1. 行政院農業委員會畜產試驗所
雞的生長性狀基因檢測
長榮大學生物科技學系
學生：莊兆禎
前言
雞隻會因一些外界環境(如:氣候)的高低及內在因素(如:內分泌)的多寡而影響其生長性能(如:體重、產蛋
數…等)，進而導致養雞場經濟上之損失，因此利用雞cPRL2240泌乳素基因、HSP70熱休克蛋白基因及ESR產蛋基
因基因檢測這項技術來進行養雞場的“選育”，留下較優良的品種(基因型)來培育下一代，將可以減少一些疾病
的產生、體重的不足及產蛋量上的不理想…等情況發生，已達增加整個養雞場經濟上的效益。
介紹
雞cPRL2240泌乳素基因
雞隻在產蛋期間隨著藾菢行為之發生，血液
中泌乳素(prolactin)含量會逐漸增加，且在停
止產蛋時達到最高峰。藾菢性是造成雞隻產
蛋數低落的重要因素之一，通常雞隻藾菢行
為的發生也伴隨著不生蛋的情形，而降低母
雞的產蛋數，造成養雞場經濟上之損失。
雞HSP70熱休克蛋白基因
熱休克蛋白(Heat shock protein, HSP)是指細
胞在反應刺激原的誘導下所生成的一組蛋
白質，特別是環境高溫的誘導。熱休克蛋
白70 (HSP70) 是熱休克蛋白家族的一重要
成員，在動物細胞生長、發育、繁殖、基
因表現及蛋白質合成扮演重要的角色。
目的
為 了 選 殖 、 選 種
步驟
Ingredient Concentration Volume (μ l)
聚合酶Super thermo Taq 5U /μ l 0.15 / 0.2 / 0.2
引子 cPRL2240-2250 F 10 pmole /μ l 0.75 / 1.0 / 1.0
引子 cPRL2240-2395 R 10 pmole /μ l 0.75 / 1.0 / 1.0
核苷酸dNTP 25μ M 1.0 / 1.0 / 1.0
緩衝液10 X Buffer 2.0 / 2.0 / 2.0
滅菌水Distilled water 14.35 / 13.8 / 13.8
模板DNA template 25-40 ng/μ l 1.0 / 1.0 / 1.0
總量Total 20 / 20 / 20
PCR mixture
PCR condition
First step 94℃ 5分鐘
Second step 94℃ 40秒 54℃ / 58 ℃ / 62 ℃ 30秒 72℃ 30秒
Total 35 cycle
Final step 72℃ 5分鐘 4 ℃ forever
電泳 :
於3 ％ agarose gel，0.5X TBE Buffer，100V，電泳70分鐘
染色 :
1.5μ l 6X loading dye + 4μ l DNA template
於0.5μ g/mL Ethidium Bromide (EtBr，溴化乙錠) 中染色15分鐘
雞ESR產蛋基因
動情素為影響鳥類生長與繁殖的重要的
固醇類賀爾蒙之一，一般認為動情素對
細胞的作用是透過動情素與動情素接受
體結合後，調節相關的基因表現所達成。
結果
2011.07.26Marker : 50~500bp 2011.07.27
流水號 日期 結果
8758 07/26 MM
8760 07/26 MM
8761 07/26 MM
8762 07/26 MM
8763 07/26 MM
8764 07/26 MM
8765 07/26 MM
8766 07/26 MM
8767 07/26 MM
8768 07/26 MM
8769 07/26 MM
8770 07/26 MM
流水號 日期 結果
8771 07/26 MM
8772 07/26 MM
8773 07/26 MM
8774 07/26 MM
8777 07/26 MM
8754 07/27 MM
8775 07/27 MM
8776 07/27 MM
8778 07/27 MM
8369 07/27 MM
8367 07/27 MN
8368 07/27 NN
基因型 PCR Product Fragment
MM 124bp / 124bp 1
MN 124bp / 148bp 2
NN 148bp / 148bp 1
判讀 :
SSCP電泳步驟
1.取 8 µl PCR product DNA + 4 µl Denaturing Buffer (SSCP) 以95℃ 12分鐘denaturing，立即置入冰中，移入4℃冰箱中備用。
2.打開Genephor 電泳裝置的電源，並選定冷卻板的溫度(15℃)，打開電泳槽上蓋、電極板，與膠體固定板。
3.滴入少許dd H2O於冷卻板上，剪開GeneGel Excel 12.5/24 kit 電泳膠片，做一翹角(便於取拿)，平貼於冷卻板上(Sample Well置於負極) 。
4.小心掀去電泳膠片之上層膠膜，放下壓克力膠體固定板，剪開GeneGel Excel 12.5/24 kit 電泳膠條，黃色膠體置於正極，透明膠體置於
負極。＊記得沾些水在手上再取膠條，不然膠條易斷裂。
5.將已Denaturing的樣本各取5.5 µl 分別放入Sample Well中，放下電擊板，確實蓋上電泳槽上蓋。
6.打開連接GeneGel電泳裝置的電源，選定600 Voltage，25mA(單片電泳膠使用25mA，兩片用50mA)，及15W，按START進行電泳約2.5hr。
7.完成後，關掉電源，取出膠片，置入GeneStain Automated Gel Stainer中進行染色。
SSCP銀染步驟
1.打開自動染色儀，選定主程式1 (DNA Silver Stain 1)。
2.配製125 ml 1X Fixing solution ( 25 ml 5X Fixing solution + 25 ml 99% ethanol + 75 ml 蒸餾水 )。→ Port 1
3.配製125 ml 1X Staining solution ( 25 ml 5X sodium carbonate + 100 ml蒸餾水 )。→ Port 3
4.配製125 ml Development solution ( 25 ml 5X Sodium carbonate + 170 µl 37% Formaldehyde + 170 µl 2% sodium thiosulphate + 100 ml 蒸餾水 )。
→ Port 4
5.配製125 ml Stopping and Preserving solution ( 25 ml Stopping and Preserving solution + 100 ml 蒸餾水 )。→ Port 5
6.加入 >125 ml的蒸餾水。→ Port 0 ，廢液Port 7、廢液Port 8
7.將擬染色之電泳膠片至於染色槽中，蓋上玻璃蓋。按START一次，再按一次START執行Protocol # 1：DNA Silver Stain。
8.若要同時兩片膠片，須以磁鐵隔條將兩片隔開。
9.染色完成 ( 約 2.5 hr )，再按一次START，待染液吸出後，掀開玻璃蓋，取出膠片，將膠膜覆蓋在膠體上，自然風乾。
2011.08.01 2011.08.05
NN:148 bp
MN:124/148 bp
Control組
無需Marker
Control組
結論
雞場主人將每隻雞隻做了編號以後，確定其各個雞隻的基因，再將其同基因
型的雞隻們做區分，這麼一來他將可以進行選殖選種的系統下去運作，據各
個研究顯示，cPRL2240泌乳素基因，MM型比較不會產生藾菢行為的雞種去跟
MN型或是NN型的雞隻配種，這麼一來就不會繼續產下像NN型這種泌乳素分泌
過量情形的小雞，同樣道理，在HSP70熱休克蛋白基因裡也顯示BB型的雞種較
AA型的雞隻容易因為環境溫度過高而產生休克直接暴斃的情形發生，然而，
ESR產蛋基因FF型也是因為產蛋的天數較少生的蛋也會比較多比較快，基因檢
測的目的就是留下各方面較好的基因來增加整體雞場的經濟效益。
參考資料
雞隻泌乳素基因與藾菢性之關聯性探討
httpwww.angrin.tlri.gov.twcsascsas_2010_39_4_204.pdf
雞種的熱休克蛋白70基因頻率
http://www.angrin.tlri.gov.tw/csas/csas_2005_34_4_135.htm
雞隻動情素接受體基因與母雞早熟性之關聯性探討
httpwww.angrin.tlri.gov.twcsascsas_2010_39_4_205.pdf