يتية التي نوتةا .100X عند السح بالعدسة الشيةية • ال ي (ال يتية)؛ يوض مباشر على اللوخة، دون غواو زازي رنيي. تسز المالحظا م الرس جو • التصوير، لك ما يشاهد تح ).4المزةر( شك 6
- 69. • تزسف ال ي من العدسة الشيةية، باوراي خاصة ب لك. • يرز المزةر داخ صندونه، جو المكان المناسب له. • تنظف الشراةح زيدا، ويتخل الموزود ال ي من عليةا، وتحسظ في الصندوي المخص لحسظةا .