1. MEDICIÓN DE LA ACTIVIDAD DE LA UREASA
Ureasa: Enzima que hidroliza la urea.
PM = 483 kDa; seis subunidades polipeptídicas iguales.
Se halla en frijol, haba, soya y otras leguminosas.
Posee sitios catalíticos sulfhidrilo (afectados por metales pesados)
H2NCONH2 + 2 H 2O
ureasa 2 NH4OH + CO2
urea
ureasa

2. Reacción Catalizada por la Ureasa
Ureasa
H2N-CO-NH2 + 2 H2O 2 NH4OH + CO2
Reacciones que Fundamentan la Cuantificación
de Urea Hidrolizada
H2O
NH4OH NH4+ + OH- pH sube
Rojo de metilo: amarillo
H2O
HCl Cl- + H+ pH bajo
H+ + OH- H2O (+ H+ exceso)
pH baja
Rojo de metilo: rojo

3. Efecto de la Concentración de Sustrato
[S]
Vo = Vmax
Vo [S] + Km
[S]

4. Efecto de la Concentración de Sustrato
Representación de Representación doble recíproca
Michaelis-Menten de Lineweaver-Burk
Difícil calcular Vmax y Km Permite calcular Vmax y Km
1 Km 1 1
[S] = +
Vo = Vmax Vo Vmax [S] Vmax
[S] + Km
y = m x + b

5. Variable independiente (X) Variable dependiente (Y)
Matraz #
[S], Concentración inicial de sustrato Vo, Velocidad inicial de reacción
experimental experimental
(µmol/mL) (µmol de urea hidrolizada/min)
1 3
Vmax 1 3
2 2
3 3 1
2
1
2
3 1
3
½ Vmax 1
2 2
3
1
2
Km

6. X exp 1/X exp Y exp 1/Y exp
[S] exp 1/[S] exp Vo exp 1/Vo exp
(µmol/mL) 1/(µmol/mL) (µmol de urea 1/(µmol de urea
hidrolizada/min) hidrolizada/min)
2 1
2
1 3
1 3
2
3 3
1
1 1 2
3 2 2
1 3 3
2

7. X exp 1/X exp Y exp 1/Y exp 1/Y cal Y cal
[S] exp 1/[S] exp Vo exp 1/Vo exp 1/Vo cal Vo cal
(µmol/mL) 1/(µmol/mL) (µmol de urea 1/(µmol de urea 1/(µmol de urea (µmol de urea
hidrolizada/min) hidrolizada/min) hidrolizada/min) hidrolizada/min)
2 1
2
1 3
1 3
2
3 3
1
1 1 2
3 2 2
1 3 3
2

8. X exp 1/X exp Y exp 1/Y exp 1/Y cal Y cal
[S] exp 1/[S] exp Vo exp 1/Vo exp 1/Vo cal Vo cal
(µmol/mL) 1/(µmol/mL) (µmol de urea 1/(µmol de urea 1/(µmol de urea (µmol de urea
hidrolizada/min) hidrolizada/min) hidrolizada/min) hidrolizada/min)
Vmax 1 1 3
2 2
3 3 1
2
1
2
3 1
3
½ Vmax 1
2 2
3 [S]
Vo = Vmax
1
2 [S] + Km
Km