1. Cultivo Primario
Técnicas de cultivo celular

2. Cultivo Primario
Etapas
*Obtención de células
*Separación de tejido
*Disección y/o desagregación
*Cultivo

3. Cultivo Primario
 Métodos para obtener cultivo
*Fragmentos de tejido-migración de
células
*Desagregación mecánica o enzimática
produce una suspensión de células
que se adhiere al substrato.

4. Cultivo Primario
 Desagregación enzimática
 Tripsina
 Colagenasa
 Elastasa
 Hialuronidasa

5. Cultivo Primario
 Embrión de pollo
 Tejido embrionario se desagrega más
fácil, mayor viabilidad celular, prolifera
más rápido que tejido adulto
 Fácil de disertar
 Provee cultivos mesenquimales
 Órganos para generar tejidos especifico

6. Cultivo Primario
 Explantos primarios
 Fragmentos bien finos
 Superficie con poco medio
 Alta concentración de suero
 Migración de células

7. Cultivo Primario
 Subcultivo
 Transición del cultivo
 Más homogéneo
 Caracterización y almacenaje

8. Cultivo Primario
 Migración de fibroblastos
 Polaridad de movimiento
 Lámelapodio – polimerización de actina
 Adhiere a substrato
 Membrana plasmática opuesta se refracta
ocasionando movimiento direccional
 Contacto con otra célula la polaridad se
revierte y migración en dirección opuesta
hasta cultivo en confluencia

9. Microscopio Invertido de Fase
 Iluminación de arriba
 Observación de abajo hacia arriba
 Espesor del plato de cultivo limita la
distancia entre objetivo y trabajo
 Máximo de observación 40X
 Contraste de fase – luz arriba
enmascarada por anillos obscuros
difracción: células sin teñir se observa