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2. Microscopio Optico Compuesto:
• Concepto
• Importancia del microscopio en la Biología
Celular y molecular
• Formación de la imagen
• Partes ópticas y mecánicas: localización y
función
• Poder de resolución
• Manejo del microscopio óptico compuesto
• Preparaciones temporales y permanentes
• Tipos de microscopio óptico y sus
aplicaciones:
• Campo claro
• Contraste de fases
• Fluorescente
• Luz polarizada
• Campo oscuro
• Confocal
• Videomicroscopía digital
Microscopio electrónico:
• Concepto
• Poder de resolución
• Tipos de microscopio electronico y sus
aplicaciones
• De barrido
• De transmisión.

3. Microscopio, del griego: "mikro" = pequeño y
"scopeõ" = mirar (para mirar cosas pequeñas)
MICROSCOPÍA
MICROSCOPÍ
A
DE LUZ
MICROSCOPÍA
ELECTRÓNICA
se clasifican en:
De acuerdo con la radiación que
utilizan

5. La naturaleza de la luz
• Puede ser descrita mediante dos modelos:
– Por su forma de propagación, naturaleza ondulatoria (James
Clerk Maxwell)
– Por su forma de interactuar con la materia, naturaleza
corpuscular ó fotónica (Albert Einstein)
• Forma parte del espectro electromagnético
• Luz blanca está constituida por varios colores diferentes (Isaac
Newton)
Espectro electromagnético

6. ESPECTRO VISIBLE
ESPECTRO
ELECTROMAGNÉTIC
O
Luz visible
 Forma parte de una estrecha franja que va
desde longitudes de onda de 400 nm (violeta)
hasta los 700 nm (rojo). (0.4 – 0.7 µm)

7.  El espectro de luz visible puede ser percibido
por el ojo humano y su frecuencia determina su
color.

8. Las Lentes
• Objetos que concentran o
hacen diverger los rayos de
luz
• Existen dos tipos
principales de lentes:
 Convergentes: forman
imágenes reales
 Divergentes: forman
imágenes virtuales
Lentes convergentes
Lentes divergentes

9.  Amplificación Vacía:
Incremento de la imagen sin que pueda
percibirse mayores detalles.
Amplificación total: Dado por el
producto de la lente ocular por el
objetivo.
 Amplificación: Aumento del
tamaño de la imagen.
Conceptos en microscopíaConceptos en microscopía
Ocular 10x
Objetivo 10x
Aumento Total 100x
Poder de Resolución: Medida de
la capacidad para ver puntos vecinos
como entidades diferentes. El límite
de resolución del microscopio de luz
es de 0.2 micrómetros (0.22 μm) ó
200nm.

10. • Milímetro: milésima parte del metro (mm)
• Micrómetro: milésima parte del milímetro (µm)
• Nanómetro: milésima parte del micrómetro (nm)
• Angstrom: décima parte del nanómetro (Aº)
Medidas Microscópicas

12. Microscopio
compuesto
fabricado en
1751 por
Magny.

13. El microscopio compuesto
• Instrumento óptico que se usa para
aumentar o amplificar las
imágenes de objetos y organismos
no visibles a simple vista.
• Se utiliza para examinar objetos
transparentes o cortados en
láminas tan finas que se
transparentan
• Está conformado por tres sistemas:
1. Iluminación
2. Óptico
3. Mecánico

14. Formación de la imagen

17. • El contraste lo provee la
tinción de las muestras
Imágenes con
microscopio de
campo claro
1. Campo claro, brillante o luminoso:1. Campo claro, brillante o luminoso:
La luz proveniente de la fuente converge sobre
la muestra se forma un campo brillante
alrededor de la imagen de la muestra.

18. MICROSCOPIOS DE CAMPO CLARO, BRILLANTE Ó
LUMINOSO
Microscopio óptico
convencional
Microscopio óptico convencional con doble
óptica para aprendizaje

19. TEMPORALES
FIJAS
Muestra +Colorante +
Medio de Montaje
Muestra + Fijadores + Tinción +
Medio de Montaje
Cubreobjeto
Portaobjeto

20. • Permite observar muestras vivas, o carentes de color.
• sin uso de colorantes
2. Contraste de Fases:2. Contraste de Fases:
Convierte la diferencia de
índices de refracción en
diferencias de intensidad.

21. Fibroblastos teñidos con el
fluorocromo FITC
Bacillus subtilis
esporulando teñidos
con FITC, DAPI y
βgalactosidasa.
3. Fluorescencia:3. Fluorescencia:
Utiliza moléculas fluorescentes que al iluminarlas con radiación
invisible, emiten radiación visible.
Utiliza luz de longitud de onda corta (uv) para excitar los
electrones de la muestra.

22. La muestra se “tiñe” con una sustancia fluorescente
(fluorocromos) que absorbe la energía de las ondas cortas de la
luz y emite la luz de longitudes de ondas más largas (verde).

23. • Se basa en la birrefringencia (emite
brillantez) de los objetos.
• Utiliza luz polarizada plana.
• Las muestras se colocan entre dos
láminas polaroid que tienen sus
direcciones de vibración
perpendiculares
Cristales de ácido urico observados con
microscopio de luz polarizada
4. DE LUZ POLARIZADA4. DE LUZ POLARIZADA::
.

25. 5. MICROSCOPIO DE CAMPO OSCURO
• Dispositivo que permite transmitir la luz de forma
circular, dejando el centro oscuro.
• Con esto conseguimos que el fondo de la muestra
aparezca negro y los especímenes brillantes.
• El objeto iluminado dispersa la luz y se hace así
visible contra el fondo oscuro que tiene detrás, como
las partículas de polvo iluminadas por un rayo de sol
que se cuela en una habitación cerrada.

26. • Las porciones transparentes del
espécimen quedan oscuras,
mientras que las superficies y
partículas se ven brillantes, por la
luz que reciben y dispersan en
todas las direcciones
• Se utiliza para analizar elementos
biológicos transparentes y sin
pigmentar, invisibles con
iluminación normal, sin fijar la
muestra, es decir, sin matarla.

27. Utiliza muestras
de cortes seriados
teñidas con
fluorescencia, para
reconstruir una
imagen
tridimensional
6. Confocal:6. Confocal: Combina la microscopía
fluorescente con el análisis electrónico de la
imagen para obtener imágenes
tridimensionales.

28. Microscopio
confocal

31. MICROSCOPI
O
ELECTRÓNIC
O
CÁMARA AL VACÍOCÁMARA AL VACÍO
LENTES: ELECTROIMANESLENTES: ELECTROIMANES
IMAGEN: EN UNA PANTALLAIMAGEN: EN UNA PANTALLA
HAZ DEELECTRONES
HAZ DEELECTRONES

32. • El factor limitante del poder de resolución del
microscopio compuesto, es la longitud de onda de
la luz
Imagen en microscopio
compuesto Imagen en microscopio

33. Debido a que el microscopio
electrónico utiliza electrones y los
electrones tienen una longitud de
onda de 0.004 nm (100,000 más
corta que la de la luz), pueden
mostrar estructuras mucho más
pequeñas, por lo que presentanpresentan
alto poder de resolución.alto poder de resolución.

34. Hay dos tipos básicos de Microscopios
Electrónicos, en ambos
• El de transmisión (Transmission
Electron Microscope, TEM)
• El de barrido (Scanning Electron
Microscope, SEM).

35. Microscopía de transmisión:Microscopía de transmisión: Los electrones pasan
a través de la muestra, la cual debe cortarse
en finas capas. Límite de Resolución de 1 a 2 nm

36. Microscopía de Barrido o tridimensional:Microscopía de Barrido o tridimensional:
Los electrones chocan (barren) con la muestra,
En lugar de atravesarla. Produce imágenes
Tridimensionales de la superficie del objeto.
Límite de Resolución de 10 nm
Óvulo de hámster sin zona
pelúcida con espermatozoides
Criofractura de epitelio gástrico vista por
microscopia de barrido

37. Microscopio Electrónico
de Barrido
SS-550
Imagen de electrones
secundarios en una muestra de cerámica:
Ampliación: 10.000x
Aceleración: 15.0 kV