1. Taller
Tecnología Del ADN Recombinante
Docentes: Dra. María Carolina Páez Leal – Dr. Enrique Mateus
1. Defina Tecnología de ADN Recombinante, cuales son sus pasos (fases).
TECNOLOGIA EN ADN Recombinante:
Técnica con la que es posible aislar y manipular un fragmento de
ADN de un organismo para introducirlo en otro. Además, son
técnicas empleadas para la producción de proteínas.
FASES:
•Aislar y fragmentar el DNA
•Unir el DNA fragmentado a un vector
•Introducir el DNA recombinante en un organismohuésped
•Obtención de clones
•Selección del clon con el gen de interés
•Análisis del gen clonado
2. Reconozca los principales aportes realizados por los siguientes
investigadores al estudio de la genética actual y que marcaron la base para
la implementación de la Tecnología del ADN recombinante.
a. 1928, Frederick Griffith:
Descubrió que existía un factor de transformación como responsable
de convertir una cepa no patogénica en una patogénica.
b. 1944, Oswald Avery, Colin MacLeod y Maclyn McCarty
Los estudios de OswaldAvery, ColinMacLeod y McCarty aportan la
primera prueba experimental de que el ADN transmite la información
genética.
c. 1953, Francis Crick, James Watson, Rosalind Franklin
Utilizando un patrón de radiografías de ADN generado por Rosalind
Franklin y Maurice Wilkins, James Watson y Francis Crick publicaron
su modelo de ADN de doble hélice. De esta forma se predice con
precisión que el orden de las moléculas repetidas, conocidas como
bases, en el filamento de ADN codifica la dotación genética de todo
organismo vivo.

2. d. 1966, Marshall Nirenberg
Descifra el código genético que utilizan todas las células vivas para
traducir la serie de bases de su ADN en instrucciones para la
producción de proteínas.
e. 1970, Werner Arbert, Hamilton Smith y Daniel Nathans
Hamilton Smith descubre la primera enzima de restricción que corta
el ADN en sitios específicos. Daniel Nathans utiliza dichas enzimas
de restricción para generar el primer mapa físico de un cromosoma.
f. 1983, Kary Mullis
KaryMullis y sus colegas desarrollan una técnica, llamada la reacción
en cadena de polimerasa (PCR), para ampliar y por tanto detectar
rápidamente una secuencia de ADN específica.
3. Que son las Endonucleasas de Restricción?, Que Clases existen? y
Cuál es su utilidad.
Las endonucleasas de restricción son enzimas que reconocen, se
unen e hidrolizan secuencias específicas de ácidos nucleicos en el
ADN de doble-hebra.
3 TIPOS:
tipo I: son complejos multienzimáticos, que no rompen al DNA en
secuencias específicas y que requieren ATP, Mg2+ y S-adenosilmetionina
para su actividad. Las enzimas de restricción correspondientes a este tipo
tienen diferentes actividades enzimáticas, como metilación de DNA,
actividad ATPasa y actividad nucleolítica sobre DNA.
tipo II: son menos complejas requieren únicamente Mg2+ para la actividad
nucleolítica. Estas endonucleasas reconocen secuencias especificas en el
DNA, rompiéndole en ambas cadenas y generando fragmentos equimolares
en lamolécula de DNA sustrato.
tipo III: comprende endonucleasas que requieren ATP y Mg2+ aunque no
tienen actividad de hidrólisis de ATP detectable;El sitio de ruptura de DNA,
por estas enzimas del tipo III, ocurre a aproximadamente 10 a 20
nucleótidos de distancia del sitio de reconocimiento.

3. 4. Qué es un vector de clonación, que clases hay y cuales son sus
principales características.
Los vectores de clonación son pequeñas moléculas de ADN, que tienen capacidad
para autorreplicarse dentro de las células hospedadoras.
Clases:
- Plásmidos. Son moléculas de ADN circular, con un tamaño menor que el del
cromosoma. Se replican con independencia del cromosoma bacteriano ya que
tienen su propio origen de replicación.
-Bacteriófagos. El proceso es similar, se trata de insertar el gen deseado en un
fragmento de ADN vírico (figura d) Posteriormente se ensamblarán las distintas
partes del virus (figura e). Así quedará el virus completo(figura f). En el siguiente
paso se insertará este ADN por el proceso de la TRANSDUCCIÓN.
-Cósmidos . Son plasmidos que contienen el fragmento de ADN deseado que
posee un borde cohesivo procedente del genoma del fago lambda (extremo cos)y
se empaqueta en el interior de un fago. Se construye el cssmido uniendo los tres
elementos ginicos, y el resultado final es poder introducir en la cilula receptora
fragmentos largos de ADN.