71072011 aplicacion tween_80_d_limoneno_biorremediacion

[Ide@s CONCYTEG Cómo citar: Riojas H. H., P. Gortáres, I. Mondaca y J. J. Balderas (2011),
6(71): Mayo, 2011] “Aplicación de Tween 80 y D-Limoneno en la biorremediación de suelo
ISSN: 2007-2716 contaminado con hidrocarburos”, Ide@s CONCYTEG, 6 (71), pp. 571-584.

Aplicación de Tween 80 y
D-Limoneno en la
biorremediación de suelo
contaminado con
hidrocarburos
Héctor H. Riojas González1, Pablo Gortáres Moroyoqui2, Iram
Mondaca Fernández3 y José de Jesús Balderas Cortes4

Resumen
La aplicación de surfactantes y solventes en biorremediación incrementa la biodisponibilidad de
hidrocarburos, lo cual mejora la eficiencia de remoción. El surfactante no iónico Tween 80 ha demostrado
ser efectivo en procesos de biorremediación, siendo además biodegradable. El aceite vegetal D-Limoneno
actúa en la biorremediación como un solvente natural, remueve el hidrocarburo y además puede servir
como sustrato para los microorganismos degradadores. La finalidad de mezclar Tween 80 con el D-
Limoneno es ocasionar una sinergia de modo que se incremente el porcentaje de remoción de
hidrocarburos. La presente revisión tiene por objeto describir las características de los surfactantes y
solventes en la biorremediación, dándole un énfasis a los efectos que influyen en la mezcla Tween 80 con
el D-Limoneno.

Palabras clave: biorremediación, Tween 80, D-Limoneno, hidrocarburos

1
Estudiante de Doctorado en Ciencias en Biotecnología, Instituto Tecnológico de Sonora.
2
Profesor/Investigador. Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias, Instituto Tecnológico
de Sonora. pablo.gortares@itson.edu.mx
3
Profesor/Investigador. Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias, Instituto Tecnológico
de Sonora. imondaca@itson.mx
4
Jefe del Departamento de Biotecnología y Ciencias Alimentarias, Instituto Tecnológico de Sonora;
ibald@itson.mx

ISBN 978-607-8164-02-8 571

Aplicación de Tween 80 y D-Limoneno en la biorremediación de suelo contaminado con
hidrocarburos
Héctor H. Riojas González, Pablo Gortáres Moroyoqui, Iram Mondaca Fernández y José de Jesús
Balderas Cortes

Summary

In bioremediation, the usage of surfactants and solvents increase the bioavailability of hydrocarbons,
which ease the efficiency of remotion. The not ionic surfactant Tween 80 had demonstrated to be quite
effective in bioremediation process and it’s environmental friendly and biodegradable. The vegetal oil D-
Limoneno acts as natural solvent in the bioremediation, although it removes the hydrocarbon and can be
used as a substratum for degrading microorganisms. The main purpose of mixing Tween 80 with D-
Limoneno is to produce a reaction in a way the remotion of hydrocarbons’ percentaje may increase. The
present review focuses in describe the surfactants and solvents characteristics in the bioremediation,
giving a special attention to the effects that influence the mix of Tween 80 with D- Limoneno.

Keywords: Bioremediation, Tween 80, D-Limoneno, hydrocarbons.

Introducción

L
a contaminación ambiental que ocasionen otro problema posterior al

ocasionada por el petróleo y ambiente (Rittmann y McCarty, 2001;

productos petroquímicos (mezclas Madigan et al, 2003). Aunque la

complejas de hidrocarburos) se reconoce biorremediación puede resultar lenta,

como uno de los más graves problemas de cuando se lleva a cabo de manera natural,

la actualidad, sobre todo cuando se asocia a se han propuesto opciones para

los derrames accidentales a gran escala incrementarla. El uso de algunas

(Plohl y Leskovsek, 2002). Además de este alternativas tales como adición de inóculo,

impacto ambiental negativo, la el compostaje (estiércol o lodos activados),

contaminación con hidrocarburos genera la adición de sustancias que mejoren la

impactos de tipo económico, social y de biodisponibilidad de los compuestos a

salud pública en las zonas aledañas al lugar biorremediar, o incluso el uso de plantas

afectado (Nadarajah et al, 2002). Por tal (fitorremediación) son algunas de las

motivo, es necesario desarrollar tecnologías estrategias que se han empleado.

las cuales deben ser efectivas y que no
supongan un alto costo de instalación y En este artículo se hace énfasis en una

operación. Por lo que se propone la mezcla de un surfactante con un solvente,

biorremediación, la cual además de que ha dado buenos resultados de remoción

solucionar el problema se puede considerar de hidrocarburos. Esta mezcla consiste de

como “amigable” al medioambiente, puesto un surfactante no iónico, Tween 80, el cual

que no genera residuos intermedios (como se ha aplicado con éxito en la

el caso de algunos tratamientos químicos) biorremediación y de un solvente, el D-

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Limoneno, el cual es un extracto de Entre los tratamientos de biorremediación
cáscaras de naranja, que ha tenido éxito en se pueden mencionar los siguientes:
productos de limpieza (Nguyen y Sabatini,
a) la bioestimulación que consiste en
2009). Al momento de mezclarse estas dos
el incremento de las poblaciones
sustancias pueden obtener una sinergia, lo
microbianas indígenas existentes en
cual es muy adecuado porque con ello se
el suelo, mediante adición de
logra mejorar la biorremediación en su
nutrientes, regulación de
conjunto.
condiciones redox, cambio de pH, u
otras condiciones diversas sobre las
que se puede influir.
Tipos de técnicas de
b) la bioaugmentación o inoculación
biorremediación
de microorganismos capaces de
La biorremediación es una técnica actuar específicamente en
innovadora que se ha desarrollado en las determinados ambientes
dos últimas décadas, y ha sido aplicada con contaminados.
éxito en el tratamiento de suelos c) el bioventeo que consiste en el
contaminados con hidrocarburos, suministro de aire, con bajas
caracterizándose por ser una técnica de bajo velocidades de flujo, para satisfacer
costo de operación. Sin embargo, la los requerimientos de oxígeno de
aplicación de este tipo de tecnología ha los microorganismos
encontrado cierta resistencia debido al biodegradadores.
tiempo necesario para conseguir las metas d) la biolabranza, que consiste en arar
de saneamiento deseadas (Cerniglia y el suelo contaminado, con el fin de
Shuttleworth, 2002). airear y homogenizar el suelo
contaminado para estimular la
El uso de tecnologías de biorremediación actividad microbiana, así como
para el tratamiento de sitios contaminados mantener condiciones óptimas de
es una opción que presenta ventajas con pH, la temperatura y aireación.
respecto a métodos físicos y químicos, tales e) el compostaje que es un sistema
como: a) sencillas de implementar, b) que utiliza a los microorganismos
efectivas y ambientalmente seguras c) los para degradar contaminantes del
contaminantes se destruyen o transforman suelo, generalmente se realiza en
d) generalmente no se requieren biopilas.
tratamientos adicionales, e) son económicas f) la aplicación de enzimas
(80-150 USD/m3) (Bollag, 1992). inmovilizadas capaces de

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hidrocarburos
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transformar o degradar algunos entre ellos se pueden mencionar los alquil
contaminantes específicos. benceno sulfonatos (detergentes), el lauril
g) la fitorremediación, que es un sulfato (espumante) y las sales de ácidos
proceso que utiliza plantas o grasos (jabones). Otros forman un ion
microalgas. Muchas de éstas positivo en agua y se denominan catiónicos,
tecnologías pueden ser aplicadas como por ejemplo el cetil trimetil amonio,
tanto in situ como ex situ ya que los un agente bactericida, hidrofobante y
suelos contaminados pueden ser antiestático. Los que no se ionizan en agua
trasladados a espacios apropiados se llaman no iónicos. Sus grupos polares
diferentes a donde se produce la están formados por funciones éter, éster,
contaminación (Mishra, et al, 2001; alcohol, cetona, ácido, amina ó amida.
Volké y Velasco, 2003). Entre los más comunes se pueden citar los
alquil fenol etoxilados (detergentes,
dispersantes) y los copolímeros de óxido de

Características de los etileno y óxido de propileno (dispersantes)
surfactantes y solventes (Salager et al, 2007).

Los surfactantes son sustancias químicas La dualidad polar-apolar de las moléculas
cuya molécula presenta una parte polar y de surfactantes, les confiere propiedades
una parte apolar (Raiger y López, 2009). La muy particulares. Para satisfacer su doble
parte apolar es una cadena hidrocarbonada afinidad, las moléculas de surfactantes se
lineal o ramificada, incluyendo a veces un ubican en la interfase de tal forma que su
núcleo aromático, con un número de grupo polar esté cubierto en agua y su
átomos de carbono variando en general grupo apolar esté fuera del agua. Esta
entre 12 y 20. Como consecuencia, la migración de las moléculas de surfactante
interacción entre polar-apolar implica que en la interfase se llama adsorción. La
un surfactante obtenga un grupo apolar adsorción puede deberse al grupo hidrófobo
netamente más grande que su grupo polar señalado anteriormente, o a otros efectos
ionizado (carboxilato, sulfanato, sulfato, como la atracción electroestática. En
etc.) de ahí proviene que al surfactante se soluciones acuosas, los surfactantes forman
esquematice a menudo con una pequeña estructuras esféricas organizadas llamadas
“cabeza” polar y una larga “cola” apolar micelas, que por su naturaleza anfipática,
(Salager, 1987; Rojas y Bullon, 1995). tienen la capacidad de solubilizar
Algunos se denominan aniónicos por que compuestos hidrofóbicos (Bhairi, 2001). El
forman un ion negativo en solución acuosa; empleo de surfactantes se ha propuesto

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como una técnica para incrementar la producen cambios físicos en la superficie
biodisponibilidad de contaminantes de los líquidos, ocurriendo dichos cambios
orgánicos hidrofóbicos (HOCs) como en la interfase entre dos líquidos, o entre un
hidrocarburos totales de petróleo (HTP), líquido y un gas o sólido. Debido a los
explosivos, clorofenoles, pesticidas, entre cambios que ellos producen en las
otros, y así facilitar su biodegradación superficies, los surfactantes se conocen
(Majer et al, 1999). como agentes con actividad superficial. Las
aplicaciones prácticas de los surfactantes
Los surfactantes pueden ser sintetizados son debidas a su tendencia a ser absorbidos
químicamente o bien por algunos en la interfase entre la solución y la fase
microorganismos, en este último caso se les líquida, sólida o gaseosa adyacentes. Todos
conoce como biosurfactantes. Estos los surfactantes poseen la forma común de
compuestos incrementan la solubilidad de un grupo soluble en agua (hidrofílico)
los HOCs a través de una fase micelar adherido a una larga cadena hidrocarbonada
(hidrofílica/hidrofóbica), la cual propicia la soluble en aceite (lipofílico).
desorción de los contaminantes del suelo
hacia la fase líquida, lográndose así un Los solventes se han empleado
incremento en la biodisponibilidad de los principalmente para solubilizar HOCs en
HOCs. La solubilización de los suelos mediante tratamientos de lavado in
contaminantes se lleva a cabo solamente situ. Esta técnica implica la inyección de
cuando se forma la fase micelar, la cual se solventes, los cuales, al igual que los
obtiene cuando la concentración del surfactantes son capaces de incrementar la
surfactante es superior a la concentración solubilidad de los contaminantes. Los
micelar critica (CMC), es decir, arriba de la solventes empleados más comúnmente con
concentración máxima a la cual el este fin, son los alcoholes (metanol, etanol
monómero del surfactante aún se mantiene y propanol), los cuales tienen la propiedad
en solución (Ko et al, 2000). La CMC es de ser miscibles en agua y en la fase
una propiedad muy sensible a la hidrofóbica de los contaminantes. Es decir,
temperatura y polaridad del medio, y cuando se agregan grandes cantidades de
generalmente su valor se reporta a alcohol a un suelo contaminado, crea una
temperaturas entre 20 y 25°C. interfase entre el agua y el contaminante,
incrementando de esta manera la movilidad
Los surfactantes facilitan o aumentan la y la solubilidad de la fase no acuosa de los
emulsividad, dispersión, mojado, HOCS. Además de los alcoholes, otros
distribución, adherencia, penetración y compuestos usados para desorber HOCS
otras propiedades de las superficies de los son el diclorometano, acetona, tolueno,
líquidos. Ellos son compuestos que

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ciclohexano, N,N-dimethilformamida y altas eficiencias degradadoras, si existen
etilacetato (Brinch et al, 2002). factores que limiten su verdadero potencial,
uno de los principales factores es la
Aunque la aplicación de los solventes biodisponibilidad del contaminante. En
comúnmente ha sido para incrementar la otras palabras, si un compuesto no se
solubilidad de los HOCs, existen estudios encuentra disponible para la célula, ésta no
que demuestran que su adición puede lo podrá utilizar como sustrato; esto es lo
incrementar la degradación de algunos que sucede con los hidrocarburos que son
contaminantes en la fase hidrofóbica altamente insolubles en agua o bien, pueden
(Birman y Alexander, 1996). Una de las encontrarse unidos hidrofóbicamente con
claves del éxito de esta técnica es la otros sustratos. Por las razones anteriores,
selección adecuada del solvente (Kueper et actualmente en el campo de investigación
al, 1997); los criterios que deben en biorremediación se han llevado a cabo
considerarse para su selección son: a) esfuerzos en la búsqueda de nuevas técnicas
capacidad para disolver cantidades que permitan aumentar la biodisponibilidad
adecuadas del contaminante, b) baja de los contaminantes. Los surfactantes y
toxicidad en concentraciones traza solventes son compuestos que pueden
(ausencia de carcinogenicidad), c) emplearse con este fin (Majer et al, 1999).
fácilmente biodegradable, d) rutas de
degradación conocidas y e) costo unitario El uso de surfactantes no iónicos, es una de
(Block, 2000). las prácticas más comunes y efectivas
empleadas para la desorción de compuestos
orgánicos hidrofóbicos (HOCs) (Kotterman

Aplicación de los surfactantes et al, 1998; Ghosh, 1997). La eficiencia de
y solventes en la desorción de un surfactante depende de su
biorremediación naturaleza, de la dosis empleada, de la
hidrofobicidad del contaminante, de la
Al hacer referencia a la biorremediación, interacción surfactante-suelo y del tiempo
además de considerar las vías degradativas de contacto surfactante-suelo (Guha y
y la regulación de los microorganismos que Jaffé, 1996).
llevan a cabo la detoxificación de los
contaminantes, también es necesario Sin embargo, la mejor eficiencia de
considerar otros factores que influyen en el desorción no está siempre relacionada con
rendimiento de la biorremediación. Es la mejor eficiencia de degradación, debido
decir, no es suficiente adicionar cepas con principalmente a que el empleo de una alta

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concentración de surfactante puede inhibir HTP de 63.8% sin surfactantes y del 90.9 %
la degradación. Laha y Luthy (1992) y cuando se adicionó surfactantes (Tween
Stelmack et al, (1999) demostraron que el 80). Los autores lo atribuyen a que el
uso de surfactantes reduce la adhesión de surfactante aumenta la superficie de
las bacterias en la superficie hidrofóbica, contacto del agua con el sustrato
dando como resultado una baja actividad de hidrofóbico insoluble y el aumento de la
biodegradación. Para solucionar este tipo de biodisponibilidad tanto del agua como de
problema, algunos investigadores las sustancias insolubles (Brinch et al,
recomiendan la utilización de surfactantes 2002; Van Gestel et al, 2003; Silva et al,
fácilmente biodegradables, como el Brij 30, 2009).
Brij 35 y Tween 80 (Ghosh, 1997).
En el caso de la aplicación de solventes,
Abiola y Olenyk (1997) determinaron que ésta ha sido básicamente empleada para
el uso de surfactantes favorece la remoción incrementar la solubilidad de los HOCS
de HTP en un suelo contaminado con (Catherine y Luthy, 1993). Sin embargo, se
20,000 mg/kg de suelo. Los sistemas ha observado también que el empleo de
experimentales fueron biopilas estáticas solventes mejora la biodegradación de los
alargadas con y sin surfactante. El grupo contaminantes en la fase hidrofóbica
observó que en las biopilas adicionadas de (Birman y Alexander, 1996). El tolueno ha
surfactante, se lograba una mayor sido uno de los solventes más empleados
biodegradación de hidrocarburos. De con este fin, teniendo entre sus principales
acuerdo con Singh-Cameotra y Bollag características que es un excelente solvente
(2003), los surfactantes son eficaces en de compuestos polares y asfaltenos
reducir la interfase del petróleo y también (Fenistein et al, 1998). Sin embargo, este
pueden reducir la viscosidad del aceite. tipo de compuesto resulta extremadamente
tóxico, por lo que un punto crítico para el
En los tratamientos asistidos con uso del tolueno es precisamente la
surfactantes y sin ellos, presentan una tolerancia de los microorganismos. Aunque
diferencia mayor en bajas concentraciones, hay microorganismos degradadores de
lo cual ratifica la necesidad del suministro tolueno, éstos no son inmunes a su efecto
de agentes de superficie esenciales para tóxico y son sensibles a su presencia, sin
lograr una adecuada biodisponibilidad (Tsai embargo, son capaces de recuperarse
et al, 2009). Del mismo modo, Helmy et al. (Huertas et al, 1998).
(2009) reportan una mejora en la
biodegradación después de 105 días de García et al, (2002) demostraron que la
tratamiento (concentración inicial 10,000 adición de tolueno en suelos
mg/kg) con una eficiencia remoción de intemperizados, tiene un efecto positivo en

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la desorción de los HTP y en la (> 200°C). Los derivados etoxilados de los
biodegradación de estos compuestos. De Spans se producen por la reacción del óxido
acuerdo con sus resultados, la adición de de etileno con cualquier grupo hidroxilo
14,000 mg de tolueno/kg de suelo, libre del grupo éster del sorbitan. De forma
incrementó la velocidad degradación de los alternativa, el sorbitol es primero etoxilado
HTP en un suelo contaminado con 292,000 y después esterificado.
mg de HTP/kg de suelo, hasta tres veces
con respecto a la velocidad observada para El Monooleato de sorbitán etoxilado
un suelo sin tolueno. En 30 días de conocido comercialmente como Tween 80
tratamiento se obtuvo 45% de degradación es insoluble en agua, pero soluble en la
de HTP en el suelo tratado con tolueno. mayoría de disolventes orgánicos y no se
ionizan en solución acuosa, por lo que no es
En estudios de biorremediación, de suelo afectado por el agua dura; es decir, no
contaminado con diesel, llevados a cabo en forma sales insolubles con iones calcio,
fermentación de medio sólido (columnas magnesio, férrico, entre otros. También
tipo Raimbault), en la cual se agregaron puede ser usado en soluciones ácidas
nutrientes, oxígeno y una mezcla al 50% fuertes. Tiene baja toxicidad y en general,
(v/v) del surfactante no iónico Tween 80 y baja fitotoxicidad (Hickey et al, 2007). Otra
D-Limoneno, se logró una eficiencia de propiedad de este surfactante no iónico es
remoción de hasta el 78% de una su actividad como emulsificador, formando
concentración inicial de diesel de 5,950 emulsiones estables. Forma menos espuma
mg/kg (Riojas et al, 2010). que los surfactantes aniónicos y es
considerado como agente espumante leve
ha moderado. Además de lo antes señalado,

Características del Tween 80 el Tween 80 es adecuado para la
biorremediación debido a que su CMC (12
Los ésteres grasos del sorbitan g/L) es baja con respecto a otros
(generalmente denominados Spans, como surfactantes. Esta baja CMC, permite la
marca comercial) y sus derivados formación de micelas a bajas
etoxilados (generalmente conocidos como concentraciones de surfactante. De acuerdo
tweens) fueron comercializados con los resultados presentados por Ghosh
inicialmente por Atlas en USA y (1997), este surfactante puede ser adsorbido
comprados por ICI. Los ésteres del sorbitan por el suelo y degradado por los
se producen por interacción del sorbitol con microorganismos hasta en un 99.6%,
un ácido graso a una elevada temperatura

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durante los primeros 10 días de un inflamación típico de 40 ºC y puede ser
tratamiento de biorremediación. empleado como solvente cuando se aplica
en frío (Lif y Holmberg, 2006; Nguyen y
Sabatini, 2009).

Características del D-
Limoneno
Mezcla de Tween 80 con D-
Los aceites típicos como el D-Limoneno, Limoneno para mejorar la
tolueno, benceno, tetraclorometano son biorremediación
considerados y empleados como solventes,
una parte de las moléculas se inserta a los En experimentos realizados, por este equipo
constituyentes de la película interfacial de investigación, con la mezcla de un
mientras que el resto se distribuye entre las surfactante no iónico como el Tween 80 y
fases acuosa y oleosa según su afinidad el D-Limoneno origina un mayor
relativa (Antón et al, 1992). Los terpenos rendimiento en la remoción y desorción de
son una gran clase de metabolitos los hidrocarburos adheridos en la matriz del
secundarios de las plantas de los cuales, el suelo, lo cual evidencia una sinergia que
limoneno está distribuido por lo menos en potencia la biorremediación
300 especies, por lo que se convierte en un
sustrato disponible a bajo costo para ser En muchas aplicaciones industriales se han
usado en diversos procesos (Prieto et al, realizado diversas mezclas de surfactantes
2007). en vez de aplicaciones de surfactantes
individuales. En algunos casos este efecto
En el caso del D-Limoneno extraído de la es involuntario ya que los surfactantes
cáscara de naranja, conocido también como comerciales, ocasionalmente son mezclas
terpeno de naranja, es un líquido incoloro a de materiales no homogéneos o con materia
ligeramente amarillo, con un olor cítrico prima sin reaccionar. En otros casos se
característico y tiene evaporación de mezclan surfactantes puros con el propósito
moderada a lenta. En cuanto al costo, se de mejorar las propiedades del producto
podría adquirir el D-Limoneno de los (Rivas y Gutiérrez, 1999; Bravo et al, 2004;
desperdicios de la industria cítrica y con Bergström y Eriksson, 2000; Gharibi et al,
esto reducir los costos para su obtención. Es 2002).
de fácil biodegradación por ser obtenido de
fuentes naturales. Principalmente, es usado En la biorremediación, uno de los
como componente en formulaciones de parámetros principales que influyen en el
agentes limpiadores, desengrasantes y como alcance de la biodegradación es su
agente dispersante. Tiene un punto de biodisponibilidad (Bouwer et al, 1997). Los

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contaminantes hidrófobos no son ocasionando una ampliación del tamaño en
fácilmente biodisponibles debido a su baja el núcleo y con un avance en la capacidad
solubilidad acuosa o su tendencia en de separación del contaminante por las
adsorberse fuertemente al suelo (Billingsley micelas y b) por la relación del HLB
et al, 2002; Thibault et al, 1996). La (Balance Lipofílico-Hidrofílico) y tensión
biodisponibilidad es el factor más superficial donde el Tween 80 obtiene
importante para que la degradación valores superiores (comparado a con otros
biológica termine siendo lenta, además surfactantes) y se aumenta con la ayuda del
parece disminuir con el tiempo de D-Limoneno.
envejecimiento del suelo (Makkar y
Rockne, 2003). La biodisponibilidad En otro estudio sobre sinergias de
limitada de un contaminante se presenta surfactantes con solventes en la remoción
cuando su tasa de degradación por de hidrocarburos, llevado a cabo por Chu y
microorganismos está afectada por una Kwan, (2002), se encontró que la adición de
barrera físico-química entre el acetona al surfactante mejora su
contaminante y los microorganismos. Al rendimiento de remoción de un 15-25%. La
mezclarse el surfactante con el D- adición de disolventes a una solución de
Limoneno, en la biorremediación, mejora el surfactante permite un mejor rendimiento
rendimiento del surfactante, esto se puede de lavado, esto debido a que ayuda
deberse a que el D-Limoneno puede ayudar eficazmente a la disolución del
a la remoción, biodisponibilidad y actuar contaminante hidrofóbico llevándolo a la
como un sustrato de crecimiento de los fase acuosa de las partículas del suelo, con
microorganismos degradadores de esto los contaminantes son transferidos de
hidrocarburos, también se tienen reportes la fase sólida hacia la fase líquida o bien
que el D-Limoneno ha sido de interés en puede ser capturado por el núcleo micelar y
formulaciones de productos de limpieza en en ambos casos se consideran validos para
superficie dura, remediación el proceso de descontaminación. Además el
medioambiental y aplicaciones de biodiesel propio disolvente puede ser solubilizado en
(Lif y Holmberg, 2006; Nguyen y Sabatini, el núcleo, dando lugar a un disolvente
2009). incorporado en la micela (Chu y Kwan,
2003).
Esto se puede explicar probablemente por
dos razones: a) la posible sinergia que La sinergia de la mezcla (Tween 80 con D-
pueda existir entre la molécula del D- Limoneno) se puede atribuir también a que
Limoneno y la micela del surfactante el surfactante utilizado (Tween 80) es una

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