Clase de microscopia básica para Podologia

1. …CONOCIENDO EL
MICROSCOPIO

2. ¿Limite de resolución del ojo humano?
Menor distancia entre 2 puntos
para ser distinguidos como
diferentes
Aproximadamente 0,1 mm
¿Para qué el microscopio?

3. Unidades de medida

5. • Microscopía : Conjunto de técnicas y métodos destinados
a hacer visible los objetos de estudio que por su pequeñez
están fuera del rango de resolución del ojo normal.
• Microscopio: Instrumento que posibilita observar objetos
que poseen un tamaño muy pequeño, amplificando su
imagen para poder ser apreciados a simple vista.
Definición y tipos de microscopio

7. • Lupa: Instrumento óptico que
consta de una lente convergente
de corta distancia focal que desvía
la luz incidente de modo que se
forma una imagen virtual ampliada
del objeto.
Microscopio óptico
Puede ser
a. Simple o estereoscópico ( una lente )
b. Compuestos ( dos lentes: ocular y objetivo)

8. o De campo claro, fotónico, normal,
común, corriente
o La muestra es iluminada mediante un
foco de luz, esa luz atraviesa la
preparación e ingresa al sistema
óptico, permitiendo un campo bien
iluminado, para ser conducida a través
del objetivo y del ocular hasta llegar a
formar la imagen en el ojo del
observador
• La muestra debe ser fina para que
pueda ser atravesada por la luz
• El campo claro no produce contraste,
requiere métodos de tinción
• Las células observadas pueden estar
vivas o fijadas y teñidas
MO compuesto corriente

9. o Límites de resolución: 0.2 µm ( 200 nm)
o Capacidad de aumento: aumento del objetivo x aumento del
ocular
o La mayoría tienen oculares de 10 a 15X y objetivos de 10 a 100X.
Con los objetivos de 100X se usa el aceite de inmersión..
o Es la resolución y no el aumento la que dicta los límites que pueden
ser observados
MO compuesto corriente

10. Partes de un MO compuesto corriente
• Sistema o parte
mecánica:
o Pie o base
o Columna o brazo.
o Tubo
o Revólver
o Platina
o Tornillo ( anillo )
micro y macrométrico
• Sistema o parte óptica
( lentes)
o Ocular
o Objetivo/s
• Sistema de iluminación:
o Fuente de luz
o Condensador

11. Microscopio de campo oscuro
La única luz que entra en el objetivo es la
dispersada por la muestra
Los organismos se ven brillantes sobre fondo
oscuro y es útil para estudiar la movilidad de los
organismos
Microscopio de fluorescencia:
Para muestras capaces de emitir fluorescencia
emitiendo luz dentro del espectro visible cuando
es expuesta a la luz UV

12. Microscopio de contraste de fases
Se basa en que las células poseen
diferentes índices de refracción y
producen un desvío de los rayos de luz
que da lugar a una imagen oscura sobre
fondo brillante
Se usa para aumentar el contraste entre
las partes claras y oscuras de las células
sin colorear. Es ideal para especímenes
delgados, o células aisladas
Microscopio de contraste de
interferencia diferencial (DIC)
Usa dos rayos de luz polarizada y las
imágenes aparecen como si la célula
estuviera proyectando sombras hacia
un lado.

13. Microscopio electrónico
• Menor límite de resolución y mayor aumento que los
microscopios ópticos
• Permite visualizar la ultra estructura celular ( organelas,
citoesqueleto, membrana plasmática)
• Utiliza un haz de electrones en reemplazo del haz de luz
• Se trabaja sobre cortes ultra finos
• Las imágenes se proyectan sobre una pantalla

14. Microscopia de un alga roja
antes de formar su pared
Microscopio electrónico de transmisión

15. Se usa para estructuras internas .
Limite de resolución de 2 nm
Permite observar las profundidad de las
muestras, después de haber sido fijadas
y teñidas con iones de metales pesados
para mejorar el contraste.
El haz de electrones pasa a través de
una fina sección del espécimen y los
electrones son detectados, dispersados
y proyectados hacia una imagen sobre
una pantalla fluorescente.
Microscopio electrónico de transmisión (MET)

16. Óvulo de hamster con
espermatozoides
Criofractura de epitelio gástrico vista
por microscopia de barrido
Microscopio electrónico de barrido

17. Se usa para estructuras externas.
Límite de resolución 2 nm.
Permite observar la superficies de las
muestras, después de haber sido
fijadas y teñidas con iones de metales
pesados.
El haz de electrones barre la
superficie y los electrones son
detectados, desviados y proyectados
en una pantalla para producir una
imagen.
Microscopio electrónico de barrido (MEB)