Dengue 2024 actualización en el tratamiento autorización de los síntomas trab...
Tesis de brucelosis agustin 27 06
1. Facultad de Ciencias Veterinarias
-UNCPBA
Saneamiento de de brucelosis bovina.
Vicente, Agustín; Bergonzelli, Pablo; Catena, María; Estein, Silvia
Mes, año de la presentación
Tandil
Saneamiento de un establecimiento lechero que ostentaba la condición de libre sin
certificación oficial de brucelosis bovina.
2. La producción realiza es bovinos de leche presentada como parte de los requisitos para
optar al grado de Veterinario del alumno: Vicente, Agustín
Tutor: Medico Veterinario, Bergonzelli, Pablo
Director/a: Dra. Catena, María
Co-Director/a: Dra. Estein, Silvia
AGRADECIMIENTOS
A toda mi familia, especialmente a mis padres Graciela y Rodolfo, y hermanos Ignacio,
Facundo y Sebastián por el incansable apoyo en la vida y mis estudios.
A mi abuela, Nelly, por estar siempre cerca para lo que necesitase.
A mi tutor, Bergonzelli Pablo, por aconsejarme y brindarme herramientas para el
desarrollo profesional.
3. A Leandro, Franco, Facundo, Guillermo y Juan de la Veterinaria “Agrovet Integral”
por el trato amistoso y el compañerismo durante mi Residencia.
A mi directora, Catena María por acompañarme desde el inicio y en todo momento en la
realización de esta tesina, siempre con la mejor de las predisposiciones.
DEDICATORIA
Lo dedico a mis padres, hermanos, abuela, novia, familiares directos y amigos.
5. Resumen
El objetivo de esta tesina fue presentar un caso que un veterinario acreditado pudo
controlar la brucelosis bovina en un establecimiento. La empresa láctea le informo al
productor que la prueba de anillo en leche (ring test) dio positiva. El médico veterinario
desencadena una serie de acciones para erradicar la enfermedad en el rodeo y volver a
certificar el tambo como “libre”.
Se realizan 5 sangrados consecutivos con intervalos de 45-60 días. Después de cada uno
de los 3 primeros sangrados que dieron positivos de inmediato se eliminaron del campo
los animales (97 animales positivos de un total de 595 animales).
Las pruebas que utilizo de rutina el laboratorio de red acreditado fueron BPA (prueba
tamiz), SAT (WRHIT) y 2-MERCAPTO (pruebas confirmatorias), y FPA (polarización
fluorescente), este se utilizo solo en el primer sangrado para saber cuáles animales eran
realmente positivos a la enfermedad luego de dar positivos a las pruebas confirmatorias.
Los siguientes sangrados el laboratorio de red utilizo las pruebas tamiz y confirmatorias.
6. La prevalencia se redujo entre el primer sangrado (82 animales de 694) con respecto a
los 2 sangrados consecutivos (26 animales positivos de 621 animales totales), se ve que
la prevalencia bajo un 8%.
Los animales positivos a estas pruebas fueron eliminados del establecimiento, con esto
se logro el saneamiento y posterior declaración libre del establecimiento en cuestión.
7. 1
Introducción y antecedentes del tema:
Faltan cita
La brucelosis bovina es una enfermedad infectocontagiosa causada por la bacteria brúcela spp la
cual puede infectar una amplia variedad de animales, tanto domésticos como salvajes. Se
conocen seis (6) especies diferentes del género Brucella de los cuales la B. abortus, B.
melitensis, B. suis y B. ovis afectan a los animales productores de alimentos causando grandes
pérdidas en la producción de carne y leche. Todas las especies excepto la B. ovis causan
infecciones en humanos y están relacionadas antigénicamente. La enfermedad clínica ocurre
durante la madurez sexual y se manifiesta por abortos, retención placentaria y epididimitis.
El síntoma más importante en brucelosis bovina es el aborto tardío.
La eliminación de brucelas por vía vaginal puede comenzar una semana antes del
parto/aborto hasta 45-60 días posteriores al mismo.
La cantidad de brucelas eliminadas es variable y puede alcanzar hasta
1x1014/gramos de placenta (rumiantes).
La eliminación de brucelas por vía mamaria es intermitente pero se puede extender a
lo largo de la lactancia.
En el caso de necesitar ordeñar animales infectados, estos deben pasar en último
término desinfectando las instalaciones con posterioridad.
_Se debe separar inmediatamente del rodeo a los animales preñados en los que se
determine infección brucélica
La brucelosis solamente genera abortos cuando ingresa por primera vez al animal, luego este
queda como portados asintomático, y la brucela se acantona en los ganglios regionales de la
glándula mamaria, aparato reproductor femenino. Cuando esta hembra en la siguiente gestación
llega a término y pare una hembra, esta hembra es portadora asintomática de la enfermedad
hasta su parto, es en este momento si se realiza serología da como resultado positivo a la
enfermedad.Brucela tiene predilección decidida por el utero gravido, ubres, y ganglios
linfáticos, capsula articulares y bolsas. Después de la invasión inicial, se produce localización en
principio en los ganglios linfáticos que drenana la zona, y después se propaga a otros tejidos
linfoides incluyendo el bazo y ganglios linfáticos mamarios e iliacos. En bovinos, la infección
puede persistir en los ganglios durante corto tiempo, pero no puede observarse en forma
permanente ya que no se producen localizaciones en el utero y ubres no maduras. En la vaca
adulta no preñada, suele ocurrir localización en la ubre, y utero, si se hace gravido, se infecta a
partir de las fases bacteremicas periodicas que se originana en las ubres. ((D.C Blod y J.A
Henderson), 1973)
El período de incubación es altamente variable y es el aspecto más problemático de la relación
huésped parásito.
La brucelosis está diseminada por todo el territorio nacional, causando problema en el ganado
bovino por las pérdidas económicas por la enfermedad misma y restricciones en su comercio.
Es una enfermedad de tipo zoonótico, se transmite de los animales al ser humano. Las vías
comunes de infección en el hombre son por la ingestión de leche cruda (no pasteurizada). .
La mayoría de los animales se infectan directamente a través de la mucosa
oronasal, por ingestión de alimentos contaminados o por inhalación de polvo de los
establos con microorganismos que los animales han secretado, con la leche o los
8. 2
exudados vaginales después del aborto (Rivers et al., 2006), y la piel (Carter, 1982).,
especialmente afectando las personas en contacto cercano,como productores o veterinarios.
Reglamentación de SENASA:
Artículo3 - La vacunación antibrucélicaobligatoriaincluye exclusivamenteal cienporcien
(100%) de las ternerasde tres(3) a ocho (8) mesesde edadcon VacunaBrucellaAbortusCepa
19, controladay aprobadapor el ServicioNacional de SanidadAnimal yCalidad
Agroalimentariae identificadaconestampillaoficialconsuserie yvencimiento,se efectuará
de acuerdoa loprevistoenlapresente resolución.
Artículo5 - La campaña de vacunaciónantibrucélicaseráefectuadabajoel sistemade
simultaneidadconlascampañasde vacunaciónantiaftosa.
Todo animal susceptible alaenfermedad(machosenterosmayoresde seis(6) mesesy
hembrasmayoresde dieciocho(18meses) enlacategoríareproductores,deberácontarcon
un certificadode seronegatividadotorgadoporMédicoVeterinarioAcreditadoypruebas
serológicasrealizadasenlaboratoriode red.
EstablecimientoenSaneamiento:esaquel establecimientoque harealizadounsangrado
inicial ala totalidadde lahaciendaenlascategorías susceptiblesconpruebasserológicasen
laboratoriosde red.
EstablecimientoSaneado: esaquel establecimientoque haalcanzado dos(2) sangradostotales
consecutivosnegativoscon sesenta(60) acientoveinte (120) días de intervalo,conpruebas
serológicasenlaboratoriosde red.
EstablecimientoOficialmente Libre:esaquel establecimientoque haalcanzado tres(3)
sangradostotalesconsecutivosnegativosenlascategoríassusceptibles,realizandolos dos(2)
primeroscon sesenta(60) a cientoveinte (120) díasde intervaloyel terceroenunplazono
mayor a trescientossesentaycinco(365) días, con pruebasserológicasenlaboratoriosde red.
Recertificación
Artículo14. - La recertificaciónque permite alosestablecimientosoficialmente libres
continuarcon el statussanitarioadquirido,serárealizadaanualmente mediante unaserología
realizadaala totalidadde animalessusceptibles.
Prevalencia en el ganado: 5-10 %, en bovinos 2,5% en la Provincia de Bs. As.
(año 2006)
.
Evaluación de brucelosis y tuberculosis bovina en establecimientos de cría y tambo de
la región centro de Argentina. 2012
Magnano, G.1
; Schneider, M.1
; Bérgamo, E.1
; Lovera, H.1
; Navarro, F.1
; Macías, A.1
; Sticotti, E.1
;
Mació, M.1
; Giraudo, J.1
El objetivo fue evaluar la presencia de brucelosis y tuberculosis bovina en establecimientos de cría y
tambo de la región central del país los que, en su mayoría, no realizan actividades de saneamiento
9. 3
sobre ambas enfermedades.
Se analizaron 4361 animales para brucelosis y 1671 para tuberculosis, pertenecientes a 71
establecimientos. El 4,9% de los animales y el 40,9% de los establecimientos fueron positivos a
brucelosis; el 6,8% y el 29,0% respectivamente a tuberculosis
Acá hay dosprevalenciasque me parecenimportante .Pode sredactarde acaPREVALENCIA
EN ARGENTINA Y BS AS
TécnicasoficialesporSENASA:
Éstas utilizan antígenos celulares constituidos por suspensiones de Brucella abortus inactivadas
en fase lisa. La prueba del BPA ("buffered plate antigen") .Esta prueba se emplea como tamiz o
criba, dada su alta sensibilidad, bajo costo operativo y sencillez. Dentro de las pruebas
complementarias, la prueba de seroaglutinación lenta en tubo (SAT) es una prueba semi-
cuantitativa, muy sensible a Ac de clase IgM detectando también IgG2. Su especificidad y
sensibilidad son relativamente bajas. Esta prueba se realiza en forma pareada con la prueba del
2-mercaptoetanol que está orientada a neutralizar la actividad aglutinante de los Ac de clase
IgM, los cuales predominan tras una vacunación, mediante la despolimerización reductora de
esta Ig. La prueba de Fijación de Complemento (FC) aparece como la menos afectada por los
Ac residuales post-vacunación. En este sentido puede considerarse como la más específica, y
sigue siendo "la prueba" de referencia en brucelosis a nivel internacional y por otro lado es la
prueba confirmatoria en nuestro país.
En los últimos años se han validado las pruebas inmunoenzimáticas que emplean LPS como
antígeno (ELISA indirecto y ELISA competitivo) y la polarización fluorescente (FPA) que
poseen mayor sensibilidad y especificidad en relación a las pruebas convencionales antes
mencionadas.
PAL y/o RING TEST: (prueba de anillo en leche). Se utiliza como prueba de vigilancia
epidemiológica. Se diseño para detectar ACS (IgG e IgM) en leche. Estos Ac´s
reaccionan con el antígeno coloreado con hematoxilina formando un compleja Ag-ACS
que quedara adherido a la superficie del glóbulo graso y asciende con ella a la
superficie, formando una capa o anillo de crema de color purpura azulada, de intensidad
variable según el grado de reacción. Paralelamente desaparece parcial o totalmente la
tinción de la columna de leche. Si la muestra no contiene Ac´s específicos, el Ag no se
fijara a los glóbulos grasos y permanecerá distribuido en forma uniforme, coloreando la
columna de leche, mientras que la capa de crema forma un anillo de color blanco
natural. El porcentaje de crema de la muestra influye en la prueba, ya que la formación
del anillo de crema en la superficie depende del tenor graso.
La prueba de anillo en leche se usa especialmente como diagnostico presuntivo (prueba
indirecta) para reducir rebaños infectados. También se emplea la vigilancia
epidemiológica en áreas libres y de control de la enfermedad, ayuda a descubrir establos
infectados.
Se extrae la muestra del tanque para realizar la prueba de vigilancia epidemiológica
(PAL) y si sale positiva, se examina a la totalidad de animales que en ese momento se
están ordeñando, por las pruebas serológicas para identificar los infectados.
Ventajas: las muestras no son tomada en forma invasiva al compararlas con las pruebas
serológicas, no estresa al animal ni tampoco produce el descenso de la producción.
10. 4
Su uso permite controlar periódicamente la brucelosis en los establecimientos, además
contribuye si la infección se ha reinstalado en el establecimiento lechero.Ajuste del
tamaño de la muestra según el tamaño del establecimiento:
menos de 150
1 mL
150-450 2 mL
451-700 3 mL
Interpretación:
Lectura color del anillo y de la columna de leche
Negativo anillo de crema color blanco.la columna color lila y/o azulada
positivo +
anillo y columna de leche con la crema del mismo color (morado o azulado
suave)
positivo ++
anillo de crema color (morado o azulado) es más pronunciada que la
columna de leche
positivo +++
anillo de crema de color azulado o morado marcado, la columna de leche
con algo de color
positivo ++++ anillo de crema morado o azulado intenso; columna de leche es blanco
11. 4
FPA: tiene la capacidad de ser una prueba multi especial, permite el diagnostico
presuntivo de brucelosis en bovinos y demás especies. Esta prueba tiene la capacidad de
distinguir animales infectados de brúcela abortus de los animales vacunados con CEPA
19, y los animales con reacción cruzada con bacterias gran negativas en más de 90% de
los casos.(manual de brucelosis SENASA 202009) (JIMÉNEZARIAS, 2009)
Es una prueba homogénea.
Las medidas de lectura se expresan en unidades de mili polarización (umP). Sin
embargo, cada país debe efectuar su validación para determinar el corte de la misma.
El valor de corte en la Argentina se ha determinado en 94%umP
Negativos: aquellos animales que se encuentran por debajo de este valor
Sospechosos: animales que se encuentran entre 94%umP y 104%umP
Positivos: valores igual o mayor a 105%umP
El ensayo de certificación de rebaños libres se apoya en el de polarización fluorescente
(FPA) puede ser ejecutado en un laboratorio simple o hasta en el campo. Es rápido y de
fácil ejecución, requiere volúmenes menores de suero y no es afectado por la hemólisis.
Además, es capaz de distinguir animales vacunados de no vacunados, aunque no exista
una explicación razonable para este fenómeno.
Este establecimiento en cuestión fue a lo largo de 3 años creciendo, por la compra
de animales, que eran de distintas categorías y hasta de peso, y provenían de otros
establecimiento productivos (3 en total). El cual en uno de ellos se realizo la
compra de 18 vaquillonas (250 kg y 10 meses), que estas es la categoría que se
escapa para realizar la serología contra brucelosis. Estos fueron comprados el
9/8/11 y se sirvieron. Ya TIENEN la edad de realizarles el sangrado como lo
establece la resolucion de SENASA, pero lo que sucede que este establecimiento en
cuestión realiza el sangrado en septiembre porque debe presentar el certificado de
libre en octubre, quedando estos animales fuera del sangrado. Aquí es donde surge
el problema, esta categoría que ingreso se sirvió, se preño, los abortos empezaron a
surgir en septiembre un mes antes de la fecha estimada de partos. Del total
compradas (18) 9 abortaron (50%) con una diferencia de 15 dias (tormenta de
abortos). Esto nos hace pensar que ingreso por estos animales la enfermedad al
establecimiento, por llegar hasta el parto sin un sangrado que comprueben que
esténlibres de esta enfermedad.
Al ocurrir este acontecimiento de establecen pautas/medidas de manejo para
volver a controlar la enfermedad en el establecimiento en cuestión.
Materiales y métodos:
Ubicación geográfica del establecimiento: Este trabajo se realizo para saber o generar
hipótesis de las causas que en un establecimiento lechero de la ciudad de Daireaux se
12. 5
logro el control y la erradicación de la brucelosis. El establecimiento lechero se
encuentra a 80 km hacia el sur de San Carlos de Bolívar y a 20 Km al norte de
Daireaux, y a 30 Km al este de Hipólito Irigoyen.
División de la superficie del establecimiento: La superficie con la que cuenta el
establecimientos son de 500 Has de las cuales 100 Has son destinadas a la recría,
preparto, y vacas secas. El resto de las Has son destinadas para realizar cultivos para la
alimentación de dichos animales. El suelo del campo es franco-arenoso, lo que permite
que se realicen distintos cultivos para la realización de silos que son a base de maíz y
cebada, que son uno de los componentes de la dieta del tambo.
Conformación del personal del establecimiento: El personal que conforma el
establecimiento son 7, el dueño, el encargado de guachera, de la recría, del tambo y sus
tres ayudantes, míseros.
Distribución de los servicios: En este tambo los servicios y los partos se producen en 3
momentos del año, en otoño y primavera para las vacas del tambo y en invierno para las
vaquillonas de primer parto.
Desde el 2008 se empezó a incorporar animales jóvenes de establecimientos. Motivo
por el cual establecimiento creció el 30% acumulado. La cantidad total de animales es
de 694
La categoría ingresada es animal no susceptible de sangrado, ternera holando Argentino
entre 6 y 14 meses también se incorporaron vaquillonas preñadas las cuales a pesar de
provenir de establecimientos libres fueron chequeados por serología. Dicho sangrado se
realizo en el establecimiento de origen no trasladándose los animales hasta tanto se
tengas los resultados serológicos. La totalidad de las vaquillonas preñadas incorporadas
al establecimiento procedieron de lotes de animales en los que las pruebas resultaron
100% negativas para todos los bovinos jóvenes muestreados.
En el mes de noviembre del 2012 el dueño del establecimiento comunica que la
empresa láctea le había informado de un ring test de hasta tres cruces positivo. De
inmediato el veterinario acreditado programa un sangrado de la totalidad de los
animales susceptibles (694)
Los animales positivos en el primer sangrado a las pruebas de diagnósticos de
brucelosis oficiales, reglamentadas por SENASA, que realizo el laboratorio de red como
rutina BPA, 2-MERCAPTO y SAT, se les realizo una prueba de confirmación que es el
FPA (técnica de polarización fluorescente).
De todos modos, esta técnica es capaz de discriminar animales vacunados con cepa 19
de aquellos infectados con B. abortus a partir de los 45-60 días post vacunación,
contribuyendo en una gran medida a evitar la eliminación de animales falso positivos
Esta prueba se caracteriza por diferenciar los Ac’s vacúnales de los Ac’s que se produce
cuando el animal está infectado o enfermos.
13. 6
En los posteriores sangrados (2° (621) ,3° (595) ,4° (595) ,5° (595)), el laboratorio de
red realizo como pruebas de diagnósticos para la enfermedad brucelosis BPA, SAT y 2-
MERCAPTO solamente.
Por medio del programa que utiliza el veterinario a cargo de la sanidad del
establecimiento se pudo tomar datos referente a la cantidad de abortos que se
produjeron en cada trimestre para comparar el año 2011 con el 2012,
Resultados:
A continuación se observa los resultados obtenidos de la totalidad de animales
susceptibles, y de estos los que realmente contienen la enfermedad
Tabla 1: resultados del primer sangrados del total de animales por categoria
Figura 1: distribución de los resultados serológicos según la categoría
De los animales positivos a BPA (82) sobre un total de 694 animales. A los positivos se
les realizo FPA y estos son los resultados que se obtuvieron.
Se observo en la figura 2
73
9
82
403
209
612
476
218
694
vacas vaquillonas total
primer sangrado
positivas negativas total
primer sangrado 11/7/12
positivas negativas Total
vacas 73 403 476
Vaquillonas 9 209 218
Total 82 612 694
14. 7
Figura 2: resultados que arrojo la prueba FPA de los animales positivos en el primer
sangrado
Por la prueba FPA, la cantidad de animales realmente enfermos son 71, 1 es sospechoso
y 10 animales son negativos a contraer la enfermedad. como se muestra en la figura 2
Se incorporaron 9 animales que animales, que estos en el primer sangrado tenían menos
de 16 meses de edad para tomar muestras de ellos. Entonces ahora en el segundo
sangrado cumplen con los requisitos que establece la resolución e ingresan para
realizarles el primer sangrados a ellos, pero el segundo al resto de los animales
susceptibles del establecimiento en cuestión.
El tercer sangrado se realizo a los 60 días de la última extracción (18/11/12) y los
resultados que obtuvimos fueron que la totalidad de los animales susceptibles fue
negativa. Lo mismo ocurre con el 4to muestreo consecutivo (18/1/13), la totalidad de
los animales susceptibles resultaron negativos a las pruebas serológicas realizadas por el
laboratorio de red acreditado, que se realizo en el periodo que indica la resolución.
Tabla3:Distribución de los abortos en el año, los días de gestación y las lactancias
Añor 2011 2012
Abortos
mensuales
3,5% 8,8%
71
1
10
resultadosdel fpa
positivos
sospechosos
negativos
segundo sangrado realizado el día
18/9/12
Titulo: resultados que arrojo el
segundomuestreo según la categoria
Resultados
total
positivos negativos
Vacas 14 446 460
vaquillonas 12 149 161
Total 26 595 621
15. 8
Cantidad
de abortos
18 47
1°trimestre 0 0
2°trimestre 12 7
3°trimestre 2 50
Causa no
definidas
4 10
Promedio
en días de
gestacion
163 228
Promedio
en
lactancias
el abortos
1,1 1,3
Se debería diferenciar entre animales incorporados y los que estaban
Discusión:
El ingreso de esta enfermedad pudo surgir de la compra de animales jóvenes (menores
de 15 meses), y que hayan sido comprados de un establecimiento que no tenga el
certificado de libre o que este en saneamiento.
No vacunar en tiempo y forma a las hembras que tenían entre 3-8 meses de edad, que
eran hijas propias del plantel comercial con que contaba el establecimiento.
Se descarta la opción de que la brucella haya entrado por las pajuelas de semen (por este método
se convierte en venérea),porque que se analizan las pajuelas de toda la partida, antes de
comenzar la época de servicios.
Además otro problema que pudo haber surgido es que el establecimiento vecino al tambo en
cuestión haya tenido abortos por esta enfermedad,y no informo al dueño de este tambo, para
tomar medidas de manejo preventivas. Entonces por los animales silvestre que rondan por todos
lados, uno de ellos pudo haber ingresa al establecimiento con restos de placenta de una vaca
abortada y contagio con los restos de placenta a los animales susceptibles del tambo.
A los animales ingresados sin certificación de libre o en saneamiento no se les extrajo
muestra de sangre para determinar por serología el estado inmunitario de estos
animales.
Conclusión:
Como lo planteo el veterinario acreditado, la situación se logro controlar, bajo el punto
epidemiológico se segregaron animales positivos preñados evitando abortos en el
establecimiento. En caso de abortos se eliminan los restos de placenta, feto y líquidos
(fuente de infección porque se encuentra en altas concentraciones un componente
llamado eritritol que estimula el crecimiento de brúcela abortus). ((D.C Blod y J.A
Henderson), 1973), y con ella controlarla en el termino de 8 meses en el establecimiento
en cuestión.
16. 9
Se realizo la vacunación con la cepa C19 a los animales susceptibles que contraen la
edad de 3-8 meses como lo indica el artículo de SENASA, se realizaron sangrados a la
totalidad de los animales susceptibles a la edad que determina la resolución dictada por
SENASA .La cepa C19 (vacunas atenuada) en
un porcentaje superior a 95% la vacunación evita el
aborto en hembras que se han infectado. (www.corfoga.org)
Aplicando la resolución de SENASA se logro reducir la incidencia 8 puntos entre el
primer sangrado y el segundo, porque se eliminaron del establecimiento rápidamente los
animales positivos a los resultados serológicos.
Se capacito al personal y se intensifico la sanidad de los animales susceptibles.
Existe otra vacuna que es la RB51 (vacuna atenuada), se usa para prevenir la brucelosis
bovina. NO tiene cadena O en su LPS por lo no induce anticuerpos detectables por
técnicas de diagnostico convencionales.
(http://www.corfoga.org/pdf/Difusion/Congreso/BrucelosisBovina_ESamartino.pdf).
Esta vacuna en nuestro país no se encuentra a disposición de su uso.
17. 10
Bibliografía
(D.CBlody J.A Henderson).(1973). (D.CBlod y J.A Henderson,1973). . mexico:NUEVA
EDITORIALINTERAMERICANA.
(2 de enerode 2013). Obtenidode
http://www.corfoga.org/pdf/Difusion/Congreso/BrucelosisBovina_ESamartino.pdf).
corfoga. (s.f.).Recuperadoel 2de enerode 2013, de
http://www.corfoga.org/pdf/Difusion/Congreso/BrucelosisBovina_ESamartino.pdf).
manualdebrucelosis SENASA 202009. (s.f.).Recuperadoel 1de enerode 2013, de
www.senasa.gov.ar
senasa. (s.f.).Recuperadoel 2de enerode 2013, de
(http://www.senasa.gov.ar/contenido.php?to=n&in=1077&io=3002
SENASA. (s.f.).Recuperadoel 2de enerode 2013, de (ResoluciónSenasaNº150/2002),
Ponermyornúmerode citas