1. “AÑO DE LA UNIVERSALIZACIÓN DE LA SALUD”
Curso: Química Orgánica lll
Profesor: Mg. Q.F. Elisa R. Dionicio Escalante
Tema: Tarea virtual- PROTEINAS
Ciclo: V – N1
Integrantes:
Avellaneda Alarcón,Royser
Cabrera Ochoa,Victoria
ChoqueQuispe,VíctorManuel
Fernandez Fernandez,Cristian
Guillen Zambrano,Nicoll
Leiva Gutiérrez,Jesenia
Medina Melendes,Laura
MendozaFlores,Leysi
MeraPuelles,Yoselyn
Miranda Milla Olga
Sales Morales,Rolando
Ubaqui Baldeon,Yudy
Ucharima Accho,Deysi
Velásquez Rodríguez,Nataly
Ríos Ordoñez,Alcides
2020
2. PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS Y PROTEINAS
I. MARCO TEORICO
AMINOÁCIDOS
- Los aminoácidos son compuestos orgánicos que contienen, al menos, un grupo amino
y un grupo carboxilo.
- En aminoácidos de origen natural, el grupo amino ocupa siempre la posición
adyacente (α) al grupo carboxilo.
- Las estructuras de los aminoácidos difieren solamente en la naturaleza de las cadenas
laterales.
- Nótese que 19 de los 20 α-aminoácidos naturales son aminas primarias, en tanto que
prolina es una amina secundaria, donde el átomo de nitrógeno y el átomo de carbono β
son parte de un anillo de pirrolidina.
- Con la sola excepción de glicina, los átomos de carbono α de los aminoácidos son
centros quirales o estereogénicos; por lo tanto, son posibles dos formas enantioméricas
o estereogénicas diferentes.
- Las α-aminoácido naturales pueden clasificarse como neutros, ácidos o básicos
dependiendo de la naturaleza de sus cadenas laterales.
- De ellos, quince tienen cadena lateral neutra, dos (ácidos aspártico y glutámico)
tienen un grupo carboxilo y tres (lisina, arginina e histidina) poseen grupos amino en sus
cadenas laterales.
PROTEÍNAS
- Las proteínas son macromoléculas compuestas por unidades de alfa aminoácidos que
se unen entre sí mediante enlaces peptídicos y que alcanzan un peso molecular igual o
superior a 5000 D.
- El enlace peptídico, característico de estos compuestos, resulta de la reacción del
grupo carboxilo de un aminoácido con el grupo amino del otro aminoácido, lo cual da
lugar a un enlace covalente de tipo carbamida y que tiene algunas características
peculiares como:
El enlace C-N tiene cierto carácter de doble enlace, por lo cual le confiere rigidez a la
molécula.
El oxígeno y el nitrógeno quedan en posición trans.
3. Todos los elementos que lo componen el enlace se encuentran ubicados en el mismo
plano.
La rotación de la molécula formada queda restringida a los carbonos alfa.
REACTIVO DE BIURET
Fundamento
El reactivo de Biuret está compuesto por hidróxido de potasio, sulfato cúprico y
tartrato de sodio y de potasio. El hidróxido de sodio se utiliza para alcalinizar el medio, ya
que esta condición es indispensable para que se dé la reacción.
Las sustancias que reaccionan con las proteínas es el sulfato cúprico, mientras que el
tartrato de sodio tiene como función no permitir la formación de hidróxido de cobre, el
cual tiende a precipitar e interfiere en la reacción.
Si en la muestra se encuentran sustancias que posean enlaces peptídicos (polipéptidos
o proteínas) la prueba dará positiva.
Una reacción se interpreta como positiva cuando la solución se torna de color violeta.
El color se produce por la formación de un complejo entre al menos dos enlaces
peptídicos que poseen el grupo CO-NH y los cationes cúpricos.
El complejo violeta se puede formar de dos maneras: una es por la pérdida de
protones de los grupos amidas que se unen al metal (despronotación), y la otra por la
unión de los electrones de oxígeno y nitrógeno que se encuentren libres y se unen con el
cobre.
Esta reacción puede variar en intensidad y en el color dependiendo del tipo de
proteína.
La prueba se puede realizar de forma cualitativa o cuantitativa. En la forma cualitativa
se reporta como positivo o negativo. Mientras que en la forma cuantitativa se puede
medir la concentración por el método espectrofotométrico.
La reacción se lee entre 540-560 nm. La intensidad del color es directamente
proporcional a la concentración de enlaces peptídicos de la muestra.
4. II. OBJETIVOS
Realizar la determinación cualitativa de aminoácidos.
Realizar la identificación para determinar aminoácidos específicos.
Realizar la determinación cualitativa de péptidos y proteínas con el reactivo de Biuret.
III. MATERIALES
Matraz Erlenmeyer de 250 mL
Papel filtro
Vasos de precipitado de 100 y 250 mL
Espátulas
Lunas de reloj
Probetas de 50 y 100 mL
Embudo de vidrio
Tubos de ensayo
Pinzas para tubos de ensayo
Capilares de vidrio sin heparina
Micro jeringas
Cuba cromatografía
Baño María
Hielo
Frasco aspersor
IV. EQUIPOS
Balanza analítica
Lámpara de luz UV
Mechero Bunsen
Cocinilla eléctrica de plancha
V. MUESTRAS
Tirosina
gelatina
Clara de huevo (albumina)
5. VI. REACTIVOS
Ninhidrina 0.3% etanólico
Ácido nítrico concentrado
Hidróxido de sodio 10%
Hidróxido de sodio 20%
Reactivo de Millon
Sulfato de cobre 1%
Reactivo de biuret
Ácido nítrico 2M
Sulfato de mercurio II 10%
VII. PROCEDIMIENTO
A. IDENTIFICACIÓN DE AMINOÁCIDOS
1. Prueba de la Ninhidrina (Identifica aminoácidos libres)
A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, albúmina, otras muestras) contenida en tubos
de ensayo, adicionar 2 gotas de la solución de ninhidrina 0.3% etanólico. Calentar unos
minutos en baño María.
Resultado: formación de color violeta o violeta azulado (identifica grupos amino libre en
posición α). Algunos aminoácidos como la prolina, hidroxiprolina y asparragina dan color
amarillo. No identifica a la prolina e hidroxiprolina.
2. Prueba de la Xantoproteica (Identifica aminoácidos aromáticos)
A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, tirosina, albúmina, otras muestras) contenida
en tubos de ensayo, adicionar 1 mL de ácido nítrico concentrado. Calentar unos minutos
en baño María. Observar. Luego adicione a todos los tubos 1 mL de hidróxido de sodio
20%, observar.
Resultado: formación de color amarillo, que luego se intensifica por alcalinización, hasta
un color anaranjado. Identifica aminoácidos y proteínas que contienen grupos aromáticos
o derivados de benceno).
6. 3. Prueba de Millon (Identifica restos fenólicos)
A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, tirosina, albúmina, otras muestras) contenida
en tubos de ensayo, adicionar 5 gotas del Reactivo de Millon (0.5 mL de Sulfato de
mercurio II y 0.5 mL de ácido nítrico 2M). Calentar unos minutos en baño María.
Resultado: formación de color rosa salmón o rojo o precipitado. Identifica la tirosina y
proteínas que contienen dichos aminoácidos.
B. IDENTIFICACIÓN DE PÉPTIDOS Y PROTEÍNAS
a. Prueba de Biuret o de Fehling (Identifica enlaces peptídicos)
A 2 mL de solución muestra (aminoácidos, albúmina, otras muestras) contenida en tubos
de ensayo, adicionar 20 gotas de hidróxido de sodio 10% y una gota de sulfato de cobre
1%.
Resultado: formación de color violeta (necesita mínimo 3 unidades de aminoácidos).
VIII. RESULTADOS
Identificación de aminoácidos
Prueba albumina Tirosina Tirosina
Prueba de la Ninhidrina Color Violeta azulado
Prueba de la Xantoproteica Color amarillo
Prueba de Millon Rojo o rojo salmon
Identificación de péptidos y proteínas
Prueba Albumina
Prueba de Biuret o de Fehling Color violeta
IX.DISCUSIÓN DE RESULTADOS
- En la prueba de la Ninhidrina, nos indica que no hay proteínas, pero sí hay aminoácidos
libres, de un pH 4 y 8.
- La prueba Xantoproteica podemos considerar como una sustitución electrofílica
aromática de los residuos de tirosina de las proteínas por el ácido nítrico dando un
compuesto coloreado amarillo a pH ácido.
7. - En la prueba de Millon la presencia de cantidades relativamente altas de mercurio
conduce a la formación de Nitrato de mercurio (I) Hg2(NO3)2 el cual en un medio
fuertemente ácido reacciona con el grupo -OH de la tirosina produciendo una coloración
roja característica.
- En la prueba con el reactivo de Biuret contiene CuSO4 en solución acuosa alcalina
(gracias a la presencia de NaOH), la reacción se basa en la formación de un compuesto
de color violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones
Cu+2
y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los
enlaces peptídicos, esto si la reacción da positiva. Cuando la reacción de biuret da
negativa, queda de color azul.
X. CONCLUSIONES
Se realizó la identificación para determinar aminoácidos y proteínas.
Se realizó la determinación cualitativa de péptidos y proteínas por la prueba Biuret.
8. XI. BIBLIOGRAFIA
Carey Francis A. química orgánica. capítulo 27 aminoácidos, péptidos y proteínas. 3ª
edición.
Martínez Santillán Mogelio. Manuel de prácticas de laboratorio de bioquímica.
practica número 6. proteínas colegio de bachilleres del estado de baja california. enero,
2007.
Fuentes F, Quispe I, García j. estandarización del método de biuret para cuantificar
proteínas totales en suero antibotrópico polivalente producido en el centro nacional de
productos biológicos del ins. bol – inst nac salud 2012; 18 (11-12). disponible en:
repositorio.ins.gob.pe
Laboratorios Winer. proteínas totales. método colorimétrico para la determinación de
proteínas totales en suero y plasma. disponible en: wiener-lab.com.ar
9. ANEXOS
Experiencia 1: Prueba de la Ninhidrina
Experiencia 2: Prueba de la Xantoproteica
Experiencia 3: Prueba de Millon
10. Experiencia 4: Identificación de péptidos y proteínas muestra albumina
(Izq.: resultado negativo der.: positivo)
CUESTIONARIO
1. Indique la clasificación de los aminoácidos, coloque 3 ejemplos de cada uno.
POR LA CADENA LATERAL
ALIFATICO: valina, leucina, isoleucina
HIDROXILADOS: serina, treonina, tirosina
AZUFRADOS: cisteína, metionina.
ACIDOS: ácido aspártico, ácido glutámico, glutamina.
BASICOS: lisina, arginina, histidina.
AROMATICOS: fenilalanina, triptófano, tirosina.
HETEROCICLICOS: prolina, triptófano, histidina.
POR SU REQUERIMIENTO
ESENCIALES: valina, leucina, isoleucina, treonina
NO ESENCIALES: arginina, alanina, prolina, ácido glutámico.
POR SU POLARIDAD
- POLARES: serina, cisteína, glicina
- NO POLARES Y NEUTROS: alanina, valina, leucina.
2. Mencione las reacciones de cada prueba.
Reacción con la ninhidrina: El grupo alfa-amino de los aminoácidos forma complejos
coloreados con la ninhidrina: violeta azuloso en la mayoría de los aminoácidos cuyo grupo
amino es primario, amarillo para la prolina e hidroxiprolina y café para la asparagina que
tiene un grupo amido en la cadena lateral. Esta reacción también identifica los grupos
alfa-amino libres presentes en péptidos y proteínas.
11. Reacción de Millón : El anillo fenólico tiene un comportamiento característico frente a las
sales de Mercurio a pH ácido, formando complejos color rojo ladrillo con el anillo fenólico
de la tirosina y las proteínas que la contienen.
Reacción Xantoprotéica: Los anillos aromáticos presentes en algunos aminoácidos
reaccionan con ácido nítrico concentrado formando nitro derivados de color amarillo o
anaranjado por lo cual esta reacción permite reconocer la presencia de Tirosina,
Fenilalanina y Triptófano.
COLOR VIOLETA
12. 3. Mencione que pruebas más se pueden utilizar para identificar aminoácidos.
Prueba de ninhidrina
Prueba de millon
Prueba de xantoproteica
Prueba de biuret
Prueba de sulfato de amonio
- Prueba de los grupos azufrados
4. Averiguar el RF de los aminoácidosestudiados.
Concepto de Rf:
Significa relación de frentes, es una relación de distancias y se expresa como el cociente
entre la distancia recorrida por la sustancia y la distancia recorrida por el disolvente hasta
el frente del eluyente.
5. Indique la clasificación de las proteínas, coloque 3 ejemplos de cada uno.
Aunque en ocasiones se emplea una clasificación basada en las funciones de las
proteínas, con frecuencia se recurre a otros criterios, como su composición y
complejidad, que permiten dividirlas en dos grandes grupos:
a) Holoproteínas o proteínas simples: Están formadas únicamente por cadenas poli
peptídicas, ya que en su hidrólisis (descomposición en subunidades) sólo se obtienen
aminoácidos. Dicho de otra forma: están formadas exclusivamente por aminoácidos.
13. - Según su estructura tridimensional, las holoproteínas se subdividen en proteínas
globulares (redondeadas, con un alto grado de plegamiento y normalmente solubles) y
fibrilares (lineales, con una estructura terciaria menos compleja e insolubles).
- Algunas proteínas con estructura globular pueden adquirir estructura fibrilar y hacerse
insolubles.
- Éste es el caso de la transformación de fibrinógeno en fibrina durante el proceso de la
coagulación sanguínea.
- Los filamentos de fibrina crean una red donde los glóbulos rojos quedan atrapados y
forman el coágulo.
Entre las proteínas globulares destacan las siguientes:
- Albúminas: Constituyen un grupo de proteínas grandes, que desempeñan funciones
de transporte de otras moléculas o de reserva de aminoácidos. Se pueden diferenciar a
su vez en lacto albúminas, ovoalbúminas y sero-albúminas, según se localicen en la leche,
en la clara de huevo o en el plasma sanguíneo, respectivamente. Son las proteínas más
grandes, pudiendo llegar a alcanzar masas moleculares de 1000 000. Como su nombre
indica, su forma globular es muy perfecta. Se incluyen en este grupo algunas
heteroproteínas, como la hemoglobina.
- Histonas: Poseen una masa molecular baja y contienen una gran proporción de
aminoácidos básicos. Asociadas al ADN, forman parte de la cromatina y desempeñan un
papel muy importante en los procesos de regulación génica.
Las proteínas fibrilares realizan generalmente funciones estructurales. Se incluyen en este
grupo algunas proteínas muy conocidas:
- Queratina: Presente en las células de la epidermis de la piel y en estructuras cutáneas
como pelos, plumas, uñas y escamas, es una proteína rica en el aminoácido cisteína.
- Colágeno: Su resistencia al estiramiento justifica su presencia en los tejidos conjuntivo,
cartilaginoso y óseo. Posee una estructura secundaria característica compuesta por tres
cadenas trenzadas.
- Miosina: Esta proteína participa activamente en la contracción de los músculos.
- Elastina: Cómo su nombre indica, posee una gran elasticidad que le permite recuperar
su forma tras la aplicación de una fuerza. Debido a esta propiedad, la elastina se
encuentra en órganos sometidos a deformaciones reversibles, como los pulmones, las
arterias o la dermis de la piel.
14. b) HETEROPROTEÍNAS, PROTEÍNAS COMPLEJAS O CONJUGADAS: Además de las cadenas
poli peptídicas, están compuestas también por una parte no proteica que se denomina
grupo prostético.
Según la naturaleza del grupo prostético, las heteroproteínas se clasifican en
fosfoproteínas, glucoproteínas, lipoproteínas, cromoproteínas y nucleoproteínas.
- Fosfoproteínas: Su grupo prostético es el ácido orto fosfórico. Ejemplos de
fosfoproteínas son la vitelina, presente en la yema de huevo, y la caseína, abundante en
la leche y proteína principal del queso.
- Glucoproteínas: Su grupo prostético está formado por un glúcido. Se encuentran en
las membranas celulares, donde desempeñan una función antigénica. Las
gammaglobulinas con función de anticuerpos son, así mismo, glucoproteínas. También
se incluyen en este grupo el mucus protector de los aparatos respiratorio y digestivo,
algunas hormonas y el líquido sinovial presente en las articulaciones.
- Lipoproteínas: Su grupo prostético es un lípido. Aparecen en las paredes bacterianas y
en el plasma sanguíneo, donde sirven como transportadores de grasas y colesterol.
- Cromoproteínas: Tienen como grupo prostético una molécula compleja que posee
dobles enlaces conjugados, lo que les confiere color. Hemoglobina, porfirina,
hemocianina, citocromo, etc, pertenecen a este grupo.
- Nucleoproteínas: Su grupo prostético está formado por ácidos nucleídos. Las
nucleoproteínas constituyen la cromatina y los cromosomas.
6. Mencione las reacciones de la prueba de biuret
Prueba de Biuret:
- El Reactivo de Biuret indica la presencia de proteínas, péptidos cortos y otros
compuestos con dos o más enlaces peptídicos en sustancias de composición
desconocida.
- Está hecho de hidróxido potásico (KOH) y sulfato cúprico (CuSO4). El reactivo cambia
a violeta en presencia de proteínas, y vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de
cadena corta. El hidróxido de potasio no participa en la reacción, pero proporciona el
medio alcalino necesario para que tenga lugar.
15. 7. Mencione que pruebas más se pueden utilizar para identificar proteínas.
RXN: NIHIDRINA
RXN: MILTON
RXN: XANTOPROTERCA
RXN: ACETATO DE PLOMO