TEMA:DIGESTIÓN DE MACROMOLECULAS

1. INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL
ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS
MICROBIOLOGÍA GENERAL
TEMA:DIGESTIÓN DE MACROMOLECULAS
EQUIPO:4 GRUPO:3QM1

2. OBJETIVOS
Entender y montar ensayos de
degradación de polímeros por
enzimas extracelulares microbianas.
PLACAS
Equipo 7 sección 3

3. ENZIMA
 Mas de 100 aa, masa: 100 KDa, Diametro: 25
amstrongs
 Afectan la velocidad de la reaccion sin participar como
reactantes ni aparecer en los resultados
 Pueden ser inhibidas
 Se ocupan cantidades minimas

4.  Alta especificidad
 Modifican la estructura química del sustrato
 No alteran el equilibrio de la reacción
 Sitio activo:
 1. Tamaño
 2. Forma
 3. Unión
 4. Interacción
 5. Especificidad

5. CLASIFICACIÓN
 Las enzimas se clasifican en varias categorías dependiendo del tipo
de reacción que controlen:
 Hidrolíticas
 Oxidantes
 Reductoras
 Las enzimas se denominan añadiendo asa al nombre del sustrato
con el cual reaccionan.
Polímero Enzima
Polisacárido Glicosidasas
Proteína Proteasas
Polipeptisas
Lípido Lipasas
Ácido nucleico Nucleasas

6.  Organismos auxótrofos: presentan deficiencias a nivel
biosíntesis (incapaces de convertir precursores
biosintéticos con biopolímeros)
 Organismos protótrofos: no requieren de factores de
crecimiento.
Factores de crecimiento: sustancias capaces de sustituir
deficiencias metabólicas.

7. Hidrólisis de
gelatina.
a. Prueba de
licuefacción de la
gelatina en tubo.
37ªC 24-48h. Baño de
Hielo 1 h.
Tubo liquido +
Tubo solido -
Hidrólisis de
gelatina.
b. Prueba de la
digestión de la
gelatina y caseína
en caja.
28-30ºC
48h.
HgCl2 Halos transparentes de
hidrólisis.
Hidrólisis Almidón. 37ºC
48h.
Solución
de Lugol.
Halos de hidrólisis como
zonas transparentes que
rodean a bacterias sobre
un fondo azul.
Gelosa
gelatina .
Agar leche
descremad
a.
Procedimient
o.

8. Hidrólisis de
fosfolípidos.
37ºC 48h. Presencia de zona opalescente en
el agar en torno al crecimiento del
microorganismo.
Digestión de proteínas y
fermentación de leche
tornasolada.
37ºC
24h.
Acidificación: Vire del indicador a
color rojizo que indica fermentación
de lactosa.
Coagulación: Aparición de un
coágulo semisólido que ocupa todo
el tubo.
Reducción: El medio pierde color del
tornasol (se ve blanco).
Peptonización: Fragmentación del
coagulo.
Licuefacción del coagulo: El medio
se licua totalmente (apariencia agua
con arena).
Alcalinización: El medio vira a un
color violeta.
Agar yema
de huevo.
Gelosa
sangre.
Hemólisis alfa : Capa
opalescente.
Hemolisis beta: Halo
traslucido.
Hemólisis gama:
Ausencia de halo.

9. GELOSA GELATINA
COMPOSICIÓN
Caldo nutritivo
deshidratado……………….…….............8.0 g
Gelatina…………………………………..30.0 g
Agar…………...…………………………...7.5 g
Agua (aforar)………..……………….1000.0 ml
Ajustar el pH a 7.0
Gelosa Gelatina
Equipo: 7 sección: 3
Pseudonomas aeruginosa/Bacillus subtilis

10. GELOSA GELATINA
Medio diferencial.
La gelatina es el producto desnaturalizado
parcial del colágeno, y muestra la
propiedad de gelificar cuando se disuelve
en agua caliente y solidificar en ambientes
frios. Sus productos de la hidrólisis
carecen de esta propiedad.

11. PROTEASAS Y PEPTIDASAS
 Para utilizar la gelatina muchos microorganismos
producen gelatinasa, una exoenzima que la hidroliza.
 Este proceso ocurre en dos etapas:
 Primera, se liberan polipéptidos
 Segunda, una mezcla de aminoácidos.

12. RESULTADOS GELATINA EN TUBO
Microorganismo R. Teórico R. Práctico (SECCIÓN 3) R. Práctico (SECCIÓN 4)
Escherichia coli - - +
Bacillus subtilis + + +
Pseudonomas
aeruginosa
+ +
Salmonella typhi -
Proteus vulgaris + -
Klebsiella
pneumoniae
- - -
Shigella flexneri - -
Staphylococcus
aureus
+

13. GELATINA EN TUBO
Equipo 7 sección 3
Bacillus subtilis
GELATINA EN TUBO
Equipo 5 sección 3
Klensiella pneumoniae

14. RESULTADOS GELATINA EN PLACA
Microorganismo R. Teórico R. Práctico (SECCIÓN 3) R. Práctico (SECCIÓN 4)
Escherichia coli - - -
Bacillus subtilis + + +
Pseudonomas
aeruginosa
+ + -
Salmonella typhi - - -
Proteus vulgaris + - -
Klebsiella
pneumoniae
- - -
Shigella flexneri - - -
Staphylococcus
aureus
+ - +

15. GELOSA GELATINA
Klebsiella pneumoniae /Shigella
flexneri
GELOSA GELATINA
GELOSA GELTINA
Equipo 7 sección 3
Pseudonomas aeruginosa/Bacillus subtilis

16. AGAR ALMIDÓN
COMPOSICIÓN
Caldo nutritivo deshidratado....…………8.0 g
almidón soluble....…….....……………….5.0g
Agar...…………………….……………..15.0 g
Agua (aforar) …..…………......……..1000mL
Ajustar a pH a 6.8-72
Agar Almidón
equipo:7 sección: 3
Bacillus subtilis/ Pseudonomas aeruginosa

17. Componentes del almidón
 El almidón es un homopolisacarido, su monómero es el α-D-glucosa
que están unidos por puentes α-glucosidicos.
Amilosa lineal (10-20%) y amilopectina ramificada (80-90%)
 La hidrolisis enzimática ocurre en las uniones α-1-4-acetal y α-1-6-
acetal.

18. α-amilasa
 La α-amilasa
 La α-amilasa cataliza la hidrolisis de las uniones α-1,4-
glucosidicas.
 La amilosa es degradada por completo por la amilasa.
 La hidrolisis completa del almidón requiere de otra enzima, que
actúa en los puntos de ramificación.

19. LUGOL
 La amilosa, forma hélices donde se juntan las moléculas de yodo,
formando un color azul oscuro a negro.
 La amilopectina, forma hélices mucho más cortas, obteniéndose un
color entre naranja y amarillo
 Al romperse o hidrolizarse el almidón en unidades más pequeñas de
carbohidrato, el color azul-negro desaparece.

20. Microorganismo Teórico Laboratorio 3 Laboratorio 4
Escherichia coli
- (-) (-)
Bacillus subtilis
+ (+) (+)
Pseudomonas
auruginosa - (+)….…….….
(-)
(-)
Salmonella typhi
- (-) (-)
Proteus vulgaris
- (-) (-)
Klebsiella
pneumoniae + (-) (-)
Shigella flexneri
- (-) (-)
Staphylococcus
aureus [-] (-) (+)
[-]=70-80%
http://www.lamission.edu/lifesciences/steven/biochemical%20unknown

21. Agar almidón
Equipo 8 | Laboratorio 3 |
Bacillus subtilis y Pseudomonas aeruginosa
Agar almidón
Equipo 2 Laboratorio 3
Escherichia coli y Salmonella typhi
Equipo 8/Laboratorio 4
Bacillus subtilis y Pseudomonas

22. AGAR LECHE DESCREMADA
COMPOSICIÓN
Caldo nutritivo deshidratado........8.0 g
Leche descremada en polvo…..25.0 g
Agar…………..………………….15.0 g
Agua (aforar)…………………1000 mL
Ajustar pH a 7.0
Agar leche descremada
Equipo: 7 sección: 4
Bacillus subtilis / Pseudonomas aeruginosa

23. AGAR LECHE DESCREMADA
 Caseína: proteína de la leche, la
cual proporciona el color.
cuando esta se hidroliza se ve
un halo transparente alrededor
de la colonia eso indica ausencia
de la caseína
 Enzimas: caseinasa (proteasa)
Agar leche descremada
Equipo: 7 sección: 3
Bacillus subtilis / Pseudonomas aeruginosa

24. RESULTADOS: LECHE DESCREMADA
Microorganismo R. Práctico (SECCIÓN 3) R. Práctico (SECCIÓN 4)
Escherichia coli - -
Bacillus subtilis + +
Pseudonomas
aeruginosa
+ +
Salmonella typhi - -
Proteus vulgaris - -
Klebsiella pneumoniae + +
Shigella flexneri - -
Staphylococcus aureus + +

25. Agar leche descremada (reverso)
Equipo:5 sección:3
Shigella flexneri (no crece)
Klebsiella pneumoniae (crece y es positiva)
Agar leche descremada (anverso)
Equipo:5 sección:3
Pseudonomas aeruginosa

26. LECHE TORNASOLADA
 Medio diferencial
 Determinación de funciones metabólicas de un microorganismo:
1. Fermentación de la lactosa
2. Caseólisis
3. Coagulación de la caseína
COMPOSICIÓN
Leche descremada en polvo.………………100.0 g
Tornasol en polvo………….………………….0.75 g
Agua (aforar)………….…………………….1000 ml
pH 6.8

27. FERMENTACIÓN DE LA LACTOSA
(ACIDIFICACIÓN)
 Tornasol como indicador
Rojo en condiciones ácidas (pH 4.5)
Azul en condiciones alcalinas (8.3)
Azul purpúreo pH 6.8

28. FORMACIÓN DE UN COAGULO
ÁCIDO (PEPTONIZACIÓN)
 Por condiciones ácidas del medio, se produce un
coágulo firme como resultado de la precipitación de la
caseína
 Se llega a la peptonización por caseasas.

29. FORMACIÓN DE UN CUAJO
(COAGULO)
 Conversión de la caseína en paracaseína por la renina,
pepsina o quimiotripsina

30. REDUCCIÓN DEL
TORNASOL
 El tornasol es un indicador de pH y un indicador de
oxidación-reducción.
 El tornasol puede actuar como aceptor de electrones
 La acción de las reductasas elimina el oxígeno para
formar compuestos leucotornasolados incoloros.

31. INTERPRETACIÓN
 Rojo/rosado
Reacción ácida, fermentación de la lactosa.
La subsuperficie cambia primero a rosa pálido, mientras que a superficie
permanece rosa-púrpura.
Cuando se produce más ácido la capa superior torna a rosa claro y la
porción rosa del fondo se decolora.
También empieza la coagulación ácida manifestada por una banda
angosta o collar rosa en la parte superior por la disminución de la
oxidación.

32.  Azul purpúreo
Sin fermentación de lactosa.
Sin cambios en el indicador pH.
 Azul
Reacción alcalina, sin fermentación de lactosa.
Los microorganismos atacan a las sustancias
nitrogenadas en el medio, actividad sobre
lactoalbúmina (producción de amoníaco).
Tubo no inoculado

33.  Blanco (reducción)
Reducción del tornasol en todo el tubo a una leucobase blanca cuado el
tornasol actúa como un aceptor de electrones.
 Formación del coágulo
1. Precipitación por el ácido producido a partir de la lactosa.
2. Conversión de la caseína en paracaseína por acción de la renina.

34. Digestión
Proteína de la leche digerida
Medio claro
Dilución del cuajo o de las proteínas de la leche
por enzimas proteolíticas.

35. Altas de pruebas bioquímicas,
Universidad Nacional Autónoma de México, 2003
Bailón Lira, Lucía; González Meléndez ,Roberto Cruz; Cervantes Sandoval, Armando.

36. Leche tornasolada
equipo sección 3
Leche tornasolada
equipo 4 sección 3
Proteus vulgaris
Leche tornasolada
equipo 5 sección 3
Shigella flexneri

37. AGAR YEMA DE HUEVO.
Peptona………………………………………. 20,0 g
Fosfato disódico ……………………………..2,5 g
Cloruro de sodio ……………………………..1,0 g
Solución al 0,5% p/v de sulfato
de magnesio ……………………………….....0,1 mL
Glucosa…………………………………..........1,0 g
Agar…………………………………………... .12,5 g
Agua destilada………………………………...500,0 mL
Emulsión estéril de yema de huevo
pH a 7.3 – 7.4

38. Lípidos neutros 65,0 %
Colesterol 4,0 %
Lípidos polares
(31,0 %)
Fosfatidilcolina 26,0 %
Fosfatidiletanolamina 3,8 %
Lisofosfatidilcolina 0,6 %
Esfingomielina 0,6 %
Composición de lípidos de
Yema de Huevo.

39. Hidrólisis de Fosfolípidos.
• Pertenecen al grupo de lípidos derivados del glicerol,
presentando una estructura similar a la de los triglicéridos
(TGs).
• Los fosfolípidos están compuestos por una molécula de
glicerol a la que se unen 2 ácidos grasos en las posiciones
sn-1 y sn-2, estos ácidos grasos pueden presentar distinto
largo de cadena hidrocarbonada, y variar en el grado de
insaturación según su procedencia.

42. Hidrólisis de Fosfolípidos.
Zona opalescente en el agar en
torno al crecimiento de un
microorganismo.

43. Hidrólisis de Fosfolípidos.
Zona opalescente en el agar en
torno al crecimiento de un
microorganismo.

44. Agar yema de huevo
placa contaminada por el
anverso
Agar yemas de huevo
Placa contaminada por hongos

45. Agar Sangre
AGAR SANGRE
(COMPOSICIÓN)
Infusión 500 g de corazón de
ternera,
deshidratada………………………
……….2.0 g
Triptosa……………………………
………10.0 g
Cloruro de sodio
…………………………..5.0 g
Agar…………………………………
…... ..15.0 g
Agua aforar a
……………………….....1000 mL
pH de 6.8

46.  Medio ENRIQUECIDO y
DIFERENCIAL que se
usa para el aislamiento y
cultivo de numerosos
microorganismos.
El medio es útil tanto para el
aislamiento y cultivo de
microorganismos aerobios y
anaerobios nutricionalmente
exigentes a partir de una
gran variedad de muestras,
como para la observación de
reacciones de hemólisis.
Agar Sangre Tipos de
hemólisis:

47. Hemólisis
 La hemólisis alfa
se refiere a una
lisis parcial de
eritrocitos que
produce una
coloración verde
que se observa
alrededor de las
colonias. Debido
a la liberación de
un producto de
degradación de
la hemoglobina
llamado
biliverdina.

48. Hemólisis
 Una zona de
hemólisis incolora,
clara y bien definida
que rodea a ciertas
colonias bacterianas
que se desarrollan
sobre el agar. Esta
hemólisis es causada
por hemolisinas que
destruyen al glóbulo
rojo y la hemoglobina
se convierte en
sustancia incolora.

49. Hemólisis
 Los
microorganismos
clasificados
como gamma
hemolíticos no
producen
hemólisis en agar
sangre; es más
correcto
llamarles no
hemolíticos.

50. Microorganismo Hemólisis
Escherichia coli
γ - β
Bacillus subtilis
β
Pseudomonas
aeruginosa
β
Salmonella typhi γ
Proteus vulgaris Hemolític
a
Klebsiella
pneumoniae
β - γ
Shigella flexneri Hemolític
a
Staphylococcus
aureus
β
Resultados
Teóricos

51. Microorganism
o
Hemól
isis
Escherichia coli
Bacillus subtilis
Pseudomonas
aeruginosa
β
Salmonella typhi
Proteus vulgaris
Klebsiella
pneumoniae
Shigella flexneri
Staphylococcus
aureus
β
Microorganismo Lab 3 Lab 4
Escherichia coli
Bacillus subtilis β
Pseudomonas
aeruginosa
β
Salmonella typhi
Proteus vulgaris
Klebsiella
pneumoniae
γ
Shigella flexneri γ
Staphylococcus
aureus
Resultados
prácticos
1 2 3 4 5 6 7 8 1 2 3 4 5 6 7 8
γ γ γ γ
β β β β β
β β γ β β
γ γ γ
α
γ γ β β
γ γ β
β α β

52. EQUIPO 7 LAB 4
Pseudomonas aeruginosa/
Bacillus subtilis Bacillus subtilis /
EQUIPO 8 LAB 3

53. Klebsiella pneumoniae /
Shigella flexneri
Equipo 5
Lab 3
Equipo 4 Lab 3
Proteus vulgaris