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MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DESDE EL PUNTO DE VISTA
ODONTOLÓGICO MICROBIOLOGICAL DIAGNOSTIC METHODS FROM A
DENTAL POINT OF VIEW
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Universidad Católica de Cuenca (UCACUE)
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Revista Científica UOD:
Universidad Odontológica Dominicana
Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400
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ARTÍCULO DE REVISIÓN:
MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DESDE EL PUNTO DE
VISTA ODONTOLÓGICO
MICROBIOLOGICAL DIAGNOSTIC METHODS FROM A DENTAL POINT OF VIEW
Paola Pacurucu Pinos1, Katherine Cuenca León2, Paola Orellana Bravo3, Carlos Andrade Tacuri4
1 Egresada de la Carrera de Odontología. Universidad Católica
de Cuenca. Cuenca-Ecuador.
2 Mgs en Gerencia en Salud para el Desarrollo Local. Mgs en
Análisis Biológico y Diagnóstico de Laboratorio. Docente
Investigador de la Unidad Académica de Salud y Bienestar de la
Universidad Católica de Cuenca. Cuenca- Ecuador.
3 Mgs en Biotecnología. Unidad Académica de Salud y Bienestar.
Carrera de Odontología, Laboratorio de Genética y Biología
Molecular del Centro de Investigación Innovación y
Transferencia de Tecnología de la Universidad Católica de
Cuenca. Cuenca-Ecuador
4 MSc. en Biotecnología Molecular. Unidad Académica de Salud
y Bienestar. Carrera de Odontología, Laboratorio de Genética y
Biología Molecular del Centro de Investigación Innovación y
Transferencia de Tecnología de la Universidad Católica de
Cuenca. Cuenca-Ecuador
Correspondencia:
pao_epp@hotmail.com
Recibido: 01/04/2021
Aceptado: 19/04/2021
Publicado: 23/04/2021
RESUMEN
Introducción: La Microbiología en Odontología es una herramienta importante al momento de emitir un diagnóstico, por lo cual la
técnica convencional de cultivo nos permite como odontólogos establecer los agentes patógenos presentes en enfermedades infecciosas
como la caries, en la que Streptococcus mutans presenta una prevalencia del 38%, Lactobacillus ssp. del 17%, periodontitis en la que se
ha evidenciado con mayor prevalencia Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola, y Tannerella forsythia, e incluso bacterias
responsables de fracasos endodóntico como es el caso de Enterococcus faecalis, con una prevalencia del 46.7%. Además, la presencia de
microbiota fúngica con Candida albicans. Objetivo: Recopilar información sobre los métodos de diagnóstico microbiológicos empleados
en patologías bucales dando a conocer los procedimientos adecuados para la obtención, manejo y transporte de la muestra por parte
del odontólogo. Métodos: Esta revisión de literatura, se realizó mediante la búsqueda de artículos científicos en bases de datos como
Pubmed, Science Direct, Google académico, ResearchGate y Scielo; considerando en cada artículo únicamente lo importante y relevante
del tema estudiado. Conclusiones: El método convencional de cultivo, se realiza mediante la recolección de muestras en los lugares
donde existe una mayor expresión de la patología, empleando siempre medidas asépticas e instrumentos estériles para obtener
resultados confiables. El medio VMGA II, es considerado el medio de transporte ideal, dado que mantiene la viabilidad de los
microorganismos para posteriormente ser cultivados en sus medios selectivos e identificados por medio de pruebas bioquímicas.
Palabras claves: Medios de cultivo, Microbiología, diagnóstico, periodontitis, Candida albicans, Streptococcus mutans, caries dental.
ABSTRACT
Introduction: Microbiology in dentistry is an important tool when making a diagnosis, so the conventional culture technique allows us
as dentists to establish the pathogens present in infectious diseases such as caries, in which Streptococcus mutans has a prevalence of
38%, Lactobacillus ssp. of 17%, periodontitis in which Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola, and Tannerella forsythia are
more prevalent, and even bacteria responsible for endodontic failures such as Enterococcus faecalis, with a prevalence of 46.7%. In
addition, the presence of fungal microbiota with Candida albicans. Objective: To compile information on the microbiological diagnostic
methods used in oral pathologies, providing information on the appropriate procedures for obtaining, handling and transporting the
sample by the dentist. Methods: This literature review was carried out by searching scientific articles in databases such as Pubmed,
Science Direct, Google Scholar, ResearchGate and Scielo; considering in each article only what was important and relevant to the topic
studied. Conclusions: The conventional culture method is performed by collecting samples in the places where there is a greater
expression of pathology, always using aseptic measures and sterile instruments to obtain reliable results. The VMGA II medium is
considered the ideal transport medium, since it maintains the viability of the microorganisms to be subsequently cultured in their
selective media and identified by means of biochemical tests.
Keywords: Culture media, Microbiology, diagnosis, periodontitis, Candida albicans, Streptococcus mutans, dental caries
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INTRODUCCIÓN
La Microbiología Clínica es una ciencia de carácter explicativo, que alega a las exigencias del campo médico y odontológico, para
identificar los agentes etiológicos de enfermedades infecciosas para así simplificar un diagnóstico y mejorar el pronóstico del mismo1,2.
La cavidad oral presenta un microbiota diversa; tanto en géneros como en especies, por lo que se cree que existen alrededor de 600
bacterias en la cavidad oral. El desequilibro en este ecosistema puede provocar que microorganismos que anteriormente eran
considerados como habituales se transformen en agentes etiológicos de patologías infecciosas3.
Gran parte de los microorganismos orales son cultivables, por lo cual es imprescindible establecer un perfil microbiológico2 mediante
la técnica convencional de cultivo, que nos permita como odontólogos emitir un diagnóstico no solamente clínico si no también
microbiológico, que nos ayude a localizar los sitios con enfermedad activa y predecir el progreso de la enfermedad 4,5.
En la caries dental, Streptococcus mutans presenta una prevalencia del 38% y Lactobacillus spp. del 17%, representando un alto riesgo
en la población infantil 6; en la periodontitis crónica el complejo rojo está presente en un 90% de los pacientes (Porphyromonas
gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema dentícola) 7, mientras que Enterococcus faecalis causante de un fracaso endodóntico
presenta una prevalencia del 46.7% 4,8. La microbiota fúngica, aunque es muy poco conocida está presente en la cavidad bucal, siendo
Candida albicans la especie más representativa con un hallazgo habitual del 7% al 65% en personas sanas y adultos mayores 5,9.
La base de una buena investigación de enfermedades infecciosas es realizar una correcta técnica convencional de cultivo, la misma que
se logra mediante la fase preanalítica, que consta de una apropiada recolección y manejo de la muestra1. Las muestras deben ser
tomadas de los sitios donde existe una mayor expresión del agente infeccioso, así como también antes de la administración de
antibióticos, puesto que, los resultados pueden ser engañosos1,6. Además, es primordial etiquetar correctamente las muestras previo a
ser enviadas al laboratorio, proporcionando el lugar específico de donde fue tomada y deben ser transportadas sin formol ni otros
conservantes 10,11.
Es importante tener una buena relación con el laboratorio clínico, y estar conscientes que las muestras deben ser tomadas con los
materiales apropiados como hisopos de algodón, puntas de papel estériles y curetas estériles en caso de realizar un raspado subgingival
de las bolsas periodontales1.
Debido a la escasa bibliografía disponible, sobre el muestreo para pruebas microbiológicas en odontología; la presente revisión de
literatura, tuvo por objetivo la recopilación de información sobre los métodos de diagnóstico microbiológicos empleados en cada una
de las patologías bucales más prevalentes, respondiendo a la necesidad que presenta el odontólogo de conocer los procedimientos
adecuados para la obtención, manejo y transporte de la muestra.
MATERIALES Y MÉTODOS
Para lograr los objetivos mencionados se realizó una revisión bibliográfica empleando para la búsqueda de información palabras claves
del descriptor en Ciencias de la salud (DeCS) como: medios de cultivo, Microbiología, diagnóstico, periodontitis, Cándida albicans,
Streptococcus mutans, caries dental. El universo de artículos fue de 62; de los cuales según criterios de inclusión y exclusión quedaron
46, referentes a conceptos de diagnóstico microbiológico, medios de cultivo para bacterias representativas de la periodontitis, caries
dental, fracaso endodóntico y candidiasis oral. Los artículos se obtuvieron mediante bases de datos como: Pubmed, Science Direct,
Google académico, ResearchGate, Scielo; considerando en cada artículo únicamente lo importante y relevante del tema estudiado.
REVISIÓN DE LITERATURA
CARIES DENTAL
La Organización Mundial de la Salud (OMS), describe a la caries dental como una enfermedad de etiología variada, que empieza luego
de la aparición de la dentición primaria; causando el ablandamiento del esmalte dental y progresando a cavidad 4. Siendo de vital
importancia los recuentos microbianos en la saliva y placa bacteriana durante el periodo de recambio dental para predecir o prevenir
esta enfermedad 12.
Streptococcus mutans, es un coco Gram positivo que juega un rol primordial al inicio de la caries dental debido a la formación de biofilm
dental y su habilidad de crear ácidos orgánicos con condiciones de pH bajo 13. Lactobacillus spp., es una bacteria productora de ácido
láctico, Gram positiva y anaerobia aerotolerante, que se aísla principalmente en la saliva, en la cara superior de la lengua y en la caries
propiamente 4.
 Recolección y transporte de la muestra
Previo a la recolección de la muestra de saliva, debemos asegurarnos de que el paciente no ha utilizado enjuague bucal dentro de las 24
h, además, de no haber ingerido alimentos 1h antes de la recolección14. Luego se procede a estimular la saliva, y transferirla de las
superficies dentales; para lograr una estimulación salival se recomienda que los pacientes mastiquen parafina durante 1-2 minutos,
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para luego recolectarla mediante hisopos 14 y colocarlos en tubos para el transporte (Caldo soya tripticasa, extracto de levadura, 10%
de glicerol) y se envía controlando la temperatura al laboratorio clínico. 15
 Medios de cultivo
Medios de cultivo para Streptococcus mutans (S. mutans)
Los estreptococos bucales consiguen aislarse en medios de cultivos de agar mitis (MS), que ha sido modificado para el aislamiento
específico de S. mutans agregando bacitracina (Agar MSB), sulfonamida (Agar MC), polimixina o aun sacarosa (MS40S). 16
Una vez obtenida la muestra y con la ayuda de una pipeta, se procede a cubrir de saliva los medios de cultivo, sin rayar las superficies
sosteniendo la placa de manera inclinada, para evitar que la saliva fluya rápido y favorecer al crecimiento bacteriano 14, posteriormente
se deben incubar a 37°C durante 72 horas en una atmósfera microaerófila y usando un sistema de frasco de velas 13.
Medios de cultivo para Lactobacillus spp.
La saliva recogida se debe diluir 10 veces con solución salina estéril; y una vez obtenida la muestra diluida se procede a esparcirla
uniformemente en el agar de Man Rogosa and Sharpe (agar MRS). Incubando las placas anaeróbicamente a 37°C durante 48h 17,18
 Identificación
Después de 72h y 48h de incubación respectivamente, las colonias de las bacterias se observan a simple vista y bajo un microscopio de
luz, 19 S. mutans aislados en agar MSB se muestran como pequeñas colonias con una superficie granular con gotas de polisacáridos 12,
mientras que las colonias de los Lactobacillus en agar MRS crecen como colonias blancas, forma circular, bordes lisos y regulares con
superficie convexa, y tamaño de 1 y 5 mm 20.
APLICACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA EN LAS ESPECIALIDADES ODONTOLÓGICAS
PERIODONCIA
La periodontitis es una patología inflamatoria polimicrobiana, de los tejidos de sostén del diente; en la que los microorganismos inducen
a una destrucción progresiva de estos tejidos. Los pacientes con periodontitis presentan una respuesta inflamatoria baja debido a la
influencia de factores externos e internos 21,22.
El complejo rojo, es uno de los grupos más importantes implicados en la periodontitis activa y destructiva, que se asocia al sangrado al
sondaje, profundidad de bolsas periodontales 22 y se encuentran en grandes niveles en la placa subgingival 23. Este complejo lo
conforman: Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola y Tannerella forsythia, que son bacterias Gram negativas, anaerobias
estrictas 23.
 Lo que el odontólogo debe conocer con respecto al manejo de la muestra
Los laboratorios microbiológicos en ocasiones no disponen de procedimientos operativos estándar y medidas adecuadas del control de
calidad al momento de tomar la muestra, lo que conlleva a que la fiabilidad de los resultados sea engañosa, perjudicando así el
diagnóstico microbiológico de las enfermedades periodontales, es por esto que el odontólogo tiene el deber de garantizar que los
resultados sean los correctos y que el cultivo microbiano periodontal tenga éxito24.
El odontólogo debe realizar una entrega oportuna de los microorganismos, tomando en cuenta que, al ser bacterias anaeróbicas
estrictas, es necesario contar con un medio de transporte ideal que cumpla con todas las características que requieren estas bacterias,
garantizando de esta manera su viabilidad. Además, es indispensable conocer que estas bacterias luego del muestreo deben ser
trasladadas en un periodo máximo de 24 a 48 horas al laboratorio de pruebas microbiológicas, 24 por lo que en el siguiente apartado se
da a conocer la forma correcta de recolectar y transportar la muestra.
Recolección de la muestra
Es recomendable para la recolección de la muestra realizar primero un estudio clínico y radiográfico, y seleccionar los sitios donde
existan bolsas periodontales ≥ 5 mm con pérdida ósea ≥ 2 mm 25. Después se procede a aislar el área que se va examinar, con la ayuda
de torundas de algodón estériles y secar con aire; para posteriormente eliminar la placa supragingival con curetas estériles 26, evitando
el sangrado con algodón estéril 25.
Posteriormente se debe introducir las puntas de papel estériles N° 25 o 35 en la bolsa con mayor profundidad, durante 15 a 20 seg; para
recolectar una muestra del fluido gingival crevicular 25,26. Para la recopilación de placa subgingival se procede a realizarla con una cureta
estéril en bolsas periodontales mayores ≥ 5 a 8 mm27.
Transporte de la muestra
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Cuando la muestra ha sido ya recolectada, es importante transportarla en medios de transporte microbianos eficaces como: el VMGA III
(Viability Medium Goteborg Anaerobically III) y el BHI (Brain Heart Infusion), los mismos que son los medios más efectivos para
mantener la viabilidad de los microorganismos recolectados 23,28. Se deben transportar rápidamente para llevarle a condiciones
anaeróbicas con una atmósfera de 80% nitrógeno, 10% hidrógeno y 10% dióxido de carbono a 37°C 27.
 Medios de cultivo
Medios de cultivo para Porphyromonas gingivalis
Una vez procesada la muestra se procede a cultivarla en una placa de TSVB (tripticasa soya, vancomicina, bacitracina.) con 10 ml de
suero de caballo 25 o en agar sangre con menadiona y hemina en condiciones de anaerobiosis a 35° C, en un período de 7 a 14 días en
jarra con generador de atmósfera anaerobia26,29.
Medios de cultivo para Treponema dentícola
Uno de los medios más utilizados para aislar esta espiroqueta es el medio GM-1, que es no selectivo y se incuba en anaerobiosis (5%
CO2,10% H2, 85% N2); el mismo puede ser modificado empleado como inhibidor a la rifampicina. Otro de los medios en el que se puede
recuperar a Treponema dentícola es el medio NOS (New Oral Spirochete), puesto que utiliza 4mg/ml de rifampicina como agente
inhibidor30. El medio OBGM corazón (Medio de crecimiento de bacterias orales) con extracto de levadura e infusión cerebro-corazón,
también permite cultivar esta espiroqueta en condiciones anaeróbicas a 37 °C 22,31.
Medio de cultivo para Tannerella forsythia
Tannerella forsythia, se aísla y se cultiva en agar FA-NAM 32. Es una bacteria muy poco cultivable por lo que este medio es el único que
se ha empleado.
 Identificación
Porphyromonas gingivalis, forma colonias pigmentadas de color negro en el medio agar sangre con menadiona y hemina; para la
identificación definitiva se recomienda el empleo de un kit de pruebas bioquímicas, test serológicos ( ELISA) , la prueba de BANA 18, 33 y
el kit API ® 29. La identificación del Treponema dentícola, se puede realizar a través de una prueba enzimática llamada BANA30. Las
pruebas API ZYM y el kit de identificación anaeróbica Rapid ID 32 A, por duplicado permite identificar la presencia de Tannerella
forsythia 27.
ENDODONCIA
La enfermedad endodóntica de la pulpa, resulta de la irritación por un complejo de microorganismos que, a pesar de ser comensales en
condiciones normales, llegan a cambiar las condiciones de la microflora en la pulpa necrótica y aumentan la patogenicidad 34. El
diagnóstico microbiológico del conducto radicular debe ser considerado sólo en casos prolongados y complicados con infecciones en las
que el paciente es inmunocomprometido o presenta un riesgo de propagación sistémica de la infección 35.
Enterococcus faecalis, es uno de los microorganismos que presenta más resistencia en el medio bucal y se encuentra con alta prevalencia
en el fracaso endodóntico e ingresa durante el tratamiento; es un coco gram positivo, anaerobio facultativo, que vive en condiciones
adversas, soporta cambio de temperatura y la deshidratación36.
 Lo que el odontólogo debe conocer con respecto al manejo de la muestra
El odontólogo debe utilizar técnicas asépticas durante el procedimiento de toma de muestra del conducto radicular, aislando
completamente el diente con la ayuda de un dique de goma, además, se debe desinfectar el campo circundante a la pieza utilizando
peróxido de hidrógeno al 30% y luego hipoclorito de sodio al 2,5%, durante 30 segundos para posteriormente realizar una inactivación
de la solución con tiosulfato de sodio al 5% , asegurando así que durante el muestreo no ingresen microrganismos adicionales al
conducto radicular, es por eso que la recolección y el transporte de la muestra que realiza el odontólogo son parámetros claves para un
correcto diagnóstico microbiológico de los conductos radiculares 8 .
Recolección, transporte de la muestra
Los instrumentos empleados durante el acceso cameral y la eliminación del material de relleno deben ser estériles, así como también
las limas empleadas no deben contener ningún tipo de producto químico. Una vez retirado el material de relleno se debe únicamente
enjuagar el canal con solución estéril, para eliminar los restos y humedecerlo antes de la toma de la muestra8. Se introduce una lima K
#15 o #20 en el conducto radicular, con una longitud de menos 1 mm del ápice radiográfico y se agita dentro del canal durante 30-60s
37. Las muestras recogidas se deben colocar en Tubos Eppendorf de 2ml con VMGA III (Viability Medium Goteborg Anaerobically III) o
medio de transporte Stuart, y se transporta al laboratorio clínico 37,38.
 Medios de cultivo
Medios de cultivo para Enterococcus faecalis (E. faecalis)
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Los medios de cultivo que se pueden usar son: agar sangre, agar MacConkey y Uninary Tract Infections Chromogenic Agar (UTIC). Una
vez obtenida la muestra se procede a realizar una siembra en estrías con la ayuda de asas estériles, empezando por el límite superior de
la caja Petri y diseminando por todo el agar en “zig-zag” 38,39. Luego colocamos las cajas en una estufa a 37°C durante 24h 8,36.
 Identificación
La identificación se realiza mediante pruebas bioquímicas con un sistema automatizado de identificación de bacterias Vitek® 2-C15,
según las instrucciones del fabricante 36. Las muestras cultivadas en UTIC se visualizan como colonias de color turquesa E. faecalis 38;
colonias rosadas Escherichia coli; colonias blancas Staphylococcus aureus; colonias azul oscuro Enterobacter aerogenes, Klebsiella
pneumoniae; y colonias café amarillo Proteus miriabilis 39.
APLICACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA EN ENFERMEDADES MICÓTICAS
CANDIDIADIS ORAL
La candidiasis oral, es una enfermedad infecciosa, causada por el incremento de colonizaciones de Candida en los tejidos bucales y está
mediada por la variación de los mecanismos de defensa del huésped, existiendo así una interacción huésped-microorganismo, además,
de la participación de factores predisponentes o favorecedores que contribuyen al desarrollo de esta enfermedad 9.
Es una infección micótica de afección oral más frecuente, siendo Candida albicans la especie más representativa del género Cándida, por
lo que algunos autores la consideran como un sinónimo de la candidiasis oral 9. Candida albicans es la responsable de la mayoría de las
enfermedades causadas por levaduras en el ser humano, es un microorganismo oportunista y a menudo mortal en los pacientes
inmunosuprimidos 40,41.
 Recolección, transporte de la muestra
La recolección salival para el muestreo debe realizarse 2h antes o después de que el paciente ingiera alimentos 42, recolectando
aproximadamente 2ml de saliva 43. La estimulación salival se puede lograr mediante la masticación de goma de mascar con xilitol. Las
muestras salivales recolectadas se deben colocar en viales estériles de plástico a una temperatura de 4°C 42,44. La recolección de la
muestra también se puede llevar a cabo en el medio estéril Citoswab Collection Swab Stuart retirando el hisopo y pasándolo por toda la
mucosa bucal, para luego guardar el hisopo con la muestra recolectada en el medio Stuart para su transporte y conservación 45.
 Medios de cultivo
Medios de cultivo para Candida albicans
Existen varios medios para cultivar esta especie, tal como: es el agar Sabouraud-cloranfenicol, que permiten llevar acabo un cultivo
primario de las muestras, no obstante, el medio cromogénico de CHROMagar ™ Candida es él más específico, ya que permite diferenciar
las especies de Candida spp. 41,43. La siembra se realiza con la ayuda de un asa estéril se empieza a esparcir la muestra por toda la caja
Petri para el crecimiento y desarrollo de este microrganismo cultivándolas a una temperatura de 35 a 37°C durante 48 horas. 45
 Identificación
Es importante verificar la presencia de los hongos sembradas por lo cual existen pruebas como API ® 20 C AUX o Vitek ®2,que permiten
una identificación bioquímica de Candida albicans, de acuerdo a las instrucciones del fabricante 42. Las muestras cultivadas en
CHROMagar ™ Candida, se visualizan de la siguiente manera: colonias azules cremosas de bordes lisos, Candida tropicalis; colonias
cremosas de bordes lisos y verdes, Candida albicans y Candida dubliniensis; y colonias rosadas con aspecto seco y bordes irregulares
Candida krusei 46.
DISCUSIÓN
Ojeda en su artículo denominado “Streptococcus mutans and dental caries” define a la caries dental como un proceso dinámico de
desmineralización y remineralización, producto del metabolismo bacteriano que puede producir pérdida de superficie dentaria.
Además, menciona que las especies de estreptococos orales pueden aislarse en medios selectivos como el Agar Mitis Salivarius (MS) y
Agar Mitis Salivarius con Bacitricina (MSB); coincidiendo con Zeng quien en su artículo de “Identificación de bacterias no Streptococcus
mutans a partir de saliva infantil anterior cultivada en agar mitis-salivarius-bacitracina” determina que el medio MSB, es el medio
selectivo, comúnmente utilizado para aislar y cuantificar S. mutans en varios estudios clínicos y epidemiológicos.
Ademe en su estudio de “Análisis del nivel salival de Lactobacillus spp. y factores asociados como determinantes de la caries dental entre
los niños de la escuela primaria en la ciudad de Harar, en el este de Etiopía” indica que la recolección de muestras de saliva debe
realizarse 2h después de que el paciente haya ingerido alimentos, con un mínimo de 2ml recolectados; cultivado Lactobacilli spp. en
agar Man Rogosa y Sharpe (agar MRS) a una temperatura de 37°C durante 48h.
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Arce en su publicación “Detección de Porphyromonas gingivalis en Pacientes Adultos con Periodontitis Crónica” utilizó la técnica de
microbiología convencional, realizando el cultivo microbiológico de muestras de placa subgingival, en agar sangre hemina-menadiona
no selectivo e incubándolas en condiciones de anaerobiosis a 35°C durante 7 a 10 días.
Sakko en su artículo “Microbiology of root canal infections” refiere que el cultivo microbiológico, puede ayudar en la resolución de
problemas de las infecciones complicadas y que el muestreo del canal radicular, tiene el propósito de obtener una muestra
representativa de especies microbianas existentes en el sistema del canal radicular, para tomar decisiones sobre el tratamiento preciso
tomando por separado y en estricta asepsia después de la desinfección de las superficies circundantes. Suliman en su investigación
“Diversidad clonal y resistencia antimicrobiana de Enterococcus faecalis aislado de infecciones endodónticas “, recolectó 82 muestras
de conductos radiculares, de dientes necróticos, retratados y dientes vitales; utilizando el medio de transporte VMGA II, para
transportar las muestras clínicas tomadas. Adicionalmente, cultivó las muestras en agar sangre a 37°C durante 72 y posteriormente
realizó su identificación bacteriana mediante pruebas bioquímicas y un sistema automático Vitek@ 2-15.
Alfonso en su estudió “Identificación presuntiva de Candida spp. y de otras levaduras de importancia clínica: utilidad de Brilliance
Candida Agar“ incluyó en total 240 aislamientos de levaduras de muestras clínicas de pacientes, en tres hospitales identificados
previamente por métodos convencionales, y estudiados con medios cromogénicos a las 24h, 48h, 72 h y 6 días. Identificando de manera
inmediata a C. albicans como colonias verdes, cremosas y de bordes lisos. Serpa, en su investigación “Ocurrencia de Candida albicans en
pacientes edéntulos de las parroquias El Valle, San Joaquín y Ricaurte del Cantón Cuenca. 2019” utilizó muestras hisopadas y cultivó en
CANDIDA CHROMOGENIC AGAR durante 48 h, observando colonias de color verde dando positivó a Candida albicans concordando así
con Alfonso.
CONCLUSIONES
Los métodos microbiológicos en odontología, se realizan mediante la técnica convencional de cultivo la misma que representa un
complemento significativo al momento de emitir un diagnóstico de las enfermedades bucales más prevalentes, considerando la
importancia de conocer sus agentes etiológicos, medios de cultivos empleados en cada tipo de bacterias en el caso de requerir el
aislamiento de una bacteria específica y de esta manera establecer un perfil microbiológico en los pacientes, con el propósito de llevar
acabo un tratamiento adecuado de acuerdo a las bacterias que se encuentran en estas patologías.
Respecto a la toma, manejo y transporte de la muestra como odontólogos, es importante tener conocimientos teóricos previos sobre
los tipos de patógenos presentes en estas patologías, recordando que gran parte de las bacterias orales pueden ser anaerobias
facultativas o estrictas , este dato nos ayuda a elegir el medio de transporte ideal que cumpla con los requerimientos necesarios,
ayudando a mantener la viabilidad de los microorganismos recolectados logrando con éxito un cultivo efectivo que nos brinde
resultados fiables.
RECOMENDACIONES
 Recolectar las muestras en sitios donde existe mayor expresión de la patología.
 Utilizar siempre instrumentos estériles al momento de realizar la toma de la muestra.
 No manejar sustancias con propiedades antimicrobianas y antimicóticas en el lugar donde se toma la muestra.
 En caso de utilizar hipoclorito de sodio para desinfectar el campo circundante, es necesario inactivarlo con tiosulfato de
sodio antes de proceder a realizar el muestreo del lugar.
 Etiquetar correctamente la muestra tomada antes de ser destinada al laboratorio microbiológico.
 No prescribir antibióticos antes de realizar una toma de muestra.
REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS
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Revista Científica UOD:
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  • 1. See discussions, stats, and author profiles for this publication at: https://www.researchgate.net/publication/359545897 MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DESDE EL PUNTO DE VISTA ODONTOLÓGICO MICROBIOLOGICAL DIAGNOSTIC METHODS FROM A DENTAL POINT OF VIEW Article · April 2021 CITATIONS 0 READS 188 4 authors, including: Some of the authors of this publication are also working on these related projects: Study of the antibiotic sensitivity of Staphylococcus aureus in different types of clinical samples from the city of Cuenca (Ecuador). View project Detección de genes de resistencia y virulencia de Staphylococcus aureus aislados en pantallas de celulares del personal de salud de un Hospital de Cuenca-Ecuador, 2021 View project Katherine De los Angeles Cuenca León Universidad Católica de Cuenca (UCACUE) 25 PUBLICATIONS   8 CITATIONS    SEE PROFILE Paola- Patricia Orellana-Bravo Universidad Católica de Cuenca 15 PUBLICATIONS   8 CITATIONS    SEE PROFILE Carlos Fernando Andrade-Tacuri Universidad Católica de Cuenca (UCACUE) 16 PUBLICATIONS   8 CITATIONS    SEE PROFILE All content following this page was uploaded by Paola- Patricia Orellana-Bravo on 29 March 2022. The user has requested enhancement of the downloaded file.
  • 2. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY ARTÍCULO DE REVISIÓN: MÉTODOS DE DIAGNÓSTICO MICROBIOLÓGICO DESDE EL PUNTO DE VISTA ODONTOLÓGICO MICROBIOLOGICAL DIAGNOSTIC METHODS FROM A DENTAL POINT OF VIEW Paola Pacurucu Pinos1, Katherine Cuenca León2, Paola Orellana Bravo3, Carlos Andrade Tacuri4 1 Egresada de la Carrera de Odontología. Universidad Católica de Cuenca. Cuenca-Ecuador. 2 Mgs en Gerencia en Salud para el Desarrollo Local. Mgs en Análisis Biológico y Diagnóstico de Laboratorio. Docente Investigador de la Unidad Académica de Salud y Bienestar de la Universidad Católica de Cuenca. Cuenca- Ecuador. 3 Mgs en Biotecnología. Unidad Académica de Salud y Bienestar. Carrera de Odontología, Laboratorio de Genética y Biología Molecular del Centro de Investigación Innovación y Transferencia de Tecnología de la Universidad Católica de Cuenca. Cuenca-Ecuador 4 MSc. en Biotecnología Molecular. Unidad Académica de Salud y Bienestar. Carrera de Odontología, Laboratorio de Genética y Biología Molecular del Centro de Investigación Innovación y Transferencia de Tecnología de la Universidad Católica de Cuenca. Cuenca-Ecuador Correspondencia: pao_epp@hotmail.com Recibido: 01/04/2021 Aceptado: 19/04/2021 Publicado: 23/04/2021 RESUMEN Introducción: La Microbiología en Odontología es una herramienta importante al momento de emitir un diagnóstico, por lo cual la técnica convencional de cultivo nos permite como odontólogos establecer los agentes patógenos presentes en enfermedades infecciosas como la caries, en la que Streptococcus mutans presenta una prevalencia del 38%, Lactobacillus ssp. del 17%, periodontitis en la que se ha evidenciado con mayor prevalencia Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola, y Tannerella forsythia, e incluso bacterias responsables de fracasos endodóntico como es el caso de Enterococcus faecalis, con una prevalencia del 46.7%. Además, la presencia de microbiota fúngica con Candida albicans. Objetivo: Recopilar información sobre los métodos de diagnóstico microbiológicos empleados en patologías bucales dando a conocer los procedimientos adecuados para la obtención, manejo y transporte de la muestra por parte del odontólogo. Métodos: Esta revisión de literatura, se realizó mediante la búsqueda de artículos científicos en bases de datos como Pubmed, Science Direct, Google académico, ResearchGate y Scielo; considerando en cada artículo únicamente lo importante y relevante del tema estudiado. Conclusiones: El método convencional de cultivo, se realiza mediante la recolección de muestras en los lugares donde existe una mayor expresión de la patología, empleando siempre medidas asépticas e instrumentos estériles para obtener resultados confiables. El medio VMGA II, es considerado el medio de transporte ideal, dado que mantiene la viabilidad de los microorganismos para posteriormente ser cultivados en sus medios selectivos e identificados por medio de pruebas bioquímicas. Palabras claves: Medios de cultivo, Microbiología, diagnóstico, periodontitis, Candida albicans, Streptococcus mutans, caries dental. ABSTRACT Introduction: Microbiology in dentistry is an important tool when making a diagnosis, so the conventional culture technique allows us as dentists to establish the pathogens present in infectious diseases such as caries, in which Streptococcus mutans has a prevalence of 38%, Lactobacillus ssp. of 17%, periodontitis in which Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola, and Tannerella forsythia are more prevalent, and even bacteria responsible for endodontic failures such as Enterococcus faecalis, with a prevalence of 46.7%. In addition, the presence of fungal microbiota with Candida albicans. Objective: To compile information on the microbiological diagnostic methods used in oral pathologies, providing information on the appropriate procedures for obtaining, handling and transporting the sample by the dentist. Methods: This literature review was carried out by searching scientific articles in databases such as Pubmed, Science Direct, Google Scholar, ResearchGate and Scielo; considering in each article only what was important and relevant to the topic studied. Conclusions: The conventional culture method is performed by collecting samples in the places where there is a greater expression of pathology, always using aseptic measures and sterile instruments to obtain reliable results. The VMGA II medium is considered the ideal transport medium, since it maintains the viability of the microorganisms to be subsequently cultured in their selective media and identified by means of biochemical tests. Keywords: Culture media, Microbiology, diagnosis, periodontitis, Candida albicans, Streptococcus mutans, dental caries
  • 3. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY INTRODUCCIÓN La Microbiología Clínica es una ciencia de carácter explicativo, que alega a las exigencias del campo médico y odontológico, para identificar los agentes etiológicos de enfermedades infecciosas para así simplificar un diagnóstico y mejorar el pronóstico del mismo1,2. La cavidad oral presenta un microbiota diversa; tanto en géneros como en especies, por lo que se cree que existen alrededor de 600 bacterias en la cavidad oral. El desequilibro en este ecosistema puede provocar que microorganismos que anteriormente eran considerados como habituales se transformen en agentes etiológicos de patologías infecciosas3. Gran parte de los microorganismos orales son cultivables, por lo cual es imprescindible establecer un perfil microbiológico2 mediante la técnica convencional de cultivo, que nos permita como odontólogos emitir un diagnóstico no solamente clínico si no también microbiológico, que nos ayude a localizar los sitios con enfermedad activa y predecir el progreso de la enfermedad 4,5. En la caries dental, Streptococcus mutans presenta una prevalencia del 38% y Lactobacillus spp. del 17%, representando un alto riesgo en la población infantil 6; en la periodontitis crónica el complejo rojo está presente en un 90% de los pacientes (Porphyromonas gingivalis, Tannerella forsythia, Treponema dentícola) 7, mientras que Enterococcus faecalis causante de un fracaso endodóntico presenta una prevalencia del 46.7% 4,8. La microbiota fúngica, aunque es muy poco conocida está presente en la cavidad bucal, siendo Candida albicans la especie más representativa con un hallazgo habitual del 7% al 65% en personas sanas y adultos mayores 5,9. La base de una buena investigación de enfermedades infecciosas es realizar una correcta técnica convencional de cultivo, la misma que se logra mediante la fase preanalítica, que consta de una apropiada recolección y manejo de la muestra1. Las muestras deben ser tomadas de los sitios donde existe una mayor expresión del agente infeccioso, así como también antes de la administración de antibióticos, puesto que, los resultados pueden ser engañosos1,6. Además, es primordial etiquetar correctamente las muestras previo a ser enviadas al laboratorio, proporcionando el lugar específico de donde fue tomada y deben ser transportadas sin formol ni otros conservantes 10,11. Es importante tener una buena relación con el laboratorio clínico, y estar conscientes que las muestras deben ser tomadas con los materiales apropiados como hisopos de algodón, puntas de papel estériles y curetas estériles en caso de realizar un raspado subgingival de las bolsas periodontales1. Debido a la escasa bibliografía disponible, sobre el muestreo para pruebas microbiológicas en odontología; la presente revisión de literatura, tuvo por objetivo la recopilación de información sobre los métodos de diagnóstico microbiológicos empleados en cada una de las patologías bucales más prevalentes, respondiendo a la necesidad que presenta el odontólogo de conocer los procedimientos adecuados para la obtención, manejo y transporte de la muestra. MATERIALES Y MÉTODOS Para lograr los objetivos mencionados se realizó una revisión bibliográfica empleando para la búsqueda de información palabras claves del descriptor en Ciencias de la salud (DeCS) como: medios de cultivo, Microbiología, diagnóstico, periodontitis, Cándida albicans, Streptococcus mutans, caries dental. El universo de artículos fue de 62; de los cuales según criterios de inclusión y exclusión quedaron 46, referentes a conceptos de diagnóstico microbiológico, medios de cultivo para bacterias representativas de la periodontitis, caries dental, fracaso endodóntico y candidiasis oral. Los artículos se obtuvieron mediante bases de datos como: Pubmed, Science Direct, Google académico, ResearchGate, Scielo; considerando en cada artículo únicamente lo importante y relevante del tema estudiado. REVISIÓN DE LITERATURA CARIES DENTAL La Organización Mundial de la Salud (OMS), describe a la caries dental como una enfermedad de etiología variada, que empieza luego de la aparición de la dentición primaria; causando el ablandamiento del esmalte dental y progresando a cavidad 4. Siendo de vital importancia los recuentos microbianos en la saliva y placa bacteriana durante el periodo de recambio dental para predecir o prevenir esta enfermedad 12. Streptococcus mutans, es un coco Gram positivo que juega un rol primordial al inicio de la caries dental debido a la formación de biofilm dental y su habilidad de crear ácidos orgánicos con condiciones de pH bajo 13. Lactobacillus spp., es una bacteria productora de ácido láctico, Gram positiva y anaerobia aerotolerante, que se aísla principalmente en la saliva, en la cara superior de la lengua y en la caries propiamente 4.  Recolección y transporte de la muestra Previo a la recolección de la muestra de saliva, debemos asegurarnos de que el paciente no ha utilizado enjuague bucal dentro de las 24 h, además, de no haber ingerido alimentos 1h antes de la recolección14. Luego se procede a estimular la saliva, y transferirla de las superficies dentales; para lograr una estimulación salival se recomienda que los pacientes mastiquen parafina durante 1-2 minutos,
  • 4. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY para luego recolectarla mediante hisopos 14 y colocarlos en tubos para el transporte (Caldo soya tripticasa, extracto de levadura, 10% de glicerol) y se envía controlando la temperatura al laboratorio clínico. 15  Medios de cultivo Medios de cultivo para Streptococcus mutans (S. mutans) Los estreptococos bucales consiguen aislarse en medios de cultivos de agar mitis (MS), que ha sido modificado para el aislamiento específico de S. mutans agregando bacitracina (Agar MSB), sulfonamida (Agar MC), polimixina o aun sacarosa (MS40S). 16 Una vez obtenida la muestra y con la ayuda de una pipeta, se procede a cubrir de saliva los medios de cultivo, sin rayar las superficies sosteniendo la placa de manera inclinada, para evitar que la saliva fluya rápido y favorecer al crecimiento bacteriano 14, posteriormente se deben incubar a 37°C durante 72 horas en una atmósfera microaerófila y usando un sistema de frasco de velas 13. Medios de cultivo para Lactobacillus spp. La saliva recogida se debe diluir 10 veces con solución salina estéril; y una vez obtenida la muestra diluida se procede a esparcirla uniformemente en el agar de Man Rogosa and Sharpe (agar MRS). Incubando las placas anaeróbicamente a 37°C durante 48h 17,18  Identificación Después de 72h y 48h de incubación respectivamente, las colonias de las bacterias se observan a simple vista y bajo un microscopio de luz, 19 S. mutans aislados en agar MSB se muestran como pequeñas colonias con una superficie granular con gotas de polisacáridos 12, mientras que las colonias de los Lactobacillus en agar MRS crecen como colonias blancas, forma circular, bordes lisos y regulares con superficie convexa, y tamaño de 1 y 5 mm 20. APLICACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA EN LAS ESPECIALIDADES ODONTOLÓGICAS PERIODONCIA La periodontitis es una patología inflamatoria polimicrobiana, de los tejidos de sostén del diente; en la que los microorganismos inducen a una destrucción progresiva de estos tejidos. Los pacientes con periodontitis presentan una respuesta inflamatoria baja debido a la influencia de factores externos e internos 21,22. El complejo rojo, es uno de los grupos más importantes implicados en la periodontitis activa y destructiva, que se asocia al sangrado al sondaje, profundidad de bolsas periodontales 22 y se encuentran en grandes niveles en la placa subgingival 23. Este complejo lo conforman: Porphyromonas gingivalis, Treponema dentícola y Tannerella forsythia, que son bacterias Gram negativas, anaerobias estrictas 23.  Lo que el odontólogo debe conocer con respecto al manejo de la muestra Los laboratorios microbiológicos en ocasiones no disponen de procedimientos operativos estándar y medidas adecuadas del control de calidad al momento de tomar la muestra, lo que conlleva a que la fiabilidad de los resultados sea engañosa, perjudicando así el diagnóstico microbiológico de las enfermedades periodontales, es por esto que el odontólogo tiene el deber de garantizar que los resultados sean los correctos y que el cultivo microbiano periodontal tenga éxito24. El odontólogo debe realizar una entrega oportuna de los microorganismos, tomando en cuenta que, al ser bacterias anaeróbicas estrictas, es necesario contar con un medio de transporte ideal que cumpla con todas las características que requieren estas bacterias, garantizando de esta manera su viabilidad. Además, es indispensable conocer que estas bacterias luego del muestreo deben ser trasladadas en un periodo máximo de 24 a 48 horas al laboratorio de pruebas microbiológicas, 24 por lo que en el siguiente apartado se da a conocer la forma correcta de recolectar y transportar la muestra. Recolección de la muestra Es recomendable para la recolección de la muestra realizar primero un estudio clínico y radiográfico, y seleccionar los sitios donde existan bolsas periodontales ≥ 5 mm con pérdida ósea ≥ 2 mm 25. Después se procede a aislar el área que se va examinar, con la ayuda de torundas de algodón estériles y secar con aire; para posteriormente eliminar la placa supragingival con curetas estériles 26, evitando el sangrado con algodón estéril 25. Posteriormente se debe introducir las puntas de papel estériles N° 25 o 35 en la bolsa con mayor profundidad, durante 15 a 20 seg; para recolectar una muestra del fluido gingival crevicular 25,26. Para la recopilación de placa subgingival se procede a realizarla con una cureta estéril en bolsas periodontales mayores ≥ 5 a 8 mm27. Transporte de la muestra
  • 5. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY Cuando la muestra ha sido ya recolectada, es importante transportarla en medios de transporte microbianos eficaces como: el VMGA III (Viability Medium Goteborg Anaerobically III) y el BHI (Brain Heart Infusion), los mismos que son los medios más efectivos para mantener la viabilidad de los microorganismos recolectados 23,28. Se deben transportar rápidamente para llevarle a condiciones anaeróbicas con una atmósfera de 80% nitrógeno, 10% hidrógeno y 10% dióxido de carbono a 37°C 27.  Medios de cultivo Medios de cultivo para Porphyromonas gingivalis Una vez procesada la muestra se procede a cultivarla en una placa de TSVB (tripticasa soya, vancomicina, bacitracina.) con 10 ml de suero de caballo 25 o en agar sangre con menadiona y hemina en condiciones de anaerobiosis a 35° C, en un período de 7 a 14 días en jarra con generador de atmósfera anaerobia26,29. Medios de cultivo para Treponema dentícola Uno de los medios más utilizados para aislar esta espiroqueta es el medio GM-1, que es no selectivo y se incuba en anaerobiosis (5% CO2,10% H2, 85% N2); el mismo puede ser modificado empleado como inhibidor a la rifampicina. Otro de los medios en el que se puede recuperar a Treponema dentícola es el medio NOS (New Oral Spirochete), puesto que utiliza 4mg/ml de rifampicina como agente inhibidor30. El medio OBGM corazón (Medio de crecimiento de bacterias orales) con extracto de levadura e infusión cerebro-corazón, también permite cultivar esta espiroqueta en condiciones anaeróbicas a 37 °C 22,31. Medio de cultivo para Tannerella forsythia Tannerella forsythia, se aísla y se cultiva en agar FA-NAM 32. Es una bacteria muy poco cultivable por lo que este medio es el único que se ha empleado.  Identificación Porphyromonas gingivalis, forma colonias pigmentadas de color negro en el medio agar sangre con menadiona y hemina; para la identificación definitiva se recomienda el empleo de un kit de pruebas bioquímicas, test serológicos ( ELISA) , la prueba de BANA 18, 33 y el kit API ® 29. La identificación del Treponema dentícola, se puede realizar a través de una prueba enzimática llamada BANA30. Las pruebas API ZYM y el kit de identificación anaeróbica Rapid ID 32 A, por duplicado permite identificar la presencia de Tannerella forsythia 27. ENDODONCIA La enfermedad endodóntica de la pulpa, resulta de la irritación por un complejo de microorganismos que, a pesar de ser comensales en condiciones normales, llegan a cambiar las condiciones de la microflora en la pulpa necrótica y aumentan la patogenicidad 34. El diagnóstico microbiológico del conducto radicular debe ser considerado sólo en casos prolongados y complicados con infecciones en las que el paciente es inmunocomprometido o presenta un riesgo de propagación sistémica de la infección 35. Enterococcus faecalis, es uno de los microorganismos que presenta más resistencia en el medio bucal y se encuentra con alta prevalencia en el fracaso endodóntico e ingresa durante el tratamiento; es un coco gram positivo, anaerobio facultativo, que vive en condiciones adversas, soporta cambio de temperatura y la deshidratación36.  Lo que el odontólogo debe conocer con respecto al manejo de la muestra El odontólogo debe utilizar técnicas asépticas durante el procedimiento de toma de muestra del conducto radicular, aislando completamente el diente con la ayuda de un dique de goma, además, se debe desinfectar el campo circundante a la pieza utilizando peróxido de hidrógeno al 30% y luego hipoclorito de sodio al 2,5%, durante 30 segundos para posteriormente realizar una inactivación de la solución con tiosulfato de sodio al 5% , asegurando así que durante el muestreo no ingresen microrganismos adicionales al conducto radicular, es por eso que la recolección y el transporte de la muestra que realiza el odontólogo son parámetros claves para un correcto diagnóstico microbiológico de los conductos radiculares 8 . Recolección, transporte de la muestra Los instrumentos empleados durante el acceso cameral y la eliminación del material de relleno deben ser estériles, así como también las limas empleadas no deben contener ningún tipo de producto químico. Una vez retirado el material de relleno se debe únicamente enjuagar el canal con solución estéril, para eliminar los restos y humedecerlo antes de la toma de la muestra8. Se introduce una lima K #15 o #20 en el conducto radicular, con una longitud de menos 1 mm del ápice radiográfico y se agita dentro del canal durante 30-60s 37. Las muestras recogidas se deben colocar en Tubos Eppendorf de 2ml con VMGA III (Viability Medium Goteborg Anaerobically III) o medio de transporte Stuart, y se transporta al laboratorio clínico 37,38.  Medios de cultivo Medios de cultivo para Enterococcus faecalis (E. faecalis)
  • 6. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY Los medios de cultivo que se pueden usar son: agar sangre, agar MacConkey y Uninary Tract Infections Chromogenic Agar (UTIC). Una vez obtenida la muestra se procede a realizar una siembra en estrías con la ayuda de asas estériles, empezando por el límite superior de la caja Petri y diseminando por todo el agar en “zig-zag” 38,39. Luego colocamos las cajas en una estufa a 37°C durante 24h 8,36.  Identificación La identificación se realiza mediante pruebas bioquímicas con un sistema automatizado de identificación de bacterias Vitek® 2-C15, según las instrucciones del fabricante 36. Las muestras cultivadas en UTIC se visualizan como colonias de color turquesa E. faecalis 38; colonias rosadas Escherichia coli; colonias blancas Staphylococcus aureus; colonias azul oscuro Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae; y colonias café amarillo Proteus miriabilis 39. APLICACIÓN DE LA MICROBIOLOGÍA EN ENFERMEDADES MICÓTICAS CANDIDIADIS ORAL La candidiasis oral, es una enfermedad infecciosa, causada por el incremento de colonizaciones de Candida en los tejidos bucales y está mediada por la variación de los mecanismos de defensa del huésped, existiendo así una interacción huésped-microorganismo, además, de la participación de factores predisponentes o favorecedores que contribuyen al desarrollo de esta enfermedad 9. Es una infección micótica de afección oral más frecuente, siendo Candida albicans la especie más representativa del género Cándida, por lo que algunos autores la consideran como un sinónimo de la candidiasis oral 9. Candida albicans es la responsable de la mayoría de las enfermedades causadas por levaduras en el ser humano, es un microorganismo oportunista y a menudo mortal en los pacientes inmunosuprimidos 40,41.  Recolección, transporte de la muestra La recolección salival para el muestreo debe realizarse 2h antes o después de que el paciente ingiera alimentos 42, recolectando aproximadamente 2ml de saliva 43. La estimulación salival se puede lograr mediante la masticación de goma de mascar con xilitol. Las muestras salivales recolectadas se deben colocar en viales estériles de plástico a una temperatura de 4°C 42,44. La recolección de la muestra también se puede llevar a cabo en el medio estéril Citoswab Collection Swab Stuart retirando el hisopo y pasándolo por toda la mucosa bucal, para luego guardar el hisopo con la muestra recolectada en el medio Stuart para su transporte y conservación 45.  Medios de cultivo Medios de cultivo para Candida albicans Existen varios medios para cultivar esta especie, tal como: es el agar Sabouraud-cloranfenicol, que permiten llevar acabo un cultivo primario de las muestras, no obstante, el medio cromogénico de CHROMagar ™ Candida es él más específico, ya que permite diferenciar las especies de Candida spp. 41,43. La siembra se realiza con la ayuda de un asa estéril se empieza a esparcir la muestra por toda la caja Petri para el crecimiento y desarrollo de este microrganismo cultivándolas a una temperatura de 35 a 37°C durante 48 horas. 45  Identificación Es importante verificar la presencia de los hongos sembradas por lo cual existen pruebas como API ® 20 C AUX o Vitek ®2,que permiten una identificación bioquímica de Candida albicans, de acuerdo a las instrucciones del fabricante 42. Las muestras cultivadas en CHROMagar ™ Candida, se visualizan de la siguiente manera: colonias azules cremosas de bordes lisos, Candida tropicalis; colonias cremosas de bordes lisos y verdes, Candida albicans y Candida dubliniensis; y colonias rosadas con aspecto seco y bordes irregulares Candida krusei 46. DISCUSIÓN Ojeda en su artículo denominado “Streptococcus mutans and dental caries” define a la caries dental como un proceso dinámico de desmineralización y remineralización, producto del metabolismo bacteriano que puede producir pérdida de superficie dentaria. Además, menciona que las especies de estreptococos orales pueden aislarse en medios selectivos como el Agar Mitis Salivarius (MS) y Agar Mitis Salivarius con Bacitricina (MSB); coincidiendo con Zeng quien en su artículo de “Identificación de bacterias no Streptococcus mutans a partir de saliva infantil anterior cultivada en agar mitis-salivarius-bacitracina” determina que el medio MSB, es el medio selectivo, comúnmente utilizado para aislar y cuantificar S. mutans en varios estudios clínicos y epidemiológicos. Ademe en su estudio de “Análisis del nivel salival de Lactobacillus spp. y factores asociados como determinantes de la caries dental entre los niños de la escuela primaria en la ciudad de Harar, en el este de Etiopía” indica que la recolección de muestras de saliva debe realizarse 2h después de que el paciente haya ingerido alimentos, con un mínimo de 2ml recolectados; cultivado Lactobacilli spp. en agar Man Rogosa y Sharpe (agar MRS) a una temperatura de 37°C durante 48h.
  • 7. Revista Científica UOD: Universidad Odontológica Dominicana Rev. Cient. Univ. Odontol. Dominic. 2021. Ene-Jun. Vol 9 N° 1. ISSN: 2409-5400 Departamento de Investigación y Posgrado. Reconocimiento CC BY Arce en su publicación “Detección de Porphyromonas gingivalis en Pacientes Adultos con Periodontitis Crónica” utilizó la técnica de microbiología convencional, realizando el cultivo microbiológico de muestras de placa subgingival, en agar sangre hemina-menadiona no selectivo e incubándolas en condiciones de anaerobiosis a 35°C durante 7 a 10 días. Sakko en su artículo “Microbiology of root canal infections” refiere que el cultivo microbiológico, puede ayudar en la resolución de problemas de las infecciones complicadas y que el muestreo del canal radicular, tiene el propósito de obtener una muestra representativa de especies microbianas existentes en el sistema del canal radicular, para tomar decisiones sobre el tratamiento preciso tomando por separado y en estricta asepsia después de la desinfección de las superficies circundantes. Suliman en su investigación “Diversidad clonal y resistencia antimicrobiana de Enterococcus faecalis aislado de infecciones endodónticas “, recolectó 82 muestras de conductos radiculares, de dientes necróticos, retratados y dientes vitales; utilizando el medio de transporte VMGA II, para transportar las muestras clínicas tomadas. Adicionalmente, cultivó las muestras en agar sangre a 37°C durante 72 y posteriormente realizó su identificación bacteriana mediante pruebas bioquímicas y un sistema automático Vitek@ 2-15. Alfonso en su estudió “Identificación presuntiva de Candida spp. y de otras levaduras de importancia clínica: utilidad de Brilliance Candida Agar“ incluyó en total 240 aislamientos de levaduras de muestras clínicas de pacientes, en tres hospitales identificados previamente por métodos convencionales, y estudiados con medios cromogénicos a las 24h, 48h, 72 h y 6 días. Identificando de manera inmediata a C. albicans como colonias verdes, cremosas y de bordes lisos. Serpa, en su investigación “Ocurrencia de Candida albicans en pacientes edéntulos de las parroquias El Valle, San Joaquín y Ricaurte del Cantón Cuenca. 2019” utilizó muestras hisopadas y cultivó en CANDIDA CHROMOGENIC AGAR durante 48 h, observando colonias de color verde dando positivó a Candida albicans concordando así con Alfonso. CONCLUSIONES Los métodos microbiológicos en odontología, se realizan mediante la técnica convencional de cultivo la misma que representa un complemento significativo al momento de emitir un diagnóstico de las enfermedades bucales más prevalentes, considerando la importancia de conocer sus agentes etiológicos, medios de cultivos empleados en cada tipo de bacterias en el caso de requerir el aislamiento de una bacteria específica y de esta manera establecer un perfil microbiológico en los pacientes, con el propósito de llevar acabo un tratamiento adecuado de acuerdo a las bacterias que se encuentran en estas patologías. Respecto a la toma, manejo y transporte de la muestra como odontólogos, es importante tener conocimientos teóricos previos sobre los tipos de patógenos presentes en estas patologías, recordando que gran parte de las bacterias orales pueden ser anaerobias facultativas o estrictas , este dato nos ayuda a elegir el medio de transporte ideal que cumpla con los requerimientos necesarios, ayudando a mantener la viabilidad de los microorganismos recolectados logrando con éxito un cultivo efectivo que nos brinde resultados fiables. RECOMENDACIONES  Recolectar las muestras en sitios donde existe mayor expresión de la patología.  Utilizar siempre instrumentos estériles al momento de realizar la toma de la muestra.  No manejar sustancias con propiedades antimicrobianas y antimicóticas en el lugar donde se toma la muestra.  En caso de utilizar hipoclorito de sodio para desinfectar el campo circundante, es necesario inactivarlo con tiosulfato de sodio antes de proceder a realizar el muestreo del lugar.  Etiquetar correctamente la muestra tomada antes de ser destinada al laboratorio microbiológico.  No prescribir antibióticos antes de realizar una toma de muestra. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS 1. Mühlhauser M, Rivas L. Laboratorio de microbiología: conocimientos básicos para un clínico. Rev. Med. Clin. Condes [Internet]. 2014 [citado 24 Nov 2020];25(3):559- 579. Disponible en: https://doaj.org/article/826d1acc94af442aae43d91061 90a83a 2. Srivastava N, Anand P, Rana Shivendra. 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