Rb51 vs cepa19 MSD Finca Productiva Salud Del Hato
1. ESTUDIO DE CAMPO
DE VACUNACION DE GANADO
CON BRUCELLA ABORTUS CEPAS RB51 Y 19,
EN ALTA Y BAJA PREVALENCIA
DE LA ENFERMEDAD
Verónica Lord, Gerard Schuring, Jhon Cherwonogrodsky,
Mabel Marcano, Gerardo Melendez.
(American Journal of Veterinary Research, Vol 59, No. 8, 1998)
OBJETIVO PROCEDIMIENTOS
Evaluar la inmunidad humoral y de protec- La granja A presentaba alta prevalencia
ción en ganado vacuno a los 12 meses con (39%) de Brucelosis, la granja B tenía baja
Brucella Abortus cepas RB51 y 19, en con- prevalencia (2%), tal como se determinó por
diciones de campo con alta y baja prevalen- resultados serológicos de rutina: inmunodi-
cia de Brucelosis. fusión en gel agar (AGID) y ring test. El gana-
do seronegativo se vacunó una o dos veces
con 5x109 unidades formadoras de colonia
de B. abortus cepa RB51, o una vez con cepa
ANIMALES 19, posteriormente 74 animales (26%) vacu-
nados con RB51 y 30 animales (18%) vacu-
450 hembras seronegativas: 330 terneras nados con cepa 19, se cruzaron con toros
entre 3 y 8 meses de edad y 120 novillas seropositivos, y se mantuvieron en el Hato
entre 10 y 12 meses de edad. infectado de donde procedían.
2. 2 Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19
RESULTADOS en ratones y ganado. La protección obtenida
en el ganado es mejor a la que se observa a la
Todos los animales vacunados con cepa 19, vacunación con cepa 19, además, el ganado
seroconvirtieron 30 días después. Todos los vacunado con cepa RB51 no produce anti-
animales vacunados con cepa RB51 dieron cuerpos específicos polisacárido O, que
negativo en todas las pruebas serológicas, interfieren con las pruebas de diagnóstico
incluyendo la de inmunodifusión el agar gel. estándar. La vacunación con cepa 19 puede
Todos los vacunados con cepa RB51 que causar aborto en el ganado, observación que
fueron preñados, resultaron negativos en la se confirmó en el modelo de rata preñada que
prueba ring test y en las pruebas serológicas causó muerte fetal y placentitis severa, mien-
convencionales después de parir. tras que la cepa RB51 no causa muerte fetal
en ratas preñadas y en el ganado.
CONCLUSIONES En el estudio que aquí se reporta, se compa-
raron las reacciones serológicas inducidas
La cepa RB51 se puede usar como vacuna
por la vacunación en hembras bovinas meno-
viva que no induce títulos de anticuerpos que
res de un año de edad provenientes de hatos
interfieren con el diagnóstico serológico, e
con alta (39%) o baja (2%) prevalencia de
induce una protección del 100% contra cepas
Brucelosis. Los Hatos localizados cerca a
de campo de B. abortus que producen aborto
Mantecal, Estado Apure, en los Llanos de
en ganado vacunado al menos un año antes de
Venezuela. El ganado de tipo Cebú, se vacu-
ser apareadas con un toro infectado. La vacu-
nó una o dos veces con cepa RB51 y una vez
nación con cepa 19 en similares condiciones
con cepa 19. Las hembras fueron servidas
fue menos efectiva que la vacunación con
con toros infectados y su desempeño repro-
cepa RB51.
ductivo se evaluó determinando el número
En el ganado, el agente causal de la de abortos y por cultivo de los tejidos de
Brucelosis es la Brucella abortus, un parásito fetos abortados.
facultativo intracelular que puede causar abor-
tos y disminución de la fertilidad en los ani-
males. La vacuna que contiene B. abortus MATERIALES Y METODOS
vivos cepa 19 se ha utilizado en el mundo
entero para proteger al ganado contra la infec- Animales
ción. Una característica indeseable de la cepa Se seleccionaron dos granjas A y B. El Hato
19 es su habilidad para inducir anticuerpos en de la granja A presentaba alta prevalencia
suero y leche que interfieren con el diagnósti- serológica (39%) a la Brucelosis y el Hato de
co de la Brucelosis. Este problema aumenta a la granja B, baja prevalencia serológica
medida que el animal es vacunado a mayor (2%). Un total de 450 hembras de tipo Cebú
edad. Los anticuerpos para el diagnóstico de 3 a 8 meses de edad y de 10 a 12 meses de
están dirigidos contra la cadena O del lipopo- edad, se seleccionaron para inmunización y
lisacárido de la Brucella. Para evitar este pro- evaluación de la respuesta inmune humoral a
blema, se desarrolló la vacuna cepa RB51; la vacunación con cepa RB51 o cepa 19.
que no tiene la cadena O como parte de su
lipopolisacárido y por eso, no induce anti- Otros 80 animales, 40 de cada granja entre 3
cuerpos indeseables contra la cadena O. y 12 meses de edad, sirvieron como contro-
les no vacunados.
La vacunación parenteral con la cepa RB51
viable de B. abortus produce una protección Antes de iniciar el estudio, se hizo la prueba
sustancial contra el desafío con cepas viru- serológica de todo el hato en ambas granjas y
lentas de Brucella sp, como es la cepa 2308 luego se seleccionó el ganado seronegativo
3. Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19 3
Tabla No. 1 Diseño Experimental
EDAD GANADO No.
GRUPO GRANJA (M) (No.) VACUNA
VACUNACIONES
I A 3-8 30 19 1
II A 3-8 30 RB51 1
III A 3-8 30 RB51 2
IV A 3-8 20 - -
V A 10 - 12 45 19 1
VI A 10 - 12 45 RB51 1
VII A 10 - 12 30 RB51 2
VIII A 10 - 12 20 - -
IX B 3-8 150 RB51 1
X B 3-8 90 19 1
XI B 3-8 40 - -
La dosis fue de 1 ml ( 5 x 109 unidades formadoras de colonia), vía SC.
para el estudio. El ganado seronegativo de generales, se determinó el estado sanitario
cada granja se seleccionó al azar y se distri- del Hato revisando las historias médicas,
buyó en grupos de tratamiento manteniéndo- pruebas serológicas de todo el ganado y cul-
se en la granja de origen en contacto con el tivos bacteriológicos de leche, semen y mues-
ganado seropositivo. Se tabuló el numero de tra de tejidos de fetos abortados.
animales por grupo, edad, cepa de vacuna y
frecuencia de vacunación (Tabla 1).
Vacunas
Debido a condiciones locales fuera de con-
trol de los autores, solo 74 de los 285 anima- Cepa RB51 de Brucella abortus en viales de
les (56%) vacunados con cepa RB51 y 30 de dosis individuales liofilizada. La vacuna
los 165animales (18%) vacunados con cepa cepa 19 se preparó en el laboratorio de
19, se sirvieron con toros seropositivos des- Brucelosis (Venezuela) según el método de
pués de los 24 meses de edad (madurez Alton y colaboradores. La vacuna se admi-
sexual al menos un año después de la vacu- nistró vía SC en un volumen de 1 ml que con-
nación). En la granja A de 60 terneras y 75 tenía 5 x 109 unidades formadoras de colonia
novillas vacunadas con cepa RB51, 20 y 24 (CFU). La cepa RB51 se administró 1 ó 2
respectivamente se seleccionaron para ser veces; con intervalo de 30 días. Todo el gana-
servidas. De las 30 terneras y 45 novillas do recibió su última dosis antes de los 12
vacunadas con cepa 19, diez de cada grupo meses de edad. La cepa 19 se administró una
se seleccionaron para ser servidas. En la gran- sola vez.
ja B, de 150 terneras vacunadas con RB51,
treinta se seleccionaron para ser montadas y Pruebas serológicas
de 90 bovinos vacunados con cepa 19 se
seleccionaron 10 para ser servidas por toros Las muestras de sangre se obtuvieron de la
infectados. La mitad de las hembras control vena yugular en recipientes sin aditivos. Las
en cada granja fueron servidas. En términos muestras se tomaron el día antes de la vacu-
4. 4 Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19
nación (Día 0) y luego los días 30, 60, 90, exposición a antisueros mono específicos, se
120, 180, 210 y 240 después de la vacuna- hicieron en colonias con características típi-
ción. El suero se obtuvo por centrifugación y cas del género Brucella.
transportó refrigerado al laboratorio, donde
se congeló a -20 grados Centígrados, hasta
que se hicieron las pruebas serológicas. Los Análisis estadístico
sueros se evaluaron utilizando 6 pruebas: El riesgo relativo (RR) de la prevención del
aglutinación rápida en placa, aglutinación aborto se calculó para las vacunas de RB51 y
estándar en tubo, prueba de mercaptoetanol, cepa 19. Los efectos de la edad de vacuna-
prueba rivanol (RIV), prueba de la tarjeta, y ción y del Hato, se determinaron cuando fue
la prueba de fijación del complemento (CF), posible y se controlaron cuando era necesa-
utilizando antígeno de células totales de B. rio por estratificación y cálculo del Mantel
abortus cepa 1119-3 preparado por el méto- Haenzel (MH) estimados con intervalos de
do de Alton y colaboradores. Las reacciones confianza basados en las pruebas, utilizando
del ganado vacuno se consideraron positivas software en computador. La significancia de
en las siguientes medidas: Aglutinación la asociación se determinó por el uso de la
estándar en tubo: 200 UI; prueba de tarjeta se prueba exacta de Fisher.
consideró positiva con reacciones leves;
pruebas RIV: 1:100; mercaptoetanol: 100
UI; prueba CF: 13 UI (muestra diluida RESULTADOS
1:5).En animales control no vacunados, una
lectura de 100 UI para todas las pruebas de Todos los 285 animales vacunados con cepa
aglutinación (excepto la prueba RIV de 50 RB51 (75 novillas y 210 terneras a las que se
UI y la prueba CF de 13 UI) se consideró les aplicó 5x109 CFU, 1 ó 2 dosis), presenta-
positiva. La prueba del ring test se realizó en ron resultados negativos serológicos inclu-
muestras de leche obtenida después del pri- yendo la prueba AGID y la prueba de ring test
mer parto. después del primer parto. Las terneras perma-
necieron seronegativas en todo el trabajo.
También se evaluaron los sueros por una
prueba de inmunodifusión en gel agar Todos los animales vacunados con cepa 19,
(AGID) utilizando el polisacárido -O (cade- seroconvirtieron el día 30 después de la vacu-
na - O) aislado de al superficie de cepas lisas nación, sin tener en cuenta la edad o la granja
de B. abortus. La prueba se llevó a cabo de origen. El número de positivos disminuyó
como se describió, utilizando gel de agarosa en posteriores muestras de sangre.
al 1% preparado en borato buffer (pH 8.3) El día 240 después de la vacunación, 2 terne-
con 10% de NaCI. Los sueros en prueba de ras (6.7%) y 6 novillas (13.3%) en la granja
AGID se consideraban positivos, cuando las A vacunados con cepa 19 tenían resultados
líneas de precipitación aparecían 24 a 48 positivos, en la prueba AGID, que indica que
horas después del inicio de la prueba. se infectaron. Este ganado positivo a AGID
cuando se probó con el ring test, tuvieron
reacciones fuertes. En la granja B, todo el
Cultivos bacteriológicos ganado vacunado con cepa 19 dio negativo
en la prueba de AGID.
Muestras de tejido de fetos abortados (bazo,
nódulos linfáticos y contenido gástrico) y En los grupos control de ambas granjas, 45%
muestras de semen de toros se evaluaron por (18/40) de los animales de la granja A fueron
bacteriología. Las muestras se procesaron positivos y 20% (8/40) de los animales de la
utilizando métodos estandarizados. Las prue- granja B fueron positivos en todas las prue-
bas bioquímicas, sensibilidad a colorantes y bas serológicas.
5. Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19 5
Tabla No. 2. Resultados de las Pruebas Serológicas del ganado Vacuno en la Granja A: Terneras y
Novillas Vacunadas con Cepa 19 de Brucella abortus.
PRUEBA - No. ANIMALES REACTIVOS
DIAS No. ANIMALES RPAT STAT CT RIV 2 -ME CF AGID
TERNERAS (3 - 8 M)
30 30 29 29 29 29 29 29 0
60 30 25 25 25 25 25 25 0
90 30 25 25 20 20 20 20 0
120 30 24 20 22 11 13 22 0
180 30 18 14 20 10 12 19 0
210 30 12 8 10 8 10 9 0
240 30 5(2+)* (2+) 2+ 2+ 1 3(2+) 2
NOVILLAS (10 - 12 M)
30 45 45 45 45 45 45 45 0
60 45 45 45 45 45 45 45 0
90 45 45 39 45 40 40 40 0
120 45 45 37 18 14 14 16 0
180 45 35 30 15 10 12 10 0
210 45 25 20 10 6 8 4 0
240 45 18(6+) 15(6+) 8(6+) 6+ 7(6+) 8(6+) 6
* = No. de animales de 5 con resultados positivos de AGID.
RPAT = Aglutinación rápida en placa.
STAT = Prueba de aglutinación estándar en placa.
CT = Prueba de la tarjeta.
RIV = Prueba de Rivanol.
2-ME = 2 - Mercaptoetanol.
CF = Fijación del complemento.
AGID = Inmunodifusión en agar gel.
Tabla No. 3. Resultados de las Pruebas Serológicas del Ganado Vacunado en la Granja B: Terneras
Vacunadas con Cepa 19 de Brucella abortus.
PRUEBA - No. ANIMALES REACTIVOS
DIAS No. ANIMALES RPAT STAT CT RIV 2 -ME CF AGID
30 90 90 90 90 90 90 90 0
60 90 90 90 90 90 90 90 0
90 90 90 89 90 85 90 90 0
120 90 85 82 36 33 35 30 0
180 90 46 43 22 20 20 24 0
210 90 18 13 14 10 10 10 0
240 90 8 5 0 0 1 0 0
6. 6 Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19
Diez y ocho de 20 (90%) de los animales El efecto del Hato se evaluó para cada vacu-
control de granja A apareados con toros sero- na por separado comparado con los controles
positivos y ocho de los 20(40%) de los ani- no vacunados. La cepa RB51 protegió el
males control de granja B apareados con ganado en ambas granjas (P < 0.0001) y el
toros seropositivos, abortaron. Hato no afectó el resultado de protección
Ninguno de los 74 animales vacunados con (RR = 2.86; RRMH = 300 (2.30; 3.91)). El
cepa RB51 (Granjas A y B) apareados con riesgo de protección de aborto de la vacuna
toros seropositivos, abortó. cepa 19 fue afectado por la granja (RR =
0.99; RRMH = 1.83 (1.06; 3.16)). La cepa 19
Catorce de 30 (47%) de los animales vacu- no protegió el ganado en granja A (RR = 4.5
nados con cepa 19 (Granjas A y B) aparea- (1.1; 18.27); P = 0.031), y si protegió en la
dos con toros seropositivos, abortaron (11 en granja B (RR = 1.17 (0.68; 2.00); P = 0.702);
la granja A y 3 en la granja B). (Tabla 4). las vacas sin vacunar de la granja B, tuvieron
En la granja A se evaluó el efecto de la edad menos posibilidad de abortar que vacas no
en la protección atribuible a la vacunación vacunadas en la granja A (RR = 0.17 (0.04;
en ganado inoculado con RB51, comparado 0.65); P = 0.0022): Cuando se consideró un
con cepa 19. La edad no afectó la prevención menor riesgo de aborto para el ganado con-
(RR = 2.22; RR Mantel Haenszel = 2.23 trol en la granja B, la protección inducida por
(1.66; 2.99)) y RB51 mejoró la protección la cepa 19 no se diferenció en las granjas A y
comparada con cepa 19 cuando el ganado se B (RR = 0.64 (0.34; 1.21); P = 0.26) y tampo-
vacunó de 3-8 meses (P = 0.0018) y de 10-12 co hubo diferencia para el ganado vacunado
meses (P = 0.00016). con cepa RB51 (RR = 1).
Tabla No. 4 Resultados de las Pruebas Serológicas de los Animales de Control.
PRUEBA - No. ANIMALES REACTIVOS
DIAS No. ANIMALES RPAT STAT CT RIV 2 -ME CF AGID
GRANJA A
0 40 0 0 0 0 0 0 0
30 40 15 0 0 0 0 0 0
60 40 18 18 17 16 17 17 18
90 40 18 18 18 18 18 18 18
180 40 18 18 18 16 18 17 18
210 40 18 18 17 16 17 17 18
240 40 18 18 10 9 10 10 18
GARNJA B
0 40 0 0 0 0 0 0 0
30 40 15 0 0 0 0 0 0
60 40 8 8 0 0 0 0 5
90 40 8 18 18 18 18 18 18
180 40 18 18 18 16 18 17 18
210 40 18 18 17 10 17 17 18
240 40 18 18 10 9 10 10 18
7. Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19 7
La Brucella abortus variedad 1 se aisló de constantemente con el otro ganado infecta-
tejidos de fetos abortados y semen de toros do o no de la granja.
seropositivos; sin embargo no se observaron
El cuadro serológico observado en este estu-
colonias rugosas. La Brucella sp aislada
dio, indicó que ningún animal vacunado con
necesitó una atmósfera de 10% de CO2 y
RB51 seroconvirtió sin tener en cuenta si
creció en presencia de 1 mg de eritritol / ml
recibió una o dos vacunaciones con esta
de medio de cultivo. Todos los aislados fue-
cepa. Esto confirma los resultados de estu-
ron por eso, considerados como cepas de
dios anteriores.
campo y no cepas 19 o RB51.
Hasta un 40% de animales control no vacu-
nados seroconvirtieron durante este periodo.
DISCUSION Más ganado control de la granja de alta pre-
La vacuna Brucella abortus cepa RB51 es valencia (40%), seroconvirtió comparado
rugosa, atenuada, estable mutante de la cepa con el ganado control de la granja de baja
2308 y es actualmente la vacuna oficial de prevalencia (20%), reflejo de la alta presión
Brucelosis bovina utilizada en los E.U.. La de infección ejercida sobre este ganado. Los
cepa RB51 esencialmente no tiene cadena - resultados serológicos indicaron que el gana-
O como parte de su LPS y por eso, no induce do vacunado con RB51 es protegido contra
producción anticuerpos a este antígeno. la infección producida por cepa de campo.
Resultados de estudios previos en laborato- El cuadro serológico de la cepa RB51 con-
rio indican que la cepa RB51 puede proteger trastaba mucho con el de la cepa 19. El gana-
al ganado contra la infección de cepas viru- do vacunado con cepa 19, tal como se espe-
lentas de B. Abortus, en la misma medida raba, seroconvirtió dentro de los 30 primeros
que lo hace la cepa 19, pero sin producir con- días después de la vacunación. La prueba de
fusiones con las pruebas serológicas tradi- AGID diferencia el ganado seropositivo
cionales. vacunaado con cepa 19 del ganado seroposi-
tivo infectado en el campo, los resultados
derivados de la prueba de AGID sugieren
El objetivo de este estudio de campo fue que algunos animales vacunados con cepa
determinar si resultados previamente 19, del hato de alta prevalencia, se pudieron
reportados de la eficacia de la cepa RB51 y haber infectado en el estudio. Como se espe-
las pruebas Serológicas son válidas para raba, los anticuerpos inducidos por la vacu-
terneras y novillas vacunadas bajo condi- nación con cepa 19 en las novillas, permane-
ciones de campo de alta o baja prevalencia cieron por mayor periodo de tiempo que los
de la enfermedad. Aunque la habilidad de anticuerpos inducidos en las terneras.
cepa RB51 para proteger al ganado contra
el aborto y la infección a niveles similares Son de gran interés los datos obtenidos del
obtenidos con la cepa 19, ha sido documen- ganado vacunado y control con relación a la
tada, no se sabe si esto se puede lograr en frecuencia de abortos. No abortó ninguno de
una alta infección (alta prevalencia de bru- los animales vacunados con cepa RB51,
celosis en el hato). Para obtener un respues- apareados con otros infectados que perma-
ta a esta pregunta, hembras bovinas vacuna- necieron en el hato infectado. En contraste,
das con cepa 19 o cepa RB51, se aparearon 90% del ganado control en el hato A de alta
con toros infectados y permanecieron en el prevalencia, abortó y 40% de los animales
hato para observar si ocurría aborto. Todo el control del hato B de baja prevalencia, abor-
ganado en este estudio (vacunados y con- tó, lo que indica claramente que el ganado no
troles no vacunados) eran seronegativos al vacunado se infectó y que la mayor preva-
comienzo del estudio, pero se mezclaban lencia de la enfermedad en el hato (granja A)
8. 8 Vacunación de ganado con brucella abortus cepas RB51 y 19
producía una ,mayor presión de infección pruebas convencionales serológicas, inclu-
porque el ganado no vacunado de la granja B yendo la prueba de AGID. También indica
era menos susceptible a ser infectado que el 9
que la vacunación con 5x10 CFU de cepa
ganado no vacunado de la granja A (P = RB51 es muy efectiva para proteger al gana-
0.0022). Los resultados del cultivo bacterio- do contra la infección y en proteger ganado
lógico indican que los abortos se atribuyeron preñado contra el aborto bajo condiciones de
a cepas de campo lisas de Brucella sp biovar campo en hatos con alta o baja prevalencia
1 y no a cepa 19. Los datos indican que la de brucelosis. Esta protección, probada al
cepa RB51 protege al ganado contra el abor- menos un año después de la vacunación, fue
to sin importar la prevalencia de la enferme- superior a la protección producida por una
dad en el campo y la edad de vacunación (P < vacunación de 5x109 CFU de cepa 19.
0.0001) y que esta protección es mejor que la
inducida por cepa 19.
BIBLIOGRAFIA
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En conclusión, los resultados de este estudio
de campo confirman de nuevo que hembras
bovinas vacunadas con cepa RB51, una o
dos veces a los 3 a 8 meses de o 10 a 12 meses
no inducen a seropositividad, utilizando las