El cultivo celular involucra el crecimiento y mantenimiento de células separadas del tejido original a través de la migración, métodos mecánicos o enzimáticos. Esto ha permitido el desarrollo de líneas celulares continuas que han sido fundamentales para la investigación médica, el desarrollo de vacunas y fármacos, y la industria de la biotecnología. El cultivo de tejidos también incluye el mantenimiento de fragmentos de tejido y órganos enteros in vitro, aunque

1. Historia e importancia del
cultivo celular

2. Cultivo de tejido
• Ciencia y Arte
• Técnica difícil
disponibilidad de antibióticos
medios de composición definida
instalaciones asépticas
materiales de cultivo
• Cultivo de tejido: 2 técnicas-órganos y
células

3. Trasfondo Histórico
• 1885 Wihen Roux células embrión pollo salina
• 1907 Harrison cordón espinal de embrión de
anfibio extensión del axón.
• Cultivo de Tejido – desagregado de tejido
células migratorias
• Células dispersas más tarde
• 1916 Rous Tripsinización y subcultivo de
explantos “cell strains” L929 linfocitos de
ratón
• 1920 Carrel Subcultivo de fibroblasto

5. Trasfondo
• 1925 Diferenciación de cultivo de órgano
• 1940 Uso de antibiótico en cultivo facilitó cultivo
a largo periódo
• 1943 Earle Estableció la primera línea
celular contínua
• 1948 Clonación de células L linfocitos
• 1952 Gey Primera línea celular humana
HeLa de carcinoma cervical

7. • 1954 Fibroblastos inhibición por contacto de
motilidad
Vacuna de polio en cultivo células de
riñón monos
• 1955 Clonación de células HeLa cultivo
• homogéneo
Eagle Desarrollo de medio definido
• 1961 Fibroblastos humanos número finito de
división
Fusión Celular- Hibridoma
• 1964 Kato Planta de Zanahoria
• 1965 Ham Medio libre de suero en mamífero
• 1970 Laminar Flow
• 1975 Anticuerpos monoclonal

11. • 1980 Regulación de expresión genética
• 1980-1987 Líneas celulares especializadas
• 1990 Cultivo escala industrial por células
transfectadas/ biofarmaceúticas
• 1991 Cultivo células humanas tallos (troncales)
mesénquima
• 1998 Cartílago tejido-ingeniería
• 1998 Células tallos embriónicas humanas
• 2000 Ingeniería de tejidos

12. Especies para cultivo
• Sapo sangre fría no incubación
• Pollo accesibilidad-diversidad tejidos
• Ratón Líneas celulares contínuas
tumores transplantables (medicina)
• Ratones Transgénicos Genética(genoma)
• Tumores Humanos –Líneas contínuas HeLa
• Células Humanas (medios libre de suero)
• Insectos- agricultura control de plagas
• Peces “Fish Farmer”

13. Investigaciones
• Actividad intracelular-replicación y
transcripción
• Flujo intracelular translocación de receptores
• Interacción ambiental toxicidad,nutrición
• Interacción célula-célula cancer, morfogénesis
• Genética inmortalización
• Productos celulares biotecnología
• Toxicología
• Genómico

15. Áreas dependientes de Cultivo
• Investigación Médica
Vacunas antivirales
Neoplasia
• Técnica de fusión celular y manipulación
genética
• Técnica de anticuerpos monoclonales
• Productos celulares
• Diferenciación celular y desarrollo

17. Aplicaciones en medicina e
industria
• Análisis de cromosomas de la placenta
por amniocentesis
• Efectos de fármacos
• Potencial de contaminantes ambientales
por ensayos in vitro
• Transplante de tejido homotransplante
• Ingeniería de tejidos
• Fecundación in vitro

18. Industria de la biotecnología
Células CHO
Chinese hamster ovary cells

19. Bioreactor
La primera proteína terapéutica
recombinante producida en células
mamíferas, el activador tisular de
plasminógeno, que fue sintetizado usando
células CHO, fue aprobado para el uso
clínico en 1987.

20. Ventajas del cultivo de tejidos
• Control del ambiente
fisicoquímico- pH, temperatura, presión
osmótica
fisiológico- mantenerse constante
microambiente-matríz extracelular
• Caracterización y homogeneidad de la muestra
creación líneas celulares

21. • Economía, escala y mecanización
reactivos directo al cultivo
pruebas de monitoreo-varias variables
elimina uso animales/ética y moral
múltiples pozos y robótica
• Modelaje in vitro de condiciones in vivo

22. Limitaciones
• Expertise
condiciones asépticas
requerimientos del sistema
autenticidad de reservas celulares
• Cantidad
poco tejido 1-10g/ 10-100g
• Dediferenciación y selección
medios libre de suero selección de linaje

23. • Origen de las células
marcadores para caracterizar
• Inestabilidad
variabilidad por “passage”

24. Diferencias del crecimiento in vitro
• Cambio de geometría tridimensional a
substrato bidireccional
• Falta de regulación sistémica
• Cambios metabólicos
• No hay respuestas sistémicas

25. Tipos de cultivos de tejidos
• Cultivo de órganos
• Cultivo de explantos
• Cultivo de células
• Cultivo organotípico

27. Cultivo de tejido el mantenimiento de fragmentos
de tejidos in vitro, incluyendo
líneas y cepas celulares.
Cultivo celular crecimiento de células separada
del tejido de origen ya por
migración espontánea,mecánica
o enzimática.
Cultivo de órgano el crecimiento y mantenimiento
de primordios de órganos o
partes u órganos completos in
vitro de manera que se preserve
la arquitectura o función del órgano.

31. Cultivo de órgano
• Mantiene arquitectura del tejido in vivo
• Se cultiva en una interfase líquido-gas
• Retiene propiedades de diferenciación
por interacciones celulares
• No hay rápido crecimiento, no se propaga
• Cada trabajo requiere explantes frescos
• Se retienen características del tejido

32. Cultivo de explanto primario
• Fragmento de tejido en interfase cristal-
líquido
• Anclaje y migración en substrato sólido

33. Cultivo celular
• Células dispersas de crecimiento de
explanto primario o de tejido
• Cultivo como monocapa adherente al
substrato sólido o en suspensión
• Hay proliferación celular lo que permite
propagar líneas celulares
• Subcultivo por “passage” inicio de línea

34. Línea celular
• Línea celular a partir de cultivo primario:
aumenta número total de células
aumenta capacidad de crecimiento
uniformidad en la población celular
• Debe caracterizarse/ retener por vida
• Línea continua implica cambio en fenotipo o
transformación

35. Cultivo monocapa
• Las células se pegan al substrato y se
propagan
• Dependiente de anclaje, prerequisito para
la proliferación
• La mayoría de las células normales
excepción células hematopoyéticas

37. Cultivos en suspensión
• Células proliferan sin pegarse al substrato
• Independiente de anclaje
• Células hematopoyéticas, líneas
transformadas y células de tumores
malignos
• Pequeña cantidad de células normales
proliferan

38. Líneas celular
• Más representativa de células precursoras
in vivo que diferenciadas
• Cuantificable
• Caracterizable
• Réplicas de muestra
• Pierden interacción célula-célula o célula-
matriz